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- 2025年07月13日
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38
- 英文名：
详见说明书
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详见说明书
- 供应商：
上海邦景
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低温冷藏
- 规格：
100μl(20～50T)
产品名称：Western blot预染蛋白Marker(19～110kDa)说明
英文名称：Prestained Protein Marker(20～110kDa) For Western Blot
产品规格：100μl(20～50T)
发货周期：1～3天
本制品是专门为Western Blot试验设计的分子量标准。传统的Western Blot 试验需要使用预染蛋白Marker来跟踪检测阳性抗原信号和转膜效率。 但预染蛋白Marker无法在胶片上曝光，曝光信号需要根据膜上的预染蛋白Marker来判断，另外预染蛋白Marker都经过化学修饰，经过化学修饰的蛋白在SDS-PAGE 电泳过
注意事项：
1. 整个操作过程动作要尽量轻柔，勿用力吹打细胞，尽量在4℃下操作。
2. 反应完毕后请尽快检测，反应1 小时后荧光强度就开始衰变。
3. Annexin V-FITC 和 Propidium iodide 是光敏物质，在操作时请注意避光。
4. 试验操作过程中佩戴手套等防护用品。
5. 试验开始前将一定量的 10×Annexin V Binding Buffer 用超纯水（1:9）稀释至 1×备用。
操作步骤：
1. 样品染色
1) 将Binding Buffer（10×）稀释成1×Binding buffer工作液备用（1ml Binding Buffer（10×）需加入9ml无菌去离子水）。
2) 对于悬浮细胞，500-1000g离心5min收集细胞。
对于贴壁细胞，要用不含EDTA的胰酶消化细胞，胰酶消化时间不宜过长或过短，最好是在轻轻吹打可以使贴壁细胞吹打下来时，加入细胞培养液，将细胞轻轻吹打下来，转移到离心管内，500-1000g离心5min收集细胞。
3) 收集细胞后，加入预冷PBS溶液轻摇或用移液器轻柔吹打洗涤，离心收集细胞，共洗涤两次。
4) 在细胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液，重悬细胞，使细胞浓度达到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl细胞悬液（细胞总数为1×105 cell）至一新管中，加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI，轻轻混匀，室温避光孵育15min。
2. 样品检测
1) 流式细胞仪检测：
染色孵育后，每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液，混匀后使用流式细胞仪检测（1小时内检测）。
建议设置经凋亡诱导的正常细胞、PI单染和Annexin V-FITC单染3个对照组，正常细胞组可作为荧光补偿调节去除光谱重叠和设定十字门的位置。结果可用CellQuest等软件进行分析，绘制双色散点图（two-color dot plot），FITC为横坐标，PI为纵坐标。Annexin V-FITC和PI联合使用时，活细胞仅有很低强度的背景荧光，早期凋亡细胞仅有较强的绿色荧光，晚期凋亡细胞有绿色和红色双重荧光。
2) 荧光显微镜检测：
染色孵育后涂片，显微镜下观察。使用荧光显微镜上的蓝光和绿光通道分别观察FITC和PI。被Annexin V-FITC结合的细胞显示浆膜上有绿色光环。丧失细胞膜完整性的细胞，细胞核显示红色，膜上有绿色光环。
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TRICInepUFFERTRICINE BUFFER超级
2,6Dichloropxenolindopxenol, 1g/5g/25g原装 FLUKA 360
低分子MARK，英文名或英文缩写：SDSPAGE Molecular low weight markers for proteins，级别：BR，2u/mg，规格：25克
肌醋 Crqctinq monohydrctq 6008
dGTP,TRIwo7iumSALT,DIHYDRATE dGTP, Na3, 2H2O超级白色精细结晶粉末FROZENsigma
(2S)2基3[4(4羟基3,5二本氧基)3,5二本基]酸钠/L甲状腺钠，英文名或英文缩写：Lthyroxine wo7ium，级别：BR，97%，规格：10克
2巯基N氧化物内盐 wo7ium omcdinq
4Fluoronaphtalene1boronic acid 58
甲氧基聚乙二 Methoxypolyethylene glycol amine,MW.2000 805066 250MG 通用试剂
D正缬酸/D2基酸/D原缬酸/D正穿心排草基酸/R2基酸/DNorvaline BR，99% 1克 国产/进口
微量可调移液器P200shēng huà shì jì容量：5克
PH缓冲液 PH9.0(20℃)NA
D谷酰胺10克RT
二十二醇 Behenyl Alcohol,98% 6618 25G 通用试剂
拂化 litxium fluoridq 89/4/4
小鼠S100钙结合蛋白A8(S100A8)ELISA试剂盒 ，英文名： S100A8 ELISA Kit
人脂蛋白α(Lp-α)ELISA检测试剂盒Humanlipoproteinα,Lp-αELISAKit 96T/48T
大鼠核因子-κB亚基p65亲和肽(NF-κB p65)免疫试剂盒 Rat nuclear factor-κB p65,NF-κB p65 ELISA Kit
英文名称Rat17-ANPELISAKit大鼠17-羟-孕同(17-ANP)规格：96T/48T
裂解液VII-2葡萄球菌裂解
Western blot预染蛋白Marker(19～110kDa)说明人肝细胞生长因子受体(HGFR/ c-MET)ELISA试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装
小鼠白介素11(IL-11)免疫试剂盒 Mouse Ierleukin 11,IL-11 ELISA KIT
纤维母细胞生长因子受体1癌基因伴侣(FGFR1OP)ELISA试剂盒 ，英文名： FGFR1OP ELISA Kit
MouseIerleukin1β,IL-1βELISA试剂盒小鼠白介素1β(IL-1β)ELISA试剂盒规格：96T/48T
ELISAKitMMP-9兔子基质金属蛋白酶9规格：48
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文献和实验后的上清）每个样品做两个复孔。 20 倍稀释法：取 19 μLPBS+1 μL 样品上清，每个样品做两个复孔。 一般细胞蛋白适用于 10 倍稀释法，组织蛋白适用于 20 倍稀释法，总体积为 20 μL。 3) BCA 试剂的配制：BCA A 液：B 液比例为 50：1，此试剂现配现用，注意勿被其他蛋白污染。 4) 待标准曲线和样品复孔加样后，每孔加入 200 μL 的 BCA 混合试剂，置于 37 ℃ 温箱内 15 min。用酶标仪在 568 nm波长下测得 OD 值。测得的标准曲线 OD 值按浓度
除了抗体原因，转膜恐怕是western blot成败的最关键因素。 园子里好多好多人在求助转膜时间，因此我们总结了一系列分子量蛋白转膜的时间，希望对大家有用。 蛋白来源：RAW264.7 总蛋白 蛋白名称（可保密）：一些转录因子 蛋白分子量：40~70 KD WB用膜类型、孔径：0.45 NC 转膜方式（恒压、恒流）：湿转 恒流400 mA 转膜时间：60~90 min PS.其实
、 过氧化物酶标记的第二抗体。15、 NBT(溶于70%二甲基甲酰胺，75mg/ml)。16、 BCIP(溶于100%二甲基甲酰胺，50mg/ml)。17、 100mmol/LTris-HCL(pH9.5)。18、 100mmol/L NaCl。19、 50mmol/LTris-HCL(pH7.5)，5mmol/L EDTA。（可以参看分子克隆）四、主要步骤生物秀为您搜集了现阶段几乎网上所有的Western Blot的中英文资料，仅供实验参考，可以根据自己实验的实际情况进行调整：五、 实验常见的问题
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