- ￥458 - 1178
- 博尔森/BIOESN
- BES20070KB
- 中国
- 2025年07月10日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
50
- 英文名：
Yeast genome colony PCR Kit
- 保质期：
24个月
- 供应商：
上海博尔森生物科技有限公司
- 保存条件：
-20 ℃
- 规格：
20T /100T
| 规格： | 20T | 产品价格： | ￥458.0 |
|---|---|---|---|
| 规格： | 100T | 产品价格： | ￥1178.0 |
酵母基因组菌落PCR试剂盒（单杂诱饵检测）
保存条件：-20 ℃储存，未开封有效期 24 个月。
包装内容：
产品说明：
酵母基因组菌落 PCR 试剂盒用于酿酒酵母菌落 PCR 直接扩增实验。无需加热、冷冻、离心等裂解或纯化步骤，菌落经快速裂解液简单处理后即可作为 PCR 模板使用。
本产品主要用于酵母单杂 pAbAi 质粒重组基因组后的鉴定实验，同时提供 PCR Mix 以及通用引物混合物，无需额外准备，可快速高效完成 PCR 扩增，产物可用于 DNA 测序。本试剂盒提供引物扩增空载 pAbAi的产物为 280 bp，引物序列可向本公司咨询索取。本产品亦适用于其它重组酵母菌的 PCR 检测实验。如需检测的样品为游离质粒而非基因组重组质粒，建议使用本公司阳性克隆检测试剂盒（SK2420）进行 PCR扩增。
操作步骤:
1. 准备 PCR 预混液：根据检测克隆数，等比例扩大配制体积。
2. 吸取 5 μL 酵母快速裂解液加入 PCR 管中。
3. 用无菌牙签或 10 μL 枪头刮取适量酵母菌落（直径 1-2 mm）悬浮在裂解液中。
4. 吹打或者震荡混匀后室温静置 5 min。即为裂解产物。
注意： 大于 2000 bp 的基因片段作为 Bait，建议将裂解产物再于-20 ℃冷冻 10 min 或-80 ℃速冻 1 min，可有效提高 PCR 产率。
5. 在裂解产物中加入 45 μL PCR 预混液（含引物），PCR 扩增。
PCR 反应条件：
注意事项：
1. 菌落 PCR 前，先刮取部分菌落保存，可以有效避免样品污染和丢失。
2. 新鲜菌落的 PCR 成功率接近 100%。如生长期较长的菌落，请先进行预实验。
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文献和实验为探究生物进程的分子机制，需要确定介导这个过程的蛋白质-蛋白质间的相互作用。研究蛋白质间相互作用的主要技术总结如下：一、酵母双杂交系统酵母双杂交系统是当前广泛用于蛋白质相互作用组学研究的一种重要方法。其原理是当靶蛋白和诱饵蛋白特异结合后，诱饵蛋白结合于报道基因的启动子，启动报道基因在酵母细胞内的表达，如果检测到报道基因的表达产物，则说明两者之间有相互作用，反之则两者之间没有相互作用。将这种技术微量化、阵列化后则可用于大规模蛋白质之间相互作用的研究。在实际工作中，人们根据需要发展了单杂交系统
、TRP、HIS、ADE，因此，酵母在缺乏这些营养的培养基上无法正常生长。当上述两种载体所表达的融合蛋白能够相互作用时，功能重建的反式作用因子能够激活酵母基因组中的报告基因HIS、ADE、LACZ、MEL1，从而通过功能互补和显色反应筛选到阳性菌落。将阳性反应的酵母菌株中的AD-LIBRARY载体提取分离出来，从而对载体中插入的文库基因进行测序和分析工作。在酵母双杂交的基础上，又发展出了 酵母单杂交、酵母三杂交和酵母的反向杂交技术。它们被分别用于核酸和文库蛋白之间的研究、三种不同蛋白之间
，因此，酵母在缺乏这些营养的培养基上无法正常生长。当上述两种载体所表达的融合蛋白能够相互作用时，功能重建的反式作用因子能够激活酵母基因组中的报告基因HIS、ADE、LACZ、MEL1，从而通过功能互补和显色反应筛选到阳性菌落。将阳性反应的酵母菌株中的AD-LIBRARY载体提取分离出来，从而对载体中插入的文库基因进行测序和分析工作。在酵母双杂交的基础上，又发展出了 酵母单杂交、酵母三杂交和酵母的反向杂交技术。它们被分别用于核酸和文库蛋白之间的研究、三种不同蛋白之间的互作研究和两种蛋白相互作用的结构
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