YPD Plus Liquid Medium

YPD Plus Liquid Medium

保存条件：-20 ℃，未开封有效期 24 个月。

包装内容：

说明：本产品经高压灭菌处理，为方便使用，短期可密封置于超净台常温保存。为了避免污染，长时间放置请于低温冰箱保存。

产品说明：

用 LiAc 转化法进行酵母转化时，通常会通过加入 Carrier DNA，选用对数期的酵母菌，以及优化质粒DNA 的质量和浓度等方法来提高转化效率。在完成转化操作后，将转化产物用 YPD Plus Liquid Medium重悬培养 30-60 分钟，有助于酵母细胞复苏，可以有效提高转化效率 50-100%。适用于转化酵母菌株Y2HGold、AH109 或 Y187 等，尤其适合对转化效率要求更高的文库转化。

三款转化试剂盒，转化效率为：经典转化 Kit（SK2400）≈Super 转化 Kit（SK2401）＞快速转化 Kit（SK2390），其中经典转化 Kit 转化效率可达 103-105 cfu/μg，快速转化 Kit 转化效率可达经典转化效率的 50-80%，转化产物增加 YPD Plus 复苏培养步骤，会在此基础上显著增加转化效率。

使用方法：（以经典转化方法为例，参考 SK2400）

质粒转化：

1. 在含有约 1 μg 质粒的 1.5 mL 无菌离心管中，加入 5 μL 预变性的 Carrier DNA（YT0003），50 μL 酵母感受态细胞，350 μL LiAc / PEG3350 混合液（YT0006）轻柔混匀。

2. 30 ℃水浴或者金属浴 30 min，每 10 min 轻柔上下颠倒混匀一次。

3. 每管加入 20 μL DMSO，轻柔上下颠倒混匀。

4. 42 ℃水浴热激 15 min，每 5 min 轻柔上下颠倒混匀一次。

5. 3,000 rmp 离心 5 min，弃掉上清。

6. 菌体沉淀用 1 mL YPD Plus Liquid Medium 重新悬浮，30 ℃摇床震荡培养 30-60 min。

7. 3,000 rmp 离心 5 min，弃掉上清，加入 1 mL 无菌 0.9% NaCl 重悬菌体。

8. 分别稀释 10 倍，100 倍后涂布于相应的缺陷型培养基平板上。

9. 平板倒置 30 ℃恒温培养 3-5 天。

文库转化：

1. 在含有约 5-15 μg 文库质粒的 15 mL 无菌离心管中，加入 20 μL 预变性的 Carrier DNA，600 μL 酵母感受态细胞，2.5 mL LiAc / PEG3350 混合液轻柔混匀。

2. 30℃水浴 45 min，每 10 min 轻柔上下颠倒混匀一次。

3. 每管加入 160 μL DMSO，轻柔上下颠倒混匀。

4. 42 ℃水浴热激 20 min，每 5 min 轻柔上下颠倒混匀一次。

5. 3,000 rmp 离心 5 min，弃掉上清。

6. 菌体沉淀用 3 mL YPD Plus Liquid Medium 重新悬浮，30 ℃摇床震荡培养 90 min。

7. 3,000 rmp 离心 5 min，弃掉上清，根据实验需求加入相应体积的无菌 0.9% NaCl 重悬菌体。

8. 涂布于相应的缺陷型培养基平板上。

9. 平板倒置 30 ℃恒温培养 3-5 天。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！