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- YLKBIO
- YLK0101
- 国产
- 2025年12月17日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
100
- 英文名：
Coenzyme I NAD (H)
- CAS号：
/
- 保质期：
1年
- 供应商：
优利科（上海）生命科学有限公司
- 保存条件：
2-8℃
- 规格：
100管/48样
中文名称：辅酶ⅠNAD(H)含量测试盒
货号：YLK0101
测试方法：微量法
产品规格：100管/48样
正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定
测定意义：
辅酶ⅠNAD(H)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，NAD+是糖酵解（EMP）和三 羧酸循环（TCA）的主要氢受体，生成的 NADH 经呼吸电子链（ETC）传递把电子交给氧， 在合成 ATP 的同时，形成大量的 ROS，同时 NADH 再生为 NAD+。糖、脂、蛋白质三大代 谢物质分解中的氧化反应绝大部分通过这一体系完成。NAD(H)含量和 NADH/NAD+比值的 高低可用于评价糖酵解和 TCA 循环的强弱。较高的 NAD(H)及 NADH/NAD+比值说明细胞 呼吸耗氧量较高，处于过氧化状态。此外，NADH/NAD+比值升高也可抑制糖酵解和 TCA 循环。另外，NAD+降解产物对细胞信号传导、代谢和基因表达等具有重要的调控作用。
测定原理 分别用酸性和碱性提取液提取样品中 NAD+和 NADH，NADH 通过 PMS 的递氢作用，还原 氧化型噻唑蓝（MTT）为甲瓒，在 570nm 下检测吸光值；而 NAD+可被乙醇脱氢酶还原为 NADH，进一步采用 MTT 还原法检测。
本试剂盒仅供体外研究使用，不用于临床诊断!
需自备的仪器和用品：
酶标仪、台式离心机、移液器、96 孔板、研钵、冰和蒸馏水。
试剂的组成和配制
酸性提取液：液体 50mL×1 瓶，4℃保存；
碱性提取液：液体 50mL×1 瓶，4℃保存；
试剂一：液体 10 mL×1 瓶，4℃保存；
试剂二：液体 3 mL×1 瓶，4℃保存；
试剂三：粉剂×1 瓶，-20 ℃保存，用时加入 3mL 蒸馏水，混匀，用不完的试剂 4℃保存一周；
试剂四：粉剂×1 瓶，4 ℃保存，用时加入 3mL 蒸馏水，混匀，用不完的试剂 4℃保存一周；
试剂五：液体 3.6mL×1 瓶，4 ℃保存；
试剂六：液体 30mL×1 瓶，4 ℃保存；
试剂七：液体 50mL×1 瓶，4 ℃保存。
辅酶ⅠNAD(H)含量测试盒注意事项
1、如果一次性测定样本数较多，可将试剂一、二、三和四按比例配成混合液。
2、对照管和测定管的测定步骤的区别：对照管加完试剂一、二、三、四和五后必须马上加 试剂六；测定管加完试剂一、二、三、四和五后必须反应 20min 后再加试剂六。
3、反应过程中注意避光。
4、若 NAD+测定中△A（A2-A1）≤0.0302，NADH 测定中△A（A2-A1）≤0.0222，说明 样本中辅酶含量较低，已低于检测限，可做如下调整：（1）将测定管避光静置时间 20min 延长到 60min；（2）在提取阶段增加取样量，即取 0.2g 样本或 0.2mL 样本加入 1mL 提取液。
5、由于每一个测定管需要设一个对照管，本试剂盒 100 管保证测 48 个 NAD+或 NADH.
NAD+和 NADH 含量的计算
（一） NAD+含量的计算
标准条件下的回归曲线为 y = 0.1475x + 0.0302，R2 = 0.9978；其中 y 为△A，x 为 NAD+浓度 nmol/mL
1、血清（浆）中 NAD+含量计算
NAD+含量(nmol/mL）=[(△A -0.0302）÷0.1475×V1) ]÷(V3×V1÷V2)=135.6×(△A -0.0302）
2、组织、细菌或细胞中 NAD+含量计算
(1)按样本蛋白浓度计算 NAD+ (nmol/mg prot）=[(△A -0.0302）÷0.1475×V1)]÷(V1×Cpr)= 6.8×(△A -0.0302）÷Cpr
(2)按样本鲜重计算 NAD+ (nmol/g 鲜重）= [(△A -0.0302）÷0.1475×V1)]÷(W×V1÷V2)= 13.6×(△A -0.0302）÷W (3)按细菌或细胞密度计算 NAD+ (nmol/104 cell）=[(△A -0.0302）÷0.1475×V1)]÷(500×V1÷V2)=0.027×(△A -0.0302）
（二）NADH 含量的计算
标准条件下的回归曲线为 y = 0.1404x + 0.0222，R2 = 0.9976；其中 y 为△A，x 为 NADH 浓 度 nmol/mL
1、血清（浆）中 NADH 含量计算 NADH 含量(nmol/mL）= [ (△A -0.0222）÷0.1404×V1) ]÷(V3×V1÷V2)= 142.5×(△A -0.0222）
2、组织、细菌或细胞中 NADH 含量计算
(1)按样本蛋白浓度计算 NADH (nmol/mg prot）= [ (△A -0.0222）÷0.1404×V1) ]÷(V1×Cpr)= 7.1×(△A -0.0222）÷Cpr
(2)按样本鲜重计算
NADH (nmol/g 鲜重）=[(△A -0.0222）÷0.1404×V1) ]÷(W×V1÷V2)= 14.2×(△A -0.0222）÷W
(3)按细菌或细胞密度计算
NADH (nmol/104 cell）= [ (△A -0.0222）÷0.1404×V1) ]÷(500×V1÷V2)=0.028×(△A -0.0222）
V1：加入反应体系中样本体积，0.02mL；
V2：加入提取液体积，2mL；
V3：加入血清（浆） 体积：0.1mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL； W：样本质量，g；500：细胞或细菌总数， 500 万。
注意：最低检测限为 0.1nmol/mL 或 0.1nmol/g 鲜重 或 0.001nmol/mg prot
如需了解更多有关于辅酶ⅠNAD(H)含量测试盒的信息或说明书敬请联系我们！期待与您的合作！
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文献和实验一、目的脂肪广泛存在于许多植物的种子和果实中，测定脂肪的含量，可以作为鉴别其品质优劣的一个指标。脂肪含量的测定有很多方法，如抽提法、酸水解法、比重法、折射法、电测和核磁共振法等。目前国内外普遍采用抽提法，其中索氏抽提法（Soxhlet extractor method）是公认的经典方法，也是我国粮油分折首选的标准方法。通过本实验的学习，掌握索氏抽提法测定粗脂肪含量的原理和操作方法。二、原 理本实验采用索氏抽提法中的残余法，即用低沸点有机溶剂（乙醚或石油醚）回流抽提，除去样品中的粗脂肪，以样品
漏斗冲入100mL 容量瓶中，加水达70-80mL，摇匀后置于80℃恒温水浴上浸提0.5h。 待上述样品冷却后，沉淀蛋白质，加入5%硫酸锌5mL，再慢慢滴入0.3mol/L Ba(OH)2 5mL，以沉淀蛋白质。振荡后静置，至上层出现清液后再加一滴Ba(OH)2,直至无白色沉淀时，向容量瓶加水至刻度。 3.还原糖含量的测定： 过滤上述已定容的样品液，取5mL 滤液，再定容到100mL（此步视样品的含糖量而定）。取已稀释的溶液2mL，与标准葡萄糖显色法相同：加铜试剂2mL，煮沸10min，加砷钼
异柠檬酸脱氢酶 isocitrate dehydrogenase
异柠檬酸脱氢酶 isocitrate dehydrogenase 有两种类型的酶：要求以 NAD为辅酶的酶（ EC1． 1． 1． 41）和要 NADP的酶（ EC1． 1． 1． 42），两者催化同一反应。 异柠檬酸 NAD（ P） α -酮戊二酸 CO2 NAP（ P） H H4 在三羧酸循环中正常起作用的是要求 NAD为辅酶的酶，此酶是为 ADP激活的变构酶。
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