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E. coli Poly(A)
企业认证
E. coli Poly(A) Polymerase
100U
目录号:M012-01A
产品描述:
Poly (A) 聚合酶是从重组菌株E. coli 中分离得到,可以催化ATP 以 AMP 的形式依次掺入到 RNA 的 3´末端,即在 RNA 的 3´ 末端加多聚 A 尾。Poly (A) 聚合酶具有很高的加尾效率,可以在 RNA 的 3´末端加入 20~200 个 A 碱基。聚腺苷酸化提高了 RNA在细胞中的稳定性,增强了转染或显微注射后 RNA 的表达效率。Poly(A)尾在某些应用中可作为第一链 cDNA 合成的引物结合位点,并可用于末端标记或定量 miRNA。
产品用途:
1. 用于RNA 3´末端标记;
2. 为RNA添加Poly(A)尾,用于克隆或亲和纯化。比如将miRNA添加Poly (A),为cDNA合成提供oligo-dT引物结合位点;
3. 提高RNA在真核细胞中的翻译效率。
注意事项:
1. 该酶只能以 RNA 为底物;
2. 该酶将 AMP 添加到 RNA 的3´末端具有较高的选择性,并不会在所有 RNA 分子中添加相同长度的 Poly (A);
3. 该酶需要 Mg2+等二价阳离子才具有活性;
4. RNA 加 A 尾长度受酶量、ATP 和反应时间等因素影响,不同的实验需要加 A 的量会有所不同,可通过控制反应时间及酶量来调整加 A 的长度,该酶在 37°C 反应 30 分钟时可加约30 个A 碱基,1 小时可加约 100 个 A 碱基;
相同RNA 量及反应时间随酶量增加,加尾长度增大
相同RNA 量,加入5U 的酶量,随时间延长,加尾长度逐渐增大
5. 该酶使用 M-MuLV 逆转录酶反应缓冲液,也可以进行反应;
6. EDTA 抑制该酶活性。若停止反应,可通过添加 EDTA 至终浓度 10mM,或直接对反应体系进行纯化;
7. 加尾结束后,在转染细胞或显微注射前,必须对 RNA 进行纯化,具体纯化方式见操作流程。
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For research and manufacturing use only.
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