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超氧阴离子(Oxygen free radical, OFR

)试剂盒
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  • ¥500
  • YLKbio
  • 上海
  • YLK-011SH
  • 2025年07月10日
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    • 保质期

      3个月

    • 英文名

      Oxygen free radical, OFR

    • 库存

      60

    • 供应商

      优利科(上海)生命科学有限公司

    • CAS号

      /

    • 规格

      50管/48样

    超氧阴离子(Oxygen free radical, OFR)试剂盒产品介绍:

    分光光度法50管/48样

    注    意:正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
    测定意义:
    生物体内超氧阴离子等活性氧具有免疫和信号传导的作用,但积累过多时会对细胞膜及生物大分子产生破坏作用,导致机体细胞和组织代谢异常,从而引起多种疾病。

    测定原理:
    超氧阴离子与盐酸羟胺反应生成NO2-,NO2-在对 
    Sulfanilic acid 和 α-萘胺的作用下,生成红色的偶氮化合物,在530nm处有特征吸收峰,根据ΔA值可以计算样品中O2-含量,反应式为NH2OH + 2O2- +H+ → NO2- + H2O2 + H2O。

    自备实验用品及仪器:
    天平、水浴锅、离心机、可见分光光度计、1 mL玻璃比色皿、氯仿和蒸馏水。

    试剂组成和配制:
    提取液:液体100mL×1瓶,4℃保存。
    试剂一:液体25mL×1瓶,4℃保存。
    试剂二:液体20mL×1瓶,4℃避光保存。
    试剂三:液体20mL×1瓶,4℃避光保存。
    试剂四:氯仿,自备。


    超氧阴离子(Oxygen free radical, OFR)试剂盒相关图片展示:
    产品细节图片1
    产品细节图片2


    超氧阴离子提取:
    1.植物、动物组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL提取液)进行冰浴匀浆,然后10000g,4℃,离心20min,取上清置于冰上待测。
    2.细菌、真菌:按照细胞数量(104个):提取液体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细胞加入1mL提取液),冰浴超声波破碎细胞(功率300w,超声3秒,间隔7秒,总时间3min);然后10000g,4℃,离心20min,取上清置于冰上待测。
    3.
    血清或培养液:直接测定。
    测定操作表:
      空白管 测定管
    样本(μL)   500
    提取液(μL) 500  
    试剂一(μL) 400 400
    混匀,37℃水浴20min
    试剂二(μL) 300 300
    试剂三(μL) 300 300
    混匀,37℃水浴20min
    试剂四(μL) 500 500
    混匀,8000g,25℃,离心5min,小心吸取上层水相1mL, 1mL玻璃比色皿,蒸馏水调零,测定A530。ΔA=A测定-A空白,空白管只要做一管。

    超氧阴离子含量计算公式:
    标准曲线:y = 0.0242x - 0.0027,R2=0.9980
    1. 组织:
    (1)按照样本质量计算
    超氧阴离子含量(nmol/g 鲜重)= (ΔA +0.0027)÷0.0242×V反总÷(V样÷V样总×W)×2
                                 =148.76×(ΔA +0.0027)÷W
    超氧阴离子产生速率(nmol/ g·min)=148.76×(ΔA+0.0027)÷W÷T
                                    =7.44× (ΔA +0.0027)÷W
    (2)按照蛋白质浓度计算
    超氧阴离子含量(nmol/mg prot)= (ΔA+0.0027)÷0.0242×V反总÷(V样×Cpr)×2
                                                 =148.76×(ΔA+0.0027)÷Cpr
    超氧阴离子产生速率(nmol/ mg prot·min)= 148.76×(ΔA+0.0027)÷Cpr÷T
                                          =7.44× (ΔA+0.0027)÷Cpr
    2. 细菌,真菌:
    超氧阴离子含量(nmol/104 cell)= (ΔA+0.0027)÷0.0242× V反总÷(V样÷V样总×细胞数量)×2
    = 148.76×(ΔA+0.0027)÷细胞数量
    超氧阴离子产生速率(nmol/104 cell·min)= 148.76×(ΔA+0.0027)÷细胞数量÷T
    =7.44× (ΔA+0.0027)÷细胞数量
    3. 血清或培养液
    超氧阴离子 含量(nmol/mL)= (ΔA+0.0027)÷0.0242×V反总÷V样×2
    =148.76× (ΔA+0.0027)
    超氧阴离子产生速率(nmol/mL·min)= 148.76× (ΔA+0.0027) ÷T
    = 7.44× (ΔA+0.0027)
    V样总:加入提取液体积,1 mL; V反总:反应总体积,0.9mL;V样:反应中样品体积,0.5mL;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样品质量,g;T:反应时间,20min;2: 2分子O2-参与反应生成1分子NO2-。
    注意事项:
    1.
    吸光值大于2,样品适当稀释再测定,注意计算公式里乘以稀释倍数。
    2.
    样品制备好之后,立刻进行测定,请勿将样品进行长时间的低温保存,以免影响测定结果。
    3.试剂四有一定的毒性,请操作时做好防护措施。
    产品细节图片3
    产品细节图片4

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