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- 2025年07月16日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
23
- 英文名：
WB Transfer Buffer,10×
- 保质期：
详见说明书
- 供应商：
上海博湖
- 保存条件：
详见说明书
- 规格：
瓶
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根皮苷 60-81-1 HPLC≥98%;20mg 订购|咨询
产品名称：10×电泳转移缓冲液（转膜液）
别名 转膜液 电转液
英文名称 WB Transfer Buffer,10×
储存条件 RT,有效期1年
单位 瓶
Solarbio开发的10×电泳转移缓冲液是用于蛋白印迹实验（Western blotting）中湿法以及半干法电泳转膜的缓冲试剂。本产品按常规方法配制而成，为10×浓缩液，不含SDS和甲醇，便于储存、操作简便。
组份浓度：
250mM Tris，1.92 M Glycine
使用说明：
本产品为10×浓缩液，临用前按下述步骤稀释：
1.取100mL 的10×电泳转移缓冲液，加入200 mL无水甲醇混匀。
2.加入蒸馏水或去离子水，定容至1L，混匀后即可使用。
3.新配制的1×电泳转移缓冲液工作液室温可保存两周左右。
4.本产品不含SDS，蛋白分子量较大或者疏水性较强时，为增加转膜效果，可适当添加少量SDS（参考工作浓度为0.025-0.1%）。
| 产品名称 | 10×电泳转移缓冲液（转膜液） |
| 英文名称 | WB Transfer Buffer,10× |
| 货号 | BH-DB6537 |
操作步骤：
Ⅰ 实体组织蛋白的提取
1． 在每1mL 冷Lysis Buffer加入10 μL磷酸酶抑制剂， 1 μL蛋白酶抑制剂和 5μL 100mM PMSF，混匀。冰上保存数分钟待用。
2． 每100mg固体组织置于培养皿中，手术剪剪碎成3mm×3mm左右的小块，加入0.5～1 mL冷 Lysis Buffer，玻璃匀浆器上下手动匀浆15次，注意低温操作；
3． 取组织匀浆液转移到1.5mL预冷的离心管，离心10000转/分，4℃离心5 min；
4． 取上清转移至新的预冷的离心管中，即为全蛋白提取物，蛋白定量（Bradford法、BCA法）；
5． 分装保存于-70℃,避免反复冻融。
Ⅱ 培养细胞蛋白提取
1． 贴壁培养的细胞，吸去培养基后，加入10mL/150mm培养板的冷PBS洗两次，每次振摇数次以尽量去除培养液；
2． 悬浮培养的细胞或用细胞刮子刮下的贴壁细胞，将细胞及培养液移至离心管中， 1000转/分离心10 min，再用10mL/150mm培养板的冷PBS，1000转/分离心5 min洗两次；
3． 在每 1mL冷 Lysis Buffer加入10μL磷酸酶抑制剂， 1μL蛋白酶抑制剂和5μL 100mM PMSF，混匀。冰上保存数分钟待用。
4． 细胞洗涤后，转至新的预冷的离心管中，加入上述配制好的冷Lysis Buffer，加入量如下表所示：
| 细胞数量 | Lysis Buffer加入量 |
| 107个 | 0.5 mL～1 mL |
| 5×106个 | 0.2 mL～0.5 mL |
6． 14,000rpm，4℃离心15min，取上清为全蛋白提取物, 蛋白定量（Bradford法、BCA法）；
7． 分装保存于-70℃,避免反复冻融。
固定液的应用：
1．单纯固定液(1)4％中性甲醛固定液：zui常用的固定液，能满足常规HE及免疫组化、PCR等工作。一般无特殊要求的病理标本均适用。尤其值得注意的是，中性甲醛是以pH7 2～7 4的磷酸缓冲液为溶剂配制的，其固定效果及对组织抗原性的保存均优于一般的4％甲醛固定液。此固定液配制后应密封…
1．单纯固定液
(1)4％中性甲醛固定液：zui常用的固定液，能满足常规HE及免疫组化、PCR等工作。一般无特殊要求的病理标本均适用。尤其值得注意的是，中性甲醛是以 pH 7.2～7.4的磷酸缓冲液为溶剂配制的，其固定效果及对组织抗原性的保存均优于一般的4％甲醛固定液。此固定液配制后应密封并保存在阴凉处，保存时间不 超过一个月。
(2)乙醇固定液：使用时以80％～95％的浓度为宜，具有硬化、固定、脱水等作用，对组织渗透力较弱，因此很少单独使用，但其保存组织中的核酸强于中性甲醛，故常用于有核酸操作的实验或检查，如果用于证明尿酸结晶和保存糖原，可用100%乙醇固定组织。
(3)4％的多：主要用于培养细胞的固定。
2．混合固定液
(1)乙醇一甲醛(乙醇－福尔马林，AF)固定液：适用于皮下组织中肥大细胞的固定。该固定液有固定兼脱水作用，固定后的标本可直接入95％乙醇脱水。
(3)Bouin固定液：特别适用于睾丸活检组织的固定。Bouin液对组织固定较均匀，收缩很少，不会使组织变硬变脆。需现配现用。
(4)Carnoy固定液：穿透能力强，可很好的固定细胞质和细胞核，特别适合于固定外膜致密的组织，亦适用于糖原及尼氏小体的固定。
(5)Zenker固定液：经此液固定的标本，细胞核和细胞质染色颇为清晰，但成本较昂贵且需特殊处理汞。该固定液要避免接触阳光，以免引起化学变化而失效
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文献和实验过硫酸胺 0.1 g ，加超纯水1.0 mL 溶解后，4 ℃ 保存，保存时间为 1 周。（-20 ℃长期保存） 30% 丙烯酰胺 溶于总体积为 50 mL 的水中，定容至 100 mL。室温保存于棕色瓶。 10× PBS（2L） NaOH 调 pH 值至 7.4，定容至 2 L。保存于室温。 还原型 5×SDS 上样缓冲液 混匀后，分装于 1.5 mL 离心管中，4 ℃ 可保存数周，-20 ℃ 可长期保存。 电泳液缓冲液 加蒸馏水溶解定容至 1000 mL 室温保存，1 次溶液可重复
80 V)要低于分离胶电泳电压(建议 110-150 V)，以达到更好的浓缩效果，使样品进入分离胶时被压缩在同一水平线上。电泳直至溴酚蓝染料前沿下至凝胶末端处停止电泳，电泳时间约 2-3 小时。 电转（湿转法） 1） 电泳结束后取出凝胶，在电泳缓冲液中（冷藏的）漂洗数秒。按“三明治”模式，打开电转印夹，每侧垫上一块专用的转膜液浸泡透的海绵垫，再各放一块转膜液浸透的蛋白转移垫(定性滤纸），将凝胶平放在阴极侧滤纸上，最后将转膜液浸透并事先用甲醇浸泡的 PVDF 膜平放在凝胶上，去除气泡，夹好电
1-3 张用转移缓冲液浸泡过的滤纸，逐张叠放，对齐，然后用一玻璃棒作滚筒以挤出所有气泡，必要时可滴加转膜液润湿。 c. 取出浸在转膜液中的凝胶平放于滤纸上。排除所有气泡。 d. 把硝酸纤维素滤膜放在聚丙烯酰胺凝胶上，在硝酸纤维素滤膜与聚丙烯酰胺凝胶之间不留有气泡。 e. 把最后 1-3 张滤纸放在硝酸纤维素滤膜上方，同样须确保不留气泡。其实，用玻棒给点压力很容易排除气泡。 f. 放上另一张或几张海绵垫片，盖上阳极板，夹紧。保证对凝胶有一定的压力。 4）连接电源。我做 90KD 的蛋白
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