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- 博尔森/BIOESN
- BES20051KB
- 中国
- 2025年07月14日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
50
- 英文名：
Y187-pHis2 Yeast One-Hybrid Media Kit
- 供应商：
上海博尔森生物科技有限公司
- 保存条件：
RT
- 规格：
1Set
Y187-pHis2系统酵母单杂培养基套装
储存温度：序号 1-7 常温保存；序号 8 需-20℃储存，蓝冰运输
产品组成：（0.5 L/pouch）
产品说明：
Y187-pHis2 Yeast One-Hybrid Media Kit（酵母单杂培养基套装 YM1010），含有用于 Y187-pHis2 系统酵母单杂交文库筛选的全套培养基，性价比更高。培养基以非常方便使用的铝箔袋形式包装，每个独立包装可以配制 0.5 L 的培养基。使用时仅需要将袋中的所有干粉倒入三角瓶或培养瓶中，加入 0.5 L 的 ddH2O，然后 121 ℃灭菌 15 分钟即可。无需称量和调整 pH 值。
Y187-pHis2 Yeast One-Hybrid Media plus Kit （YM1011）在试剂盒 YM1010 基础上增加了 100 ml 3-AT溶液（2.5M，过滤除菌）。
实验材料：
酵母菌株：Y187（缺陷基因型 his3-200、trp1-901、leu2-3）
诱饵载体：pHis2-DNA（筛选标记 Trp 报告基因 His）
文库载体：pGADT7-cDNA（筛选标记 Leu）
实验步骤：
一、转化诱饵载体（参考 SK2400 中质粒转化步骤）
1. YPDA 平板培养划线，活化 Y187 酵母菌种；挑酵母菌落于液体 YPDA 培养基摇菌培养；
2. 制备感受态并将 pHis2-DNA 转化进入感受态细胞；
3. SD/-Trp 平板检测转化结果。
二、自激活检测
1. 制备不同 3-AT 浓度梯度的 SD/-His/-Trp 平板（φ150mm），3-AT 的浓度一般设定在 50-100 mM 之间，并设置不含 3-AT 的对照；
2. 将上述转化产物稀释到单克隆水平（OD 值＜0.002），涂板。
3. 筛选出适宜的 3-AT 浓度。（如某浓度 3-AT 平板上的菌落弱小且稀疏，与对照相比差距明显，且延长培养时间也不会再生长，即为理想的 3-AT 浓度）
三、互作筛选（具体步骤参考 SK2400 中文库转化步骤）
1. 液体 SD/-Trp 培养基培养诱饵菌株 Y187（pHis2-DNA），制备 Y187（pHis2-DNA）感受态细胞；
2. 将 pGADT7-cDNA 文库转入 Y187（pHis2-DNA）感受态细胞；
3. 转化产物（取 10μL 稀释 10 倍，100 倍，1000 倍）涂 SD/-Leu/-Trp 平板各一块，用于计算转化效率；剩余转化产物全部涂 SD/-His/-Leu/-Trp + X mM 3-AT（X 为筛选所得浓度）平板 50 块（φ150mm），培养 3-5天；
4. 挑取 SD/-His/-Leu/-Trp 平板上克隆，PCR（推荐 SK2420）后测序鉴定；
5. 点对点验证。
培养基配制方法：
1. 一袋培养基干粉倒入三角瓶或培养瓶中，加0.5 L 去离子水中溶解（琼脂冷水不溶）。
2. 无调整 pH 值，121 ℃高压灭菌15 min。
3. 液体培养基封好口避光、室温储存备用。
4. 固体培养基冷却到50 ℃左右倒入平板，室温凝胶，封口倒置4 ℃保存。
3-AT 的使用方法：
1. 计算所需平板的数量，配制培养基；
2. 设置3-AT 的浓度梯度；
3. 灭菌筛选培养基，待培养基冷却到55 ℃左右，按设置浓度加入3-AT 母液，摇匀后倒板；
4. 标记每个平板的3-AT 浓度，超净台冷却凝胶后，将转化产物涂板，28-30 ℃培养3-5天。
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文献和实验-线性化)、5 μg pHIS2-PBE1钓饵载体、20 μL Herring Testes Carrier DNA(用前于100 ℃变性5 min，然后迅速置于冰上)、600 μL 酵母Y187感受态细胞，轻轻混匀，再加入2.5 mL PEG/LiAc (40% PEG 3350，1×TE Buffer，0.1 mol/L LiAc)，轻轻混匀。30℃温育45 min，每隔15 min混合细胞1次，然后加入160 μL DMSO，混匀后置42℃热冲击20 min，每隔10
的功能蛋白编码基因，验证反式转录调控因子的DNA结合结构域，准确定位参与特定蛋白质结合的核苷酸序列。 酵母单杂交用的cDNA文库用什么试剂盒构建? 单杂交文库可以用酵母双杂交试剂盒中的SMART试剂盒来构建 用BD公司的酵母单杂交文库构建和筛选试剂盒进行酵母单杂交文库的构建。具体操作步骤为：在15 mL试管中依次加入如下成分：20 μL SMART cDNA、6 μL pGADT7-Rec2(0.5 μg/μL，SmaI-线性化)、5 μg pHIS2-PBE
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