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- YLKbio
- 上海
- YLK-040SH
- 2025年07月14日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
2-8℃
- 保质期：
3个月
- 英文名：
nithine-δ-aminotransferase ,δ-OAT
- 库存：
55
- 供应商：
优利科（上海）生命科学有限公司
- CAS号：
/
- 规格：
50管/48样
分光光度法50管/48样
注 意： 正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义
脯氨酸是植物体内适应逆境胁迫的一种重要的渗透调节物质。高等植物中脯氨酸代谢因其初始底物不同，分为谷氨酸( Glu) 和鸟氨酸( Orn) 两条合成途径。鸟氨酸转氨酶( δ-OAT) 是 是以鸟氨酸为前体合成脯氨酸途径的关键酶，对植物适应逆境胁迫起关键作用。
测定原理
鸟氨酸和α-酮戊二酸在鸟氨酸转氨酶和NADH作用下发生氨基转移反应生成P5C，同时产生NAD，通过检测340nm处的吸光度的变化可反映出鸟氨酸转氨酶活性的高低。
自备实验用品及仪器
天平、低温离心机、研钵、紫外可见分光光度计、1mL石英比色皿。
试剂组成和配制
提取液：液体55mL×1瓶，4℃保存。
试剂一：液体70 mL×1瓶，4℃保存。
试剂二：粉剂×1瓶，4℃保存；临用前加20mL试剂一充分溶解；用不完的试剂4℃保存。
试剂三：粉剂×1瓶，4℃保存；临用前加20mL试剂一充分溶解；用不完的试剂4℃保存。
试剂四：粉剂×2瓶，-20℃保存；临用前每瓶加10mL试剂一充分溶解；现配现用。
鸟氨酸转氨酶(nithine-δ-aminotransferase ,δ-OAT)试剂盒产品图片展示：
酶液提取
- 组织：按照质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g，加入1mL提取液）加入提取液，冰浴匀浆后于4℃，10000g离心10min，取上清置冰上待测。
- 细胞：按照细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后4℃，10000g离心10min，取上清置冰上待测。
- 液体：直接检测。
- 分光光度计预热30min，调节波长至340nm。
- 将配好的试剂二、三、四37℃预热5min。（注意：粉剂试剂需要自行配制）
- 取1mL石英比色皿，依次加入300μL试剂二，300μL试剂三，300μL试剂四，100μL粗酶液，充分混匀，记录340nm处初始吸光值和37℃反应10min的吸光值A2，△A=A1-A2。
（1）按照样本蛋白浓度计算
酶活单位定义：每毫克组织蛋白每分钟消耗1 nmol的NADH定义为一个酶活力单位。
δ-OAT（nmol/min /mg prot）=ΔA÷（ε×d）×V反总÷(V样×Cpr) ÷T
=160.77×ΔA÷Cpr
（2）按照样本质量计算
酶活单位定义：每克组织每分钟消耗1 nmol的NADH定义为一个酶活力单位。
δ-OAT（nmol/min /g 鲜重）=ΔA÷（ε×d）×V反总÷(W ×V样÷V样总) ÷T
=160.77×ΔA÷W
（3）按照细胞数量计算
酶活单位定义：每104个细胞每分钟消耗1 nmol的NADH定义为一个酶活力单位。
δ-OAT（nmol/min /104 cell）= ΔA÷（ε×d）×V反总÷(V样×细胞数量÷V样总) ÷T
=160.77×ΔA÷细胞数量
（4）按照液体体积计算
酶活单位定义：每毫升液体每分钟消耗1 nmol的NADH定义为一个酶活力单位。
δ-OAT（nmol/min /mL）＝ΔA÷（ε×d）×V反总÷V样÷T
=160.77×ΔA
V反总：反应体系总体积，1mL；ε：NADH摩尔消光系数，6.22×103 L / mol /cm；d：比色皿光径，1cm；V样：加入样本体积，0.1mL；V样总：加入提取液体积，1mL；T：反应时间，10 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g
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文献和实验H2 NCH2 CH2 CH2 CH（ NH2 ） COOH，是一种碱性氨基酸。虽在蛋白质中不能找到，但存在于短杆菌酪肽、短杆菌肽 S等的抗菌性肽中，另外从深山紫堇根中发现了δ -N-乙酰鸟氨酸。是由精氨酸为碱或精氨酸酶作用分解生成。作为尿素循环的一部分与尿素生成相关，在代谢上具有重要的作用。在生物体内与精氨酸、谷氨酸、脯氨酸能相互转变，可与α -酮酸、乙醛酸进行氨基转移，在鸟氨酸脱羟酶作用下脱羧而生成胺（丁二胺），丁二胺能进一步合成至多胺。在鸟类中它与 2分子的苯甲酸或苯乙
，不能得到足够的菌量来抽提质粒，摇菌时间一般 12-14 小时为宜。 ③质粒属于低拷贝类型，导致收集的细菌量过少。 ④提取时菌量过多：容易导致裂解不充分，且容易超过硅胶膜柱的承载上限，最终使得质粒提取效率降低，建议参考提取试剂盒建议的菌液量来提取。 ⑤质粒提取实验操作不当：比如在加入缓冲液重悬菌体时，菌体没有充分分散悬浮，导致后续裂解不充分。为指示菌体是否充分裂解，可以考虑在重悬缓冲液中加入指示剂（QIAGEN 质粒提取试剂盒中均有配备 LyseBlue 指示剂），均匀蓝色指示悬浮充分。 ⑥试剂使用
谷氨酸半醛(glutamate－5－semialdehyde)在鸟氨酸－δ－氨基转移酶(ornithine－δ－amino－transferase)催化下直接转氨生成鸟氨酸。 图7-23 由谷氨酸生成脯氨酸、鸟氨酸和精氨酸 3.丝氨酸、半胱氨酸和甘氨酸由三磷酸甘油生成。丝氨酸由糖代谢中间产物3－磷酸甘油经三步反应生成。(1)3－磷酸甘油酸在3－磷酸甘油酸脱氢酶催化下生成了一磷酸羟基丙酮酸(3－phosphohydroxypyruvate)。(2)由谷氨酸提供氨基经转氨
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