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- 博尔森/BIOESN
- BES21440KB
- 中国
- 2025年07月11日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
50
- 英文名：
Ampholine pH8-9.5
- 供应商：
上海博尔森生物科技有限公司
- 保存条件：
2-8℃避光
- 规格：
12mL
两性电解质（pH8-9.5）
产品储存：2-8℃、避光
产品名称：Ampholyte
产品内容：
产品说明：
两性电解质就是既能当酸又能当碱用的电解质。通常为两性元素的氧化物的水合物、氨基酸等。两性电解质在大于其等电点的 pH 环境中解离成带负电荷的阴离子，向电场的正极泳动；在小于其等电点的 pH环境中解离成带正电荷的阳离子，向电场的负极泳动。这种泳动只有在等于其等电点的 pH 环境中，即蛋白质所带的净电荷为零时才能停止。两性电解质适用于植物蛋白的等电聚焦。
凝胶溶解：
2. 甘-T：23mL 丙三醇+0.5 mL TRITON 加水至 100 mL。
3. 1%四甲基（TEMED）：1 mL TEMED 加水至 100 mL。
4. 1%（AP）：1 g 加水至 100 mL。
5. 顺丁烯二酸缓冲液：3.08 g +5.8 g 顺丁烯二酸加水至 100 mL。
6. 1%α-萘脂：1 g 醋酸-α-萘脂加 100 mL 正丁醇。
7. 7%冰乙酸：70 mL 冰乙酸加水至 1000 mL。
电泳操作：
（1）样品处理
浸泡：先将所需鉴定的种子浸泡一段时间，以备取胚使用。
取胚：用镊子把种子的胚取出，放入 0.5 或 1.5mL 离心管内。
研磨：在离心管内加入 0.1 mL 蔗糖提取液，然后将胚研成匀浆，放入冰箱保存。
（2）凝胶制备
1. 配制凝胶前，应把玻璃板准备好。即将两块干净的玻璃板叠放在一起，之间夹上所需凝胶厚度的胶条进行四边密封，一端留有小口用来凝胶。然后用文具夹奖玻璃板四周固定好。注意夹子作在胶条正中，以防漏胶。
2. 配制凝胶时，先将所需贮备液自冰箱中取出放置室温。
3. 将各种贮备液体按一定比例混合（见表 1）最后加入 0.5 mL 1%，搅拌均匀。然后用注射器吸净混合液，排除气泡，缓缓注入玻璃板的夹隙内。
4. 将注入混合液的玻璃板静置放好，隔夜使用。
电泳：
1. 制胶板：将胶板取出，揭去上层的玻璃板和胶条，然后用蒸馏水轻轻冲洗一下胶面。
2. 点样：将浸入电极的滤纸条取出，压半较胶放在胶板上，然后放入电泳槽内，注意正负极相吻合。将电泳槽平置于冰箱内（电泳时的温度一般在 0~4℃冰箱中进行），接通电源，把电泳仪调至电压 50 V，电泳以每板胶不超过 17 mA 为准，然后开始电泳。进样时间一般在 1.5~2 小时。
3. 揭样纸：待电流降至每板胶 3 mA 以下时，切断电源取出胶板，揭去样纸 200-320V 继续电泳。
4. 加压：当电泳降至每板胶 3 mA 以下时，升高电压至 500 V，继续电泳 1.5 小时左右。
5. 电泳降至每板胶 3 mA 以下时，切断电源结束电泳。
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文献和实验1 载体两性电解质必需具备的条件 （i）在等电点处必需有足够的缓冲能力，以便能控制pH梯度，而不致被样品蛋白质或其他两性物质的缓冲能力改变pH梯度的进程。 （ii）在等电点必需的足够高电导，以便使一定的电流通过，而且要求具备不同pH值的载体有相同的电导系数，使整个体系中的电导均匀，如果有局部电导过小，就会产生极大的电位降，从而其他部分电压就会太小，以致不能保持梯度，也不能使应聚焦的成分进行电迁移，达到聚焦。 （iii）分子量要小，便于与被分离的高分子物质
载体两性电解质必备的条件：1.可溶性要好，为了保证等电聚焦过程中PH梯度的形成和蛋白样品的迁移，载体两性电解质必须具有很好的溶解性能。2.紫外吸收低，不发荧光。由于制备分离时，检测蛋白质的方法通常是测量280cm的吸光度，因此要求载体两性电解质在280cm的吸光度尽可能低。3.在等电点处必需有足够的缓冲能力，以便能控制pH梯度，而不致被样品蛋白质或其他两性物质的缓冲能力改变pH梯度的进程。4.在等电点必需的足够高电导，以便使一定的电流通过，而且要求具备不同pH值的载体有相同的电导系数，使整个
点聚焦电泳产生pH梯度的方法有两种：一是用两种不同的pH缓冲液相互扩散，在混合区形成pH梯度，此为人工pH梯度。这种pH梯度不稳定，常用于制备电泳；另一种是利用载体两性电解质在电场作用下形成自然pH梯度。本实验就是利用载体两性电解质形成的自然pH梯度进行蛋白质样品等电焦聚电泳的。理想的载体两性电解质应该在其本身的等电点处有足够的缓冲能力和良好的导电性，且分子量要小，组成与被分析样品有所区别，对分析样品无变性作用或发生化学反应。常用的载体两性电解质是一系列脂肪族多氨基和多羧基类的混合物，即是一系
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