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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 供应商:
上海晶抗生物工程有限公司
- 库存:
365
- 样本:
来电咨询
- 标记物:
详见说明书
- 适应物种:
来电咨询
- 应用:
仅供科研研究使用
- 检测方法:
微量法
细胞色素b5含量测试盒_微量法
测定方法:微量法
产品规格:100管/96样
储存条件:低温保存
注 意:正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义:
细胞色素P450酶是一组主要存在于肝脏的同工酶,在外源物质代谢中具有重要作用,尤其是药物和毒物的代谢。细胞色素P450和细胞色素b5是P450酶系的两个血红素蛋白,其比值的变化与P450代谢活性密切相关。
测定原理:
氧化型细胞色素b5还原后,在424nm处有大吸收峰,通过测定424nm和490nm处吸光值的差异,即可计算出细胞色素b5的含量。
自备仪器和用品:
普通离心机,超速离心机、可调式移液枪、紫外分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96孔板、和蒸馏水。
试剂组成和配制:
试剂一:粉剂×2瓶,4℃保存。临用前各加100mL蒸馏水,充分溶解。
试剂二:液体×1瓶,4℃保存。
试剂三:粉剂×1瓶,4℃保存。
工作液配制:临用前配制,戴一次性手套,小心打开试剂三瓶盖,加试剂二20mL充分溶解,4℃避光可保存1周。
细胞色素b5含量测定操作:
1. 分光光度计/酶标仪预热30 min。
2. 工作液置于25℃水浴中预热30 min。
3. 空白管:取1mL玻璃比色皿,加入10 μL蒸馏水,200μL工作液,室温静置2 min,424nm和490nm处吸光值,424nm处吸光值记为A空白管1,490nm处吸光值记为A空白管2。△A空白管= A空白管1- A空白管2
4. 测定管:取1mL玻璃比色皿,加入10 μL待测液,200μL工作液,室温静置2 min,424nm和490nm处吸光值,424nm处吸光值记为A测定管1,490nm处吸光值记为A测定管2。
△A测定管= A测定管1- A测定管2。
注意:只需要做一个空白管。
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文献和实验血红蛋白分子的辅基血红素中的亚铁被氧化成三价铁,即成为高铁血红蛋白(MHb),同时失去带氧功能。正常红细胞能利用NADH,在细胞色素b5还原酶催化下,使MHb还原成Hb。一旦MHb在血中增高,称MHb血症。中毒性MHb血症较常见,有接触某些药物或毒物(如亚硝酸盐、非那西汀、普鲁卡因、苯胺等)的病史,婴儿腹泻也是常见的诱因。先天性MHb血症较罕见,主要因细胞色素b5还原酶缺乏所致。 临床表现 1.皮肤、口唇粘膜、甲床呈明显紫绀。 2.中毒性MHb血症,发病
40%。内质网上有很多酶系,其中葡萄糖 -6-磷酸酶通常被认为是内质网的标志酶。其他重要酶系有细胞色素 P450 和细胞色素 b5 等。内质网有多种功能:粗糙型内质网主要与蛋白质合成和初步修饰、加工(如蛋白质糖基化等)和转运及与膜之生成有关;光滑型内质网主要与糖原分解、脂类(包括磷脂和类固醇等)合成、细胞解毒作用及参与横纹肌收缩活动等有关。
不仅依赖于初步分离步骤,而且还解决了完整蛋白质的分析问题,又不止于分析蛋白酶解产物。按照惯例,大多数处理方案需偶联色谱处理过程,但编者的方法其效果从图5.6就可以看出来。在酵母中,还原型辅酶I―细胞色素b5还原酶有两种形式,一种称为p34(pi8.7,分子质量34kDa),另外一种是p32(pJ7.8,分子质量30kDa)。第一个组分是一个完整外膜蛋白,它介导细胞色素b5的还原反应;第二个组分是第一个组分经过体内的蛋白酶裂解得到的,是可溶的,并居于内膜空间。编者的富集方案结合了对所有完整多肽链的二维
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