10×快速转膜液

快速转膜液使用独特配方,能高效快速地将蛋白转移到印迹膜(PVDF膜或NC膜).上。 使用湿转法(Tank blot) 或半干转法(Semi-dry blot)方法,能在10-40 min完成转膜过程。

快速和环保：快速转膜液不使用甲醇,减轻了对实验者和环境的伤害。

兼容性好：快速转膜液能兼容L aemmli胶,预制胶, Bis-Tris胶等多种凝胶。

转移效率高：快速转膜液对分子量跨度较大的蛋白也有很好的转移效率,有效解决了大小蛋白不能在同- -张膜上同时转移的问题。

使用说明

转膜前的准备: 

裁好的滤纸;裁好的转印膜; 1x快速转膜液; 无水甲醇(处理PVDF膜用) ;无水乙醇

一、湿转法(Tank blot) :

1、按照下表配制1x快速转膜液:

	1x快速转膜液配制量
	100ml	500ml	1000ml
10x快速转膜液	10ml	50ml	100ml
无水乙醇	20ml	100ml	200ml
超纯水	70ml	350ml	700ml

2、将滤纸和海绵浸泡在1x快速转膜液中，完全浸湿，平衡5分钟。

3、 PVDF膜使用前要用无水甲醇润湿30秒，随后浸泡在1x快速转膜液中，完全浸湿平衡5分钟。

4、将凝胶在超纯水中浸泡漂洗2分钟，去除胶表面的SDS;随后将凝胶浸泡在1x快速转膜液中。.

注:水中漂洗时间- -定不能超过2分钟，否则分子量较大的蛋白不能完全转移。

5、按照以下顺序做好转印三明治结构: 

负极(阴极)

海绵

滤纸

凝胶

转印膜

滤纸

海绵

正极(阳极)

注:①要彻底清除三明治结构中的气泡，适当补加1x快速转膜液保持三明治结构湿润。

     ②三明治结构太紧和太松都会影响转印效果。如果太紧，可以去除阳极- -侧的海绵或滤纸。

6、将三明治结构放于转移槽中，转印槽中灌满1x快速转膜液。

7、湿转推荐使用恒流转移: 

	恒电流	转移时间	降温措施
一张膜	375mA	35-40min	不需要
两张膜	375mA	35-40min	需要

 

二、半干转(Semi dry blot) :

1、按照下表配制1x快速转膜液: 

	1x快速转膜液配制量
	100ml	500ml	1000ml
10x快速转膜液	10ml	50ml	100ml
无水乙醇	20ml	100ml	200ml
超纯水	70ml	350ml	700ml

2、将滤纸和海绵浸泡在1x快速转膜液中，完全浸湿。

3、PVDF膜使用前要用无水甲醇润湿30秒，随后浸泡在1x快速转膜液中，完全浸湿，平衡5分钟。

4、将凝胶在超纯水中浸泡漂洗2分钟，去除胶表面的SDS;随后将凝胶浸泡在1x快速转膜液中。

注:水中漂洗时间一定不能超过2分钟，否则分子量较大的蛋白不能完全转移。

5、按照以下顺序做好转印三明治结构:

负极(阴极)

下层滤纸

凝胶

转印膜

上层滤纸

正极(阳极)

注意：半干转时，滤纸、胶、膜之间的大小，一般是下层滤纸≥膜≥胶≥上层滤纸。上 下两层滤纸-定不能接触;滤纸、胶、膜之间千万不能有气泡。接触的滤纸和气泡会造成短路。

6、半干转推荐使用恒压转移: 25V, 10-20 分钟。

问题解决

问题	可能原因	解决办法
转膜不充分	湿转转移槽铂金丝有盐沉积	彻底用超纯水清洗转移槽
转膜不充分	转移膜，滤纸，凝胶没有在1x转移缓冲液中彻底平衡	转移膜，滤纸，凝胶要在1x快速转膜液中平衡5分钟，震荡平衡更好
转膜不充分	PVDF膜没有用甲醇预处理	PVDF膜要用甲醇彻底润湿，然后在1x快速转膜缓冲液中平衡5分钟
转膜不充分	转膜时间不充分	适当延长转膜时间
不连续的转膜	凝胶和膜之间有气泡	转膜三明治做好后，用滚轴把凝胶和膜之间的气泡赶走
不连续的转膜	PVDF膜没有用甲醇预处理	PVDF膜要用甲醇润湿，然后在1x快速转膜缓冲液中平衡3-5分钟
转膜设备不工作	电泳电源不配套	电泳电源要符合以下参数: 300w, .5-300V，0.01-3A