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蛋白质分子量测定
方法:质谱法
原理:蛋白质分子离子化后,通过质量分析器对其质荷比进行分析,或进一步通过算法得到样品的精确分子量。
仪器一:基质辅助激光解析-飞行时间质谱(MALDI-TOF)
特点:可分析分子量较大的分子
对杂质的忍耐性较好
适用于混合物的分子量测试
精度高(分子量<5000Da,精度<200ppm;分子量>5000,误差约千分之一)
仪器二:液相色谱-电喷雾质谱(ESI-MS)
特点:准确度高
一般用于分子量较小的蛋白质分子量测试
样品要求:
- 样品量:蛋白总量>50 ug,纯度>90%
- 含盐量:挥发性无机盐<20mM,不挥发性无机盐<5mM
- 样品应尽量保持其纯度,不要添加任何去垢剂或其他物质。
- 需要提供理论分子量。
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