- ￥1095
- AAT Bioquest
- 22042
- 2025年07月29日
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- 详细信息
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- 文献和实验
- 技术资料
- CAS号：
22042
- 供应商：
研卉生物
- 英文名：
Insulin Like Growth Factor 1 (IGF1)
- 库存：
大量
- 保存条件：
低温
- 规格：
25mg
货号：22042
颜色：绿色
细胞膜荧光探针DiOC16(3),高氯酸盐是美国AAT Bioquest生产的用于细胞膜检测的荧光探针，DiI，DiO，DiD和DiR染料是亲脂性荧光染料家族，用于标记膜和其他疏水结构。这些环境敏感型染料掺入膜中或与亲脂性生物分子（如蛋白质）结合后，其荧光强度会大大提高，尽管它们在水中的荧光性很弱。它们具有高消光系数，极性相关的荧光和较短的激发态寿命。一旦应用于细胞，这些染料就会在细胞质膜内横向扩散，从而以浓度对整个细胞进行均匀染色。DiI（橙色荧光），DiO（绿色荧光），DiD（红色荧光）和DiR（深红色荧光）不同的荧光颜色为活细胞的多色成像和流式细胞分析提供了方便的工具。DiO和DiI可以分别与标准FITC和TRITC滤波器一起使用。其中DiD被633 nm He-Ne激光充分激发，并且激发和发射波长比DiI长得多，为标记具有显着内在荧光的细胞和组织提供了有价值的替代方法。由于红外光通过细胞和组织的有效透射以及红外范围内的低水平自发荧光，DiR可用于体内成像或示踪。
为您提供优质的细胞膜荧光探针DiOC16(3),高氯酸盐。
| Di系列染料 | 特点 | 选择建议 |
| DiO染料（绿色） | 活细胞或固定细胞、组织的的长期示踪剂。荧光强度低于DiI。对某些固定组织的染色效果一般。 | DiI, DiO, DiD 和 DiR均可染色活细胞或固定细胞及组织（请您根据您的需求选择相应的探针），DiI比DiO荧光更亮；DiD，DiR波长更长，更适合组织染色； |
| DiA染料（绿色） | 一种细胞膜绿色荧光染料，它在细胞膜中的扩散速度比 DiO 快，并且经常和 DiI 一起使用于细胞膜双色标记。可以进行染色后的固定。DiA 对固定细胞的染色效果比 DiO 好。 | |
| DiI染料（橙色） | 活细胞或固定细胞、组织的的长期示踪剂。除标记细胞膜外，还可以检测细胞的融合和粘附、细胞迁移等。 | |
| DiB染料（橘色） | 一种检测细胞膜电位的亲脂性阴离子荧光染料，它本身无荧光，当进人细胞与胞浆内的蛋白质结合后才发出荧光。当它进入细胞后，指示细胞内荧光强度增加，即膜电位增加表示细胞去极化；反之，若细胞内荧光强度降低，即膜电位降低表示细胞超极化。 | |
| DiD染料（红色） | 染色效率高，均一，不易猝灭，细胞毒性低，背景干扰小。 | |
| DiS染料（红色） | 一种细胞膜红色荧光染料，它在细胞膜中的扩散速度比 DiD快，可以进行染色后的固定。DiS 对固定细胞的染色效果比 DiD好。 | |
| DiR染料（深红色） | 常用于标记细胞膜，红外荧光可以穿透细胞和组织，在活体成像中用来示踪。DiR可以进行染色后的固定。 |
操作方法
1.准备DiO，DiI，DiD，DiS或DiR膜染色溶液：
1.1制备DMSO或EtOH储备溶液：储备溶液应在DMSO或EtOH中以1-5mM制备。
注意：储备溶液的未使用部分应储存在-20 ℃。 避免反复冻/融循环。
1.2准备工作溶液：将储备溶液（步骤1.1）稀释到合适的缓冲液中，如无血清培养基，HBSS或PBS制备1至5μM的工作溶液。
注意：对于不同的细胞类型和/或实验条件，应根据经验确定工作溶液的浓度。 建议在至少超过十倍范围的浓度下进行测试。
2.将细胞染成悬浮液：
2.1在染料工作溶液中悬浮细胞密度为1×106 / mL（来自步骤1.2）。
2.2在37°C孵育2-20分钟。 孵育时间取决于细胞类型。 首先孵育20分钟，然后根据需要进行优化以获得均匀的标记。
2.3将标记的悬浮管以1000至1500rpm离心5分钟。
2.4取出上清液，轻轻地将细胞重新悬浮在预热（37°C）的生长培养基中。
2.5按步骤2.3和2.4洗涤两次。
3.染色贴壁细胞：
3.1在无菌玻璃盖玻片上培养贴壁细胞。
3.2从生长培养基中取出盖玻片，轻轻地排出多余的培养基。 将盖玻片放在湿度箱中。
3.3将100μL染料工作溶液（来自步骤1.2）吸移到盖玻片的角落，轻轻搅拌直至所有细胞都被覆盖。
3.4将盖玻片在37°C孵育2-20分钟。 孵育时间取决于细胞类型。 首先孵育20分钟，然后根据需要进行优化以获得均匀的标记。
3.5排出染料工作溶液，用生长培养基清洗盖玻片2-3次。每个洗涤循环用预热的生长培养基覆盖细胞，孵育5-10分钟后排出培养基。
4.显微镜检测：
4.1说明书中的表1总结了DiD，DiO，DiI，DiS和DiR滤波器组的选择。
4.2为了同时检测多种染料，可提供如下多波段滤波器组：
a）DiI和DiO = Omega XF52，Chroma 51004
b）DiI和DiD = Omega XF92，Chroma 51007
c）DiI，DiO和DiD = Omega XF93，Chroma 61005
5.流式细胞仪检测：
用DiO，DiI，DiD，DiS和DiR标记的细胞可分别使用常规FL1，FL2，FL3和FL4流式细胞仪检测通道进行分析。
您可以使用以下任何一种亲脂性荧光染料标记膜和其他疏水结构，例如外泌体：
- DiOC16（3）高氯酸盐–大Abs / Em = 482/500 nm
- 细胞膜荧光探针DiI,高氯酸盐–大Abs / Em = 549/563 nm
- 细胞膜荧光探针DiD,高氯酸盐–大Abs / Em = 645/663 nm
- 细胞膜荧光探针DiR,碘化物-大Ab / Em = 754/778 nm
DiO（绿色荧光），DiI（橙色荧光），DiD（红色荧光）和DiR（深红色荧光）的独特荧光颜色为多色成像和流式细胞仪分析提供了方便的工具。
参考文献
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文献和实验参考文献
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性 未除尽的PKH会弥散进入细胞，同时标记细胞膜，引起观测的假阳性（Fig.2）。PKH染色下，本应仅可见外泌体的荧光探针同样表现出了细胞膜轮廓； Fig.2 EvLINK和PKH标记外泌体的荧光共聚焦拍照 3. 二次标记造成的假阳性 由于外泌体膜与细胞膜结构的相似性，常规染料标记的外泌体在被细胞摄取后一旦脱落，会二次标记细胞膜带来非外泌体荧光信号； 4. 非外泌体标记造成的假阳性 PKH作为一款亲脂性染料，并不具备膜特异性，外泌体中的脂质颗粒状杂质
纯化试剂盒。 d、染料标记外泌体与细胞共轭的培养条件要求使用无血清细胞，以提高细胞染料标记外泌体的进食效率，共膀胱参考小时时长为2。 e、本染料也可用于细胞膜染色，参考剂量染料浓度为2X10 –6 M，细胞浓度为1X107 cells/mL。 f、基于以下两个原因，建议准备2倍于正常共皂实验必需的外泌体的量来进行染料标记。一是使用过量染料进行标记，外泌体的染色效率仍无法达到100%；二是去除游离染料的过程中存在外泌体回收率的损失。 21、关于外泌体荧光染料（DIR ）相关实验注意事项 a、活体理论外泌体浓度
作用。在哺乳动物的神经系统中，钙离子是一类重要的神经元胞内信号分子，神经元静息状态下，胞内钙离子浓度约为50-100nM，而当神经元活动的时候，胞内钙离子浓度能上升10-100倍，而钙离子对于突触囊泡释放必不可少；神经元在放电的时候会爆发出一个短暂的钙离子浓度高峰，这意味着神经元钙离子浓度表征突触传递和神经元活动。神经元钙离子浓度表征突触传递和神经元活动示意图因而，神经元钙离子成像技术的原理就是借助钙离子浓度与神经元活动之间的严格对应关系，利用特殊的荧光染料或者蛋白质荧光探针（钙离子指示
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