- ￥1008
- 博尔森/BIOESN
- BES21366KB
- 中国
- 2025年07月11日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
50
- 英文名：
Pre dyeing low MW protein Marker
- 保质期：
24 个月
- 供应商：
上海博尔森生物科技有限公司
- 保存条件：
-20℃
- 规格：
10T
彩虹预染超低分子量蛋白Marker（1.2-45 kD，6条带）
储存条件：-20℃保存，开封后有效期 24 个月
产品内容：
产品说明：
彩虹预染超低分子量蛋白质 Marker 可以直接观察蛋白电泳及清晰判断 Western Blotting 的转膜效果。
本产品包含 3 种多肽和 3 种低分子量蛋白质组成，分子量范围为 1.2kD-45kD，分子量大小为 1.2kD，4.6kD，
10kD，16kD，27kD，45kD (注：蛋白大小已在 18%Tricine-SDS-PAGE 中用非预染蛋白 Marker 标定过）。
操作说明：
第一次收到该产品，室温融化后，彻底混匀，离心快甩将溶液完全收集到管底，根据需要适量分装成小管，-20℃贮存，每次取一小管使用。
一、制胶
（一）配置分离胶
1．按照表一将不同体积的双蒸水，40%PAA(19：1),4×凝胶缓冲液和乙二醇加入到小烧杯中混合。
2．加入 10%APS 和 TEMED,立即混匀 5-10 秒，以使溶液充分混匀。
3．在凝胶模具中迅速灌入适量分离胶溶液，然后在分离胶溶液上轻轻覆盖一层 1-3cm 的水层，使凝胶表明保持平整。
4．静置 30-60 分钟，待分离胶和水层之间出现一个清晰的界面表示凝胶已聚合。
（二）配置浓缩胶
去除覆盖在分离胶上的水层，用滤纸将残留的水吸去。
1. 按照表一将不同体积的双蒸水，40%PAA(19：1)和凝胶缓冲液加入到小烧杯中混合。
2．加入 10%APS 和 TEMED,立即混匀 5-10 秒，以使溶液充分混匀
3．将梳子插入凝胶内，避免产生气泡。
4．静置 30-60 分钟待凝胶聚合。
表一（一块厚度 0.75mm 凝胶用量）
注：如非必须，不要使用 1.0mm 和 1.5mm 的凝胶，尽量使用厚度 0.75mm 的凝胶，这样会减少电泳后染色和脱色的时间
二、电泳
1、取一管分好的 Marker 样品，95℃处理 5 分钟，充分混匀后备用
2、将电泳槽的外槽加入 1×阳极缓冲液，内槽加入 1×阴极缓冲液，轻柔拨出梳子，将 Marker 或蛋白样品加入点样孔，80-120V 电泳 30-60 分钟左右，待指示前沿到达离胶上沿时，把电压调至 150-200V，至蓝色指示前沿至分离胶 3/4 位置时即可停止电泳，整个电泳过程大约需要 2-3 小时。（注：如果电泳时间过短，染色时，指示前沿容易遮挡小于 5kd 的小肽）
特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！
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文献和实验liteng1117 求助: 构建好了重组腺病毒进行蛋白表达，分子量是14kd，5%的浓缩胶70v，12%，或15%的分离胶110v，跑90min。湿转：100v，90min。封闭用5%的脱脂奶粉，封闭3h（因为背景深，以为封闭久会好些）。一抗1:3000，4度过夜，二抗1:5000，孵育1h，洗膜都是用TBST漂洗15min ×4次。但是显影后背景特别深，虽然可以看见目的条带，但还是有一些非特异性的条带出现，不知道是封闭出问题还是一抗浓度过高。
相关专题 蛋白Marker可分为：一、未预染的Marker即宽分子 量蛋白标准、高分子量蛋白标准以及低分子量蛋白标准;二、预染的Marker即单色预染和多色预染。 在western blot 过程中，分子量Marker就像个螺丝钉一样没虽然是个小细节，然而就是这样一个小细节对实验结果有着不可忽视的作用。这个 Western Blot参照家族的一员的作用主要是用来指示蛋白条带所对应的分子量大小，只有标准量
3 个目的条带，而第二张图 6 个目的条带全部可以看到。 而造成这样大反差的根本原因就在于 Marker 了。为什么会这样呢？有三个很重要的原因。 第一，选择的抗体不是单克隆抗体。 第二，该抗体和 Marker 的结合力太强了，远远超过了跟目的蛋白的结合力。 第三，我们使用的成像系统并不能像人一样识别哪些是目的条带，哪些是非目的条带，为了保证成像区域不至于过度曝光，成像系统会严格地控制曝光时间，在特定的曝光时间下，尽管成像区域没有因为过度曝光而导致影像失常，但信号相对较弱的目的条带却因为没有足够的曝光
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