2×KOD MasterMix（无染料）

2×KOD MasterMix（无染料）

保存条件：-20 ℃保存，多次冻融不会影响酶活。有效期 2 年。

 产品内容：

四种 MasterMix 的产品说明：

2×Taq MasterMix

2×Taq MasterMix 中的 Taq DNA Polymerase 是从克隆有突变改造 Thermus aquaticus DNA Polymerase 基因的载体在大肠杆菌中经诱导表达分离纯化而来，其分子量是 94 kD。具有 5'→3' DNA 聚合酶的活性以及 5'→3'外切核酸酶活性，能校对 DNA 扩增过程中产生的碱基错配，保真性较普通 Taq 酶高。在 PCR 反应中，Taq DNA Polymerase 聚合的延伸速度为 1 kb/min，PCR 产物 3'端为 A，可直接用 TA 载体克隆。该产品优于市面上的 ExTaq和 LA Taq ，建议扩增长度 100 bp-10 kb。本品含蓝色或者红色指示染料，跑胶时无需添加 loading buffer，直接上样。

2×Fast Taq MasterMix

Fast Taq DNA Polymerase 是将 SSB 基因融合在含有截短突变改 Thermus aquaticus DNA Polymerase 基因的载体在大肠杆菌中经诱导表达分离纯化而来。具有 5'→3' DNA 聚合酶的活性以及 5'→3'外切核酸酶活性，能校对 DNA 扩增过程中产生的碱基错配，保真性较 2×Taq MasterMix 高。延伸速度为 3-6 倍。PCR 产物 3'端为 A，可直接用 TA 载体克隆，扩增长度 100 bp-10 kb。本品含绿色指示染料，跑胶时无需添加 loading buffer，直接上样。

2×Pfu MasterMix

Pfu DNA 聚合酶是该基因突变后在大肠杆菌中经诱导表达分离纯化而来。具有 5'→3' 聚合酶活性和 3'→5' 外切核酸酶活性，能校对 DNA 扩增过程中产生的碱基错配。突变 Pfu DNA 聚合酶延伸速度是于普通 pfu 酶的2-3倍，一般为3 kb/min，扩增长度可以达到15 kb。PCR 产物为平端，可直接克隆于平滑末端的载体中，也可用 Taq 聚合酶加 A 处理再与 T载体连接。适合于扩增保真度要求较高的片段，保真性较普通 Pfu 酶高，本品含蓝色指示染料，跑胶时无需添加 loading buffer，直接上样。

2×KOD MasterMix

 KOD 聚合酶融合 SSB 基因改造后，连接表达载体在大肠杆菌中经诱导表达分离纯化而来。具有 5'→3'聚合酶活性和 3'→5' 外切核酸酶活性，能校对 DNA 扩增过程中产生的碱基错配。改造后保真度更高，扩增速度更快。同时对 PCR 抑制剂有较高的耐受性，比如可以在含 20%血液中扩出基因，KOD 聚合酶延伸速度是于普通 Pfu DNA Polymerase 6倍。PCR 产物为平端，可直接克隆于平滑末端的载体中，也可用 Taq 聚合酶加 A 处理再与 T 载体连接。适合于扩增保真度要求较高的片段，一般为 6 kb/min，扩增长度可以达到15 kb。保真性较 2×Pfu MasterMix 高。扩增基因组时需要适当提高模板浓度。本品含蓝色指示染料，跑胶时无需添加 loading buffer，直接上样。

低效率扩增或不扩增，参考以下建议：

1. 优化退火温度。一般 TM 值降低 5 ℃，高于 60℃以上建议使用 60 ℃。

2. DNA 模板中可能含有扩增抑制剂，可以通过减少反应体系中模板的量或者提高模板DNA 的纯度来提高扩增效率。

3. 对于符合要求的模板，一定范围内适当增加模板量有利于产物扩增。

4. 添加 PCR 增强剂（如 DMSO 或 Btaine）可以提高扩增效率；添加稳定剂（如 BSA）能提高扩增成功率。

PCR 反应体系：

注意：

1. 不含染料的 Mix（FSL2620、FSL2650 及 FSL2651）在电泳上样时要补加 6×Loadingbuffer（SL2210），其它条件参照对应含有染料 Mix。

2. 引物以终浓度 0.1-1.0 μM 作为设定范围的参考。扩增效率不高的情况下，可提高引物的浓度；发生非特异性反应时，可提高退火温度，或降低引物浓度。

3. 人类基因组模板该体系建议加 10-300 ng；微生物基因组模板该体系建议 25-200 ng；质粒模板该体系建议 0.2-30 ng。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！