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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件:
2-8℃
- 保质期:
3个月
- 英文名:
Oxygen free radical, OFR
- 库存:
60
- 供应商:
优利科(上海)生命科学有限公司
- CAS号:
/
- 规格:
50管/48样
分光光度法50管/48样
注 意:正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义:
生物体内超氧阴离子等活性氧具有免疫和信号传导的作用,但积累过多时会对细胞膜及生物大分子产生破坏作用,导致机体细胞和组织代谢异常,从而引起多种疾病。
测定原理:
超氧阴离子与盐酸羟胺反应生成NO2-,NO2-在对 Sulfanilic acid 和 α-萘胺的作用下,生成红色的偶氮化合物,在530nm处有特征吸收峰,根据ΔA值可以计算样品中O2-含量,反应式为NH2OH + 2O2- +H+ → NO2- + H2O2 + H2O。
自备实验用品及仪器:
天平、水浴锅、离心机、可见分光光度计、1 mL玻璃比色皿、氯仿和蒸馏水。
试剂组成和配制:
提取液:液体100mL×1瓶,4℃保存。
试剂一:液体25mL×1瓶,4℃保存。
试剂二:液体20mL×1瓶,4℃避光保存。
试剂三:液体20mL×1瓶,4℃避光保存。
试剂四:氯仿,自备。
超氧阴离子(Oxygen free radical, OFR)试剂盒相关图片展示:


超氧阴离子提取:
1.植物、动物组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL提取液)进行冰浴匀浆,然后10000g,4℃,离心20min,取上清置于冰上待测。
2.细菌、真菌:按照细胞数量(104个):提取液体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细胞加入1mL提取液),冰浴超声波破碎细胞(功率300w,超声3秒,间隔7秒,总时间3min);然后10000g,4℃,离心20min,取上清置于冰上待测。
3.血清或培养液:直接测定。
测定操作表:
| 空白管 | 测定管 | |
| 样本(μL) | 500 | |
| 提取液(μL) | 500 | |
| 试剂一(μL) | 400 | 400 |
| 混匀,37℃水浴20min | ||
| 试剂二(μL) | 300 | 300 |
| 试剂三(μL) | 300 | 300 |
| 混匀,37℃水浴20min | ||
| 试剂四(μL) | 500 | 500 |
| 混匀,8000g,25℃,离心5min,小心吸取上层水相1mL, 1mL玻璃比色皿,蒸馏水调零,测定A530。ΔA=A测定-A空白,空白管只要做一管。 | ||
超氧阴离子含量计算公式:
标准曲线:y = 0.0242x - 0.0027,R2=0.9980
1. 组织:
(1)按照样本质量计算
超氧阴离子含量(nmol/g 鲜重)= (ΔA +0.0027)÷0.0242×V反总÷(V样÷V样总×W)×2
=148.76×(ΔA +0.0027)÷W
超氧阴离子产生速率(nmol/ g·min)=148.76×(ΔA+0.0027)÷W÷T
=7.44× (ΔA +0.0027)÷W
(2)按照蛋白质浓度计算
超氧阴离子含量(nmol/mg prot)= (ΔA+0.0027)÷0.0242×V反总÷(V样×Cpr)×2
=148.76×(ΔA+0.0027)÷Cpr
超氧阴离子产生速率(nmol/ mg prot·min)= 148.76×(ΔA+0.0027)÷Cpr÷T
=7.44× (ΔA+0.0027)÷Cpr
2. 细菌,真菌:
超氧阴离子含量(nmol/104 cell)= (ΔA+0.0027)÷0.0242× V反总÷(V样÷V样总×细胞数量)×2
= 148.76×(ΔA+0.0027)÷细胞数量
超氧阴离子产生速率(nmol/104 cell·min)= 148.76×(ΔA+0.0027)÷细胞数量÷T
=7.44× (ΔA+0.0027)÷细胞数量
3. 血清或培养液
超氧阴离子 含量(nmol/mL)= (ΔA+0.0027)÷0.0242×V反总÷V样×2
=148.76× (ΔA+0.0027)
超氧阴离子产生速率(nmol/mL·min)= 148.76× (ΔA+0.0027) ÷T
= 7.44× (ΔA+0.0027)
V样总:加入提取液体积,1 mL; V反总:反应总体积,0.9mL;V样:反应中样品体积,0.5mL;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样品质量,g;T:反应时间,20min;2: 2分子O2-参与反应生成1分子NO2-。
注意事项:
1.吸光值大于2,样品适当稀释再测定,注意计算公式里乘以稀释倍数。
2.样品制备好之后,立刻进行测定,请勿将样品进行长时间的低温保存,以免影响测定结果。
3.试剂四有一定的毒性,请操作时做好防护措施。


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