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1年
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优利科(上海)生命科学有限公司
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2-8℃
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中文名称:乙醇脱氢酶(ADH)测试盒(微量法)
货号:YLK0121
测试方法:微量法
产品规格:100管/96样
正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定
测定意义:
ADH 是生物体内短链醇代谢的关键酶,催化乙醇与乙醛可逆转换,在很多生理过程中起着 重要作用。哺乳动物 ADH 主要在肝脏生成,肝脏损伤导致 ADH 释放到血清中。血清 ADH 活性高低反映了肝功能是否异常。
测定原理
ADH 催化 NADH 还原乙醛生成乙醇和 NAD+,NADH 在 340nm 处有吸收峰,而 NAD+没有; 测定 340nm 吸光度下降速率,来计算 ADH 活性。
本试剂盒仅供体外研究使用,不用于临床诊断!
需自备的仪器和用品
研钵、冰、低温离心机、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板、可调式移液器 和蒸馏水。
试剂组成和配制:
试剂一:液体×1 瓶,室温保存。
试剂二:液体×1 瓶,4℃保存。
试剂三:粉剂×2 瓶,-20℃保存,临用前每瓶加入 9mL 试剂二,现配现用。
试剂四:液体×1 支,4℃保存。
粗酶液提取:
1、 组织:按照组织质量(g):试剂一体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织, 加入 1mL 试剂一)进行冰浴匀浆。16000g,4℃离心 20min,取上清置冰上待测。
2、 细菌、真菌:按照细胞数量(104 个):试剂一体积(mL)为 500~1000:1 的比例(建 议 500 万细胞加入 1mL 试剂一),冰浴超声波破碎细胞(功率 300w,超声 3 秒,间隔 7 秒,总时间 3min);16000g, 4℃离心 20min,取上清液置冰上待测。
3、血清等液体:直接测定。
ADH 测定操作:
1. 分光光度计/酶标仪预热 30 min,调节波长到 340 nm,蒸馏水调零。
2. 试剂三在 25℃水浴中保温 30 min。
3. 在微量石英比色皿/96 孔板中依次加入 20μL 样本上清液、160μL 试剂三和 20μL 试剂四, 迅速混匀后于 340nm 测定吸光值变化,分别记录 15s 和 75s 时吸光值,分别记为 A1 和 A2。△A 测定管=A1-A2。


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