异柠檬酸裂解酶(ICL)测试盒_可见分光光度法

异柠檬酸裂解酶(ICL)测试盒_可见分光光度法
测定方法：可见分光光度法
产品规格：50管/48样    
储存条件：低温保存
注　意：正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定

测定意义：
ICL（EC4.1.3.1）主要存在于植物和微生物中，油料作物种子在萌发过程中，通过乙醛酸循环及其他过程将脂肪转变成碳水化合物。ICL 是乙醛酸循环的关键酶之一。

测定原理：
ICL 催化异柠檬酸降解为乙醛酸和琥珀酸，乙醛酸和 NADH 在 LDH 的作用下生成乙醇和NAD，NADH 在 340nm 下有特征吸收峰，监测 340nm 吸光度的减小速率可间接反应 ICL 活性。

需自备的仪器和用品：
紫外分光光度计、台式离心机、水浴锅、移液器、1mL 石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水

试剂组成和配制：
提取液：液体 50mL×1 瓶，4℃保存；
试剂一：液体 15mL×1 瓶，4℃保存；
试剂二：液体 15mL×1 瓶，4℃保存；
试剂三：粉剂×3 瓶，-20℃保存；临用前每瓶加入 5mL 蒸馏水，充分混匀待用；用不完的试剂仍-20℃保存；
试剂四：粉剂×3 瓶，-20℃保存；临用前每瓶加入 5mL 蒸馏水，充分混匀待用；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。
试剂五：液体 800μL×2 支，4℃保存；临用前每支加入 560μL 蒸馏水，充分混匀待用；用不完的试剂仍 4℃保存；
试剂六：粉剂×3 瓶，4℃保存；临用前每瓶加入 5mL 蒸馏水，充分混匀待用。用不完的试剂-20℃保存；





测定步骤：

试剂	测定管
试剂一（μL）	300
试剂二（μL）	250
试剂三（μL）	300
试剂四（μL）	300
试剂五（μL）	20
样本（μL）	50

混匀，37℃（哺乳动物）或 25℃（其它物种）水浴 5min

试剂六（μL）

300

将上述试剂按顺序加入 1 mL 玻璃比色皿中，加试剂六的同时开始计时，在 340nm 波长下记录 20 秒时的初始吸光度 A1 和 2 分 20 秒时的吸光度 A2，计算 ΔA=A1-A2。
注意：若一次性测定样本较多，可将试剂一、二、三、四、五和样本按比例配成混合液，
在37℃（哺乳动物）或 25℃（其它物种）水浴 5min 以上，测定时加入 1220µL 混合液和 300µL 试剂六测定。