E. coli Poly(A) Polymerase

目录号：M012-01A

 

产品描述:

Poly (A) 聚合酶是从重组菌株E. coli 中分离得到，可以催化ATP 以 AMP 的形式依次掺入到 RNA 的 3´末端，即在 RNA 的 3´ 末端加多聚 A 尾。Poly (A) 聚合酶具有很高的加尾效率，可以在 RNA 的 3´末端加入 20~200 个 A 碱基。聚腺苷酸化提高了 RNA在细胞中的稳定性，增强了转染或显微注射后 RNA 的表达效率。Poly(A)尾在某些应用中可作为第一链 cDNA 合成的引物结合位点，并可用于末端标记或定量 miRNA。 

 

产品用途：

1. 用于RNA 3´末端标记；

2. 为RNA添加Poly(A)尾，用于克隆或亲和纯化。比如将miRNA添加Poly (A)，为cDNA合成提供oligo-dT引物结合位点；

3. 提高RNA在真核细胞中的翻译效率。

 

注意事项：   

1. 该酶只能以 RNA 为底物；

2. 该酶将 AMP 添加到 RNA 的3´末端具有较高的选择性，并不会在所有 RNA 分子中添加相同长度的 Poly (A)；

3. 该酶需要 Mg2+等二价阳离子才具有活性；

4. RNA 加 A 尾长度受酶量、ATP 和反应时间等因素影响，不同的实验需要加 A 的量会有所不同，可通过控制反应时间及酶量来调整加 A 的长度，该酶在 37°C 反应 30 分钟时可加约30 个A 碱基，1 小时可加约 100 个 A 碱基；

 

相同RNA 量及反应时间随酶量增加，加尾长度增大

相同RNA 量，加入5U 的酶量，随时间延长，加尾长度逐渐增大

5. 该酶使用 M-MuLV 逆转录酶反应缓冲液，也可以进行反应；

6. EDTA 抑制该酶活性。若停止反应，可通过添加 EDTA 至终浓度 10mM，或直接对反应体系进行纯化；

7. 加尾结束后，在转染细胞或显微注射前，必须对 RNA 进行纯化，具体纯化方式见操作流程。

 

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