BL21(DE3)受体菌

特别提示：包括BL21(DE3)受体菌在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：BL21(DE3)受体菌
产品货号：QN2141
产品规格：1ml

该菌株用于高效表达克隆于含有噬菌体T7启动子的表达载体(如pET系列)的基因。T7噬菌体RNA聚合酶位于λ噬菌体DE3区，该区整合于BL21的染色体上。该菌适合表达非毒性蛋白。

储存条件：-70℃可长期保存，-20℃可保存一年。

除了BL21(DE3)受体菌,，我公司还供应以下相关产品：



名称：大肠杆菌TG1化学感受态细胞
货号：BTN80701
规格：0.1mL*10
 本产品是采用大肠杆菌DH5α菌株经特殊工艺处理得到的感受态细胞，可用于DNA的化学转化。使用pUC19质粒检测本产品，转化效率可达108。本产品为dam-，dcm-的菌株，能够排除dam，dcm甲基化的影响。

菌株基因型：sup E hsd Δ5 thi Δ(lad-pro AB)F+[tra D36 pro AB+lacIQlacZΔM15]

储存条件：干冰运输、-80℃保存，有效期半年。

自备试剂：目的DNA、SOC或LB培养基等。

使用方法：
1. 取感受态细胞置于冰浴中。一次转化感受态细胞的建议用量为50-100μL，可根据实际情况使用。
以下实验以50μL感受态细胞为例。
2. 待感受态细胞融化后，向感受态细胞悬液中加入目的DNA(根据实际情况加入适量的DNA，通常100μl感受态细胞能够被1 ng超螺旋质粒DNA 所饱和)，用移液器轻轻吹打混匀，冰浴30分钟。
3. 42℃热击45秒，迅速将离心管转移到冰浴中，冰上静置2-3分钟。
4. 每个离心管中加入450μL 无菌的SOC或LB培养基(不含抗生素)，混匀后置于37℃摇床，150rpm 振荡培养45分钟使菌体复苏。
5. 根据实验需求，取适量已转化的感受态细胞，加到含相应抗生素的SOC或LB 固体琼脂培养基上，用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开，将平板置于37℃直至液体被吸收，倒置培养，37℃培养12-16小时。

注意事项：
1. 涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA 总量较多，可取少量转化产物涂布平板；若转化的DNA 总量较少，可取200-300μL转化产物涂布平板。若预计的克隆数较少，可通过离心(4,000rpm，2分钟)后吸除部分培养液，悬浮菌体后将其涂布于平板中。
2. 新制备的固体培养基不易涂干，可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养。
3. 涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的转化菌落数过少，可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。

名称：GL6-miR报告基因质粒
货号：YT444
规格：1μg
pGL6-miR报告基因质粒是一种用于microRNA(miRNA)等研究的萤光素酶报告基因质粒。该质粒可用于把目的基因的3’非翻译区(3’-untranslated region, 3’-UTR)或其它适当序列插入到其多克隆位点，然后在哺乳动物细胞中高灵敏度地检测特定microRNA(miRNA)或其它非编码RNA等对该基因3’-UTR或其它靶序列调控活性的报告基因质粒。

pGL6-miR以pGL6质粒为模板，具有氨苄青霉素抗性，并在萤火虫萤光素酶基因之后添加了多克隆位点，便于插入目的基因的3’-UTR或其它适当的靶序列。

pGL6-miR的主要工作原理是，把目的基因的3’非翻译区(3’-untranslated region, 3’-UTR)或其它适当序列插入到萤光素酶基因(luc2)的下游，转染细胞并检测萤光素酶的表达。如果细胞内源或外源表达的miRNA与靶序列结合，通常会抑制萤光素酶的翻译或促进mRNA的降解，从而使萤光素酶的表达量减少。因此通过本报告基因质粒检测萤光素酶的表达水平，可以检测内源或外源表达的miRNA是否对插入的靶序列有调控作用。并且可以通过靶序列中预测的miRNA结合位点的突变，用于比较突变前后萤光素酶表达水平的变化。如果预测的miRNA位点突变后，miRNA的调控作用消失，则基本上说明突变的位点就是miRNA在靶序列中具体的结合位点。

pGL6-miR带有中低等强度的PGK启动子，有利于检测miRNA等对于萤火虫萤光素酶表达水平的下调作用，即当miRNA的抑制作用较弱时也能检测到。并且PGK启动子可以在人、大鼠、小鼠甚至酵母细胞中都可以发挥作用。

pGL6-miR质粒的主要信息如下：

Base pairs	6097bp
Feature Nucleotide	Position
PGK promoter	20-538
luc2 reporter gene	549-2202
Multiple cloning region	2208-2261
SV40 late poly（A） sinal	2268-2512
SV40 early enhancer/promoter	2554-2972
Synthetic neomycin phosphotransferase(Neor)coding region	2998-3792
Synthetic poly(A) signal	3817-3865
Synthetic Beta-lactamase(Ampr) coding region	4980-5840
Synthetic poly(A) signal/transcriptional pause site	5945-6097

pGL6-miR质粒的图谱如下：


使用说明：
1. 首次使用时请先取少量本质粒转化大肠杆菌，进行质粒小量、中量或大量抽提后再用于后续用途。抽提获得的质粒可以通过酶切电泳进行鉴定，或通过测序进行鉴定。
2. 插入靶序列：在pGL6-miR多克隆位点选取适当的酶切位点，经酶切处理后连入目的基因的3’-UTR或其它适当的靶序列。
3. 以此质粒为模板构建的质粒可以用常规的细胞转染方法转染细胞。检测时可以采用萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒(YT271)或双萤光素酶报告基因检测试剂盒（YT273）。

储存条件：-20℃。