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- 英文名：
E. coli Poly(A) Polymerase, GMP Grade
- 规格：
100U
目录号：GMP-M012-01A
产品描述:
通过加尾酶在mRNA 3' 末端引入Poly A尾，可增加mRNA的稳定性，增加mRNA翻译效率。使用加尾酶引入的Poly A尾的优势是简便易行，避免在质粒构建时引入过多的连续T碱基造成的质粒不稳定等问题。
E. coli Poly (A) Polymerase 不依赖模板的存在，可以催化 ATP 以 AMP 的形式依次掺入到 RNA 的 3´末端，即在 RNA 的 3´末端加多聚 A 尾。Poly (A) 聚合酶具有很高的加尾效率，可以在 RNA 的 3´末端加入 20~200 个 A 碱基。Poly (A)结构有助于提高 mRNA 的翻译效率。
本制品利用大肠杆菌大规模发酵表达，采用药用规格原辅料生产，并严格控制宿主蛋白质残留、核酸残留等，符合 GMP 规范的产品生产与质量管理规程保障生产过程及所有原辅料可追溯。
质量要求：
遵循以下规范生产：
1. ISO 9001:2015, certified facility。
2. 《GMP 附录-细胞治疗产品》国家药品监督管理局。
3. 《人用基因治疗总论-中国药典 2020》国家药典委。
4. USP Chapter <1043>, Ancillary Materials for Cell, Gene, and Tissue-Engineered Products 用于细胞治疗，基因治疗和组织工程产品中的辅料。
5. USP Chapter <92>, Growth Factors and Cytokines Used in Cell Therapy Manufacturing 细胞治疗产品生产过程中细胞因子和生长因子。
6.Ph. Eur. General Chapter 5.2.12, Raw Materials of Biological Origin for the Production of Cell-based and Gene Therapy Medicinal Products 用于生产细胞或基因治疗药物的生物来源原料。
产品用途：
1. 用于 RNA 3´末端标记。
2. 为 RNA 添加 Poly(A)尾，用于克隆或亲和纯化。比如将 miRNA 添加 Poly (A)，为 cDNA 合成提供 oligo-dT 引物结合位点。
3. 提高 RNA 在真核细胞中的翻译效率。
活性定义：
在 37℃条件下，10 min 内将1 nmol AMP 掺入到 RNA 所需的酶量定义为 1 个活性单位（U）。
保存体系：
20mM Tris-HCl; 300mM NaCl; 1mM DTT; 1mM EDTA; 0.1%TritonX-100; 50% (v/v) Glycerol, pH7.5。
保存温度：
-20±5 ℃。
应用实例：
完整mRNA在细胞内表达GFP蛋白，加帽酶与帽类似物对比
注意事项：
1. 热失活条件：65℃，20 min。
2. 该酶只能以 RNA 为底物。
3. 该酶将 AMP 添加到 RNA 的3´末端具有较高的选择性，并不会在所有 RNA 分子中添加相同长度的 Poly (A)。
4. 该酶使用 M-MuLV 逆转录酶反应缓冲液，也可以进行反应。
5. 该酶需要 Mg2+等二价阳离子才具有活性。
6. RNA 加 A 尾长度受酶量、ATP 和反应时间等因素影响，不同的实验需要加 A 的量会有所不同，可通过减少反应时间来调整加 A 的长度，该酶在 37°C 反应 30 分钟时可加约 30 个 A 碱基，1 小时可加约 100 个 A 碱基。
7. EDTA 抑制该酶活性。若停止反应，可通过添加 EDTA 至终浓度 10mM，或直接对其进行纯化。
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For research and manufacturing use only.
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文献和实验Synthesis of Double-Stranded Complementary DNA from Poly(A)+mRNA
-made primer for second strand synthesis, useful whether this is to be performed by more reverse transcriptase or by E. coli DNA polymerase 1 (pol 1). An idealized picture is shown in Fig. 1 . Before the double-stranded cDNA (ds cDNA) copy can be cloned
RNase H 切割 cDNA:RNA 复合物中的 RNA 链，为 DNA 合成提供 3'-OH 引物结合位点 ❖ E. coli DNA polymerase I 利用 5′-3′' 聚合酶活性延伸切口 RNA 链，并利用 5'-3' 外切核酸酶活性沿合成方向替换 RNA 链，该过程被称为切口平移。 ❖ E. coli DNA ligase 缝合新合成 cDNA 片段之间的切口。（T4 DNA 连接酶不能用作替代物，因为它会连接钝端双链 cDNA 片段并形成嵌合结构。） ❖ T4 DNA
Introduction to the EMSA (Gel Shift) Technique
to resolve very large complexes, as is the case with E. coli RNA polymerase (~460 kDa). Gels are pre-run at a constant voltage until the current no longer varies with time. The primary reasons for pre-running gels is to remove all traces of ammonium
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