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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
33
- 英文名:
/
- CAS号:
/
- 保质期:
1年
- 供应商:
优利科(上海)生命科学有限公司
- 保存条件:
2-8℃
- 规格:
50管/24样
中文名称:辅酶ⅠNAD(H)含量测试盒
货号:YLK0102
测试方法:可见分光光度法
产品规格:50管/24样
正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定
测定意义:
辅酶ⅠNAD(H)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,NAD+是糖酵解(EMP)和三 羧酸循环(TCA)的主要氢受体,生成的 NADH 经呼吸电子链(ETC)传递把电子交给氧, 在合成 ATP 的同时,形成大量的 ROS,同时 NADH 再生为 NAD+。糖、脂、蛋白质三大代 谢物质分解中的氧化反应绝大部分通过这一体系完成。NAD(H)含量和 NADH/NAD+比值的 高低可用于评价糖酵解和 TCA 循环的强弱。较高的 NAD(H)及 NADH/NAD+比值说明细胞 呼吸耗氧量较高,处于过氧化状态。此外,NADH/NAD+比值升高也可抑制糖酵解和 TCA 循环。另外,NAD+降解产物对细胞信号传导、代谢和基因表达等具有重要的调控作用。
测定原理
分别用酸性和碱性提取液提取样品中 NAD+和 NADH,NADH 通过 PMS 的递氢作用,还原 氧化型噻唑蓝(MTT)为甲瓒,在 570nm 下检测吸光值;而 NAD+可被乙醇脱氢酶还原为 NADH,进一步采用 MTT 还原法检测。
本试剂盒仅供体外研究使用,不用于临床诊断!
需自备的仪器和用品
可见分光光度计、台式离心机、移液器、1 mL 玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
试剂的组成和配制
酸性提取液:液体 50mL×1 瓶,4℃保存;
碱性提取液:液体 50mL×1 瓶,4℃保存;
试剂一:液体 15 mL×1 瓶,4℃保存;
试剂二:液体 4 mL×1 瓶,4℃保存;
试剂三:粉剂×1 瓶,-20 ℃保存,用时加入 4mL 蒸馏水,混匀,用不完的试剂 4℃保存一周;
试剂四:粉剂×1 瓶,4 ℃保存,用时加入 4mL 蒸馏水,混匀,用不完的试剂 4℃保存一周;
试剂五:液体 1.8mL×1 支,4 ℃保存;
试剂六:液体 30mL×1 瓶,4 ℃保存;
试剂七:液体 50mL×1 瓶,4 ℃保存。
辅酶ⅠNAD(H)含量测试盒注意事项
1、如果一次性测定样本数较多,可将试剂一、二、三和四按比例配成混合液。
2、对照管和测定管的测定步骤的区别:对照管加完试剂一、二、三、四和五后必须马上加 试剂六;测定管加完试剂一、二、三、四和五后必须反应 20min 后再加试剂六。
3、反应过程中注意避光。
4、若 NAD+测定中△A(A2-A1)≤0.0302,NADH 测定中△A(A2-A1)≤0.0222,已低 于检测限,可做如下调整:(1)将测定管避光静置时间 20min 延长到 60min;(2)在提取 阶段增加取样量,即取 0.2g 样本或 0.2mL 样本加入 1mL 提取液。
5、由于每一个测定管需要设一个对照管,本试剂盒 50 管保证测 24 个 NAD+或 NADH。
NAD+和 NADH 含量的计算
(一) NAD+含量的计算
标准条件下的回归曲线为 y = 0.1475x + 0.0302,R2 = 0.9978;其中 y 为△A,x 为 NAD+浓度 nmol/mL
1、血清(浆)中 NAD+含量计算
NAD+含量(nmol/mL)=[(△A -0.0302)÷0.1475×V1) ]÷(V3×V1÷V2)=135.6×(△A -0.0302)
2、组织、细菌或细胞中 NAD+含量计算
(1)按样本蛋白浓度计算 NAD+ (nmol/mg prot)=[(△A -0.0302)÷0.1475×V1)]÷(V1×Cpr)= 6.8×(△A -0.0302)÷Cpr
(2)按样本鲜重计算 NAD+ (nmol/g 鲜重)= [(△A -0.0302)÷0.1475×V1)]÷(W×V1÷V2)= 13.6×(△A -0.0302)÷W (3)按细菌或细胞密度计算 NAD+ (nmol/104 cell)=[(△A -0.0302)÷0.1475×V1)]÷(500×V1÷V2)=0.027×(△A -0.0302)
(二)NADH 含量的计算
标准条件下的回归曲线为 y = 0.1404x + 0.0222,R2 = 0.9976;其中 y 为△A,x 为 NADH 浓 度 nmol/mL
1、血清(浆)中 NADH 含量计算 NADH 含量(nmol/mL)= [ (△A -0.0222)÷0.1404×V1) ]÷(V3×V1÷V2)= 142.5×(△A -0.0222)
2、组织、细菌或细胞中 NADH 含量计算
(1)按样本蛋白浓度计算 NADH (nmol/mg prot)= [ (△A -0.0222)÷0.1404×V1) ]÷(V1×Cpr)= 7.1×(△A -0.0222)÷Cpr
(2)按样本鲜重计算
NADH (nmol/g 鲜重)=[(△A -0.0222)÷0.1404×V1) ]÷(W×V1÷V2)= 14.2×(△A -0.0222)÷W
(3)按细菌或细胞密度计算
NADH (nmol/104 cell)= [ (△A -0.0222)÷0.1404×V1) ]÷(500×V1÷V2)=0.028×(△A -0.0222)
V1:加入反应体系中样本体积,0.02mL;
V2:加入提取液体积,2mL;
V3:加入血清(浆) 体积:0.1mL;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL; W:样本质量,g;500:细胞或细菌总数, 500 万。
注意:最低检测限为 0.1nmol/mL 或 0.1nmol/g 鲜重 或 0.001nmol/mg prot


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