2×CTAB提取液

产品说明：
CTAB(十六烷基三甲基溴化铵),是一种阳离子去污剂，具有从低离子强度溶液中沉淀核酸与酸性多聚糖的特性。在高离子强度的溶液中(0.7mol/LNaCl),CTAB与蛋白质和多聚糖形成复合物，只是不能沉淀核酸.通过有机溶剂抽提，去除蛋白、多糖、酚类等杂质后加入乙醇沉淀即可使核酸分离出来。
使用方法：
一、试剂准备
1、chloroform-isopentanol混合液(24:1)。96mLchloroform加4mLisopentanol混匀。
2、65℃预热CTAB溶液后将1mL还原剂加入CTAB溶液中(按照500:1体积比混合，建议按需配制，请勿多配)。
二、操作步骤
1、液氮研磨0.1g左右植物组织，转移到1.5mL离心管中，加入700uL2×CTAB提取液(已加入还原剂)。或者液氮研磨之后，在研钵中加入700uL2×CTAB提取液，然后吸取到1.5mL的离心管中(建议总体积不要超过1mL)
2、将离心管置于65℃水浴30min-1h,期间每隔10min左右轻轻晃动离心管。
3、水浴完成后冷却2min,加入0.5mL的氯仿-isopentanol混合液，剧烈震荡混匀。10000-12000rmp离心5-10min。
4、取上步离心管中上清液到新的离心管中。
注意：上步离心后应该会分三层：上层为水相，中间为蛋白和植物碎片，下层为有机相。吸取时避免触及蛋白和有机相。如不小心吸取到中下层，或者中间层较厚，建议少吸取水相，或吸取之后再加入500uL氯仿-isopentanol混合液，重新混匀离心取上清。
5、在上清中加入等体积的异丙醇，颠倒混匀。(或加入2倍体积的无水乙醇和1/10体积的3MpH5.2的乙酸钠)。置于-20℃沉淀30min以上，12000rmp离心10min,弃上清。
6、 沉淀用75%乙醇洗涤1次，12000r/min离心3-5min,弃上清，沉淀自然干燥后溶于50uL去离子水或者TE中，加入1uLRNase(20 ug/mL),37摄氏度温育30 min。
7、置于-20℃保存。
备选方案：
1、可以加入适量PVP去除多糖多酚污染。PVP是酚的络合物，能与多酚形成一种不溶的络合物质，有效去除多酚，减少DNA中酚的污染；同时它也能和多糖结合，有效去除多糖。
2、可以在加入CTAB提取液之后震荡混匀，5000rmp离心2min取上清，沉淀为未研磨充分的碎片或者不溶物。然后在上清中加入氯仿-isopentanol混合液纯化，可以有效去除未裂解的植物碎片。
3、可以在加氯仿-isopentanol混合液之前，加入tris酚(pH>7.8)-氯仿混合液震荡离心取上清后，再用氯仿-isopentanol混合液纯化。可以有效去除蛋白污染。

常见问题：
问题一：DNA样品不纯，抑制后续酶解和PCR反应。
原因：
1.DNA中含有蛋白、多糖、多酚类杂质
2.DNA在溶解前，有酒精残留，酒精抑制后续酶解反应
3.DNA中残留有金属离子
对策：
1.重新纯化DNA,去除蛋白、多糖、多酚等杂质(具体方法见前)
2.重新沉淀DNA,让酒精充分挥发
3.增加70%乙醇洗涤的次数(2-3次)
问题二：DNA降解，DNA提取量少。
原因：
1.实验材料不佳或量少
2.破壁或裂解不充分
3.沉淀不完全
4.洗涤时DNA丢失
对策：
1.尽量选用新鲜(幼嫩)的材料
2.动植物要匀浆研磨充分；G+菌、酵母裂解前先用生物酶或机械方式破壁
3.高温裂解时，时间适当延长(对于动物细胞、细菌可增加裂解液的用量)
4.低温沉淀，延长沉淀时间
5.加辅助物，促进沉淀