CRISPR/Cas9 全基因组敲除文库筛选

CRISPR/Cas9 gRNA文库筛选功能基因

CRlSPR/Cas9是细菌和古生物菌用来抵抗外来质粒或噬菌体等遗传物质入侵的一种获得性免疫系统。利用CRlSPR/Cas9技术建立哺乳动物全基因组突变库或者与某类功能相关的基因突变体库，通过功能性筛选和富集以及随后的PCR扩增和深度测序分析，发掘与筛选表型相关的基因，称为CRlSPR/Cas9 gRNA文库筛选。gRNA文库是药物筛选或靶向筛选特定通路的理想工具，gRNA文库的建立将在功能基因筛选、疾病机制研究及药物研发等方面发挥重要的功能。 CRlSPR/Cas9 gRNA文库筛选流程

搞定 CRISPR/Cas9 系统操作

CRISPR/Cas9 是一种强大的基因组编辑工具，今天我们介绍 CRISPR/Cas9 系统操作。以下操作说明是基于作者冰糖个人实验室操作，仅供参考。 质粒介绍我们使用的是 Feng Zhang 实验室的系统的 pX330 质粒，如下图所示： 酶切系统 37 ℃, 3 hr；Run 1% gel，回收。Elute 到 50 mL H2O。我们利用 BbsI 消化载体形成粘末端，以利于下游 oligo 退火产物的连接；酶切时请充分，且绝对不能加 CIP 处理

CRISPR_Cas9基因敲除的原理是什么

CRISPR-Pool KOUT 文库：用于全基因组或亚库范围的敲除筛选，配合药筛、增殖压力或流式分选，找出影响表型的基因。 CRISPR-Pool SAM 文库：用于基因激活与功能获得性筛选，适合"敲除筛不出来"的补偿性、冗余性通路。 结合高通量测序与生信分析，从 gRNA 丰度变化到候选基因排序形成完整结果链。 稳定细胞株构建服务 针对需要长期、稳定表达编辑元件或需要单克隆纯合敲除株的项目，提供从 gRNA 设计、递送、单克隆筛选到基因型与蛋白型验证的整套流程，交付可用细胞株及完整验证