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- YLKBIO
- YLK-SJ0098
- 国产
- 2025年07月14日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
100
- 英文名：
/
- 保质期：
1年
- 供应商：
优利科（上海）生命科学有限公司
- 保存条件：
2-8℃
- 规格：
96T
1 原理及用途
赭曲霉毒素是曲霉菌属和青霉菌属的某些种产生的二级代谢产物。其中赭曲霉毒素A在自然界分布最广，毒性最强，对人类和动植物影响最大。
本试剂盒采用间接竞争ELISA方法检测米面、花生、大豆等谷物及饲料样本中的赭曲霉毒素(Ochratoxins A，OTA)，试剂盒由预包被偶联抗原的酶标板、辣根酶标记物、抗体、标准品及其他配套试剂组成。检测时，加入标准品或样品溶液，样本中的赭曲霉毒素和酶标板上预包被偶联抗原竞争抗赭曲霉毒素抗体，加入酶标记物后，用TMB底物显色，样本吸光度值与其所含赭曲霉毒素含量成负相关，与标准曲线比较即可得出样本中赭曲霉毒素的残留量。
2 技术指标
2.1 试剂盒灵敏度：1ppb(ng/ml)
2.2 反应模式：37℃，30min～30min～15min
2.3 检测下限：
谷物…………………………5ppb
饲料…………………………10ppb
2.4 交叉反应率：
赭曲霉毒素A…………………………………100%
2.5 样本回收率：
谷物及配合饲料…………………………85%±15%
3 试剂盒组成
酶标板……………………………96孔
标准品（黑盖）：各1ml
0ppb、1ppb、3ppb、9ppb、27ppb、81ppb
酶标记物（红盖）…………………11ml
抗体工作液（蓝盖）………………5.5ml
底物液A（白盖）……………………6ml
底物液B（黑盖）……………………6ml
终止液（黄盖）………………………6ml
20×浓缩洗涤液（白盖）……………40ml
说明书…………………………………1份
盖板膜…………………………………1张
自封袋…………………………………1个
4 需要的器材和试剂
4.1 仪器：酶标仪、打印机、均质器 、振荡器、离心机、刻度移液管、天平（感量0.01g）
4.2 微量移液器：单道20µl-200µl，100µl-1000µl、多道300µl
5 样本前处理
5.1 样本处理前须知：
实验器具必须洁净并使用一次性吸头，以避免污染干扰实验结果。
5.2 配液：
配液1：70%甲醇
V甲醇:V水=7:3(7份甲醇加3份去离子水)。
配液2: 0.1M碳酸氢钠溶液
称取4.2g碳酸氢钠，加入去离子水混匀溶解，定容至500ml。
配液3: 工作洗涤液
涤液20倍稀释(1份洗涤液加19份去离子水)。
5.3 样本前处理步骤：
5.3.1 食品类谷物、大豆类（大米、玉米、小米等）处理方法
1）称取4g粉碎样品于50ml离心管中，加10ml 70%甲醇,振荡5分钟,室温4000转/分离心10分钟；
2）取1ml上清，加入1ml 0.1M碳酸氢钠溶液，振荡；
3）取50μl进行分析。
样本稀释倍数：5 检测下限：5ppb
5.3.2饲料处理方法
1）称取2g粉碎样品于50ml离心管中，加10ml 70%甲醇,振荡5分钟,室温4000转/分离心10分钟；
2）取1ml上清，加入1ml 0.1M碳酸氢钠溶液，振荡；
3）取50μl进行分析。
样本稀释倍数：10 检测下限：10ppb
6 酶联免疫试验步骤
将所需试剂从4℃冷藏环境中取出，置于室温平衡30min以上, 洗涤液冷藏时可能会有结晶需恢复到室温以充分溶解，每种液体试剂使用前均须摇匀。取出需要数量的微孔板及框架，将不用的微孔板放入自封袋，保存于2-8℃。
6.1 编 号：将样本和标准品对应微孔按序编号，每个样本和标准品做2孔平行，并记录标准孔和样本孔所在的位置。
6.2 加样反应：加标准品应用液或样本50µl/孔到各自的微孔中，然后加抗体工作液50µl/孔，轻轻振荡5秒混匀，37℃避光反应30分钟。
6.3 洗 涤：小心揭开盖板膜，甩去孔内液体，每孔加350ul工作洗涤液，静置30秒后弃去，重复洗涤5次，最后一次拍干（用吸水纸拍干，拍干后未被清除的气泡可用干净的枪头刺破）。
6.4 加酶反应：加酶标记物100µl/孔，37℃避光反应30分钟。
6.5 洗 涤：同上
6.6 显 色：加底物液A 50µl/孔，再加底物液B 50µl/孔，轻轻振荡5秒混匀，37℃避光显色15分钟（若蓝色过浅，可适当延长反应时间）。
6.7 终 止：加终止液50µl/孔，轻轻振荡混匀，终止反应。
6.8 测吸光值：用酶标仪于450nm处测定每孔吸光度值（建议用双波长450/630nm）。测定应在终止反应后10分钟内完成。
7 结果分析
7.1 百分吸光率的计算
标准液或样本的百分吸光率等于标准液或样本的百分吸光度值的平均值（双孔）除以第一个标准液（0ppb）的吸光度值，再乘以100%，即
| 百分吸光度值（%）＝ | A | ×100% |
| A0 |
A0—0ppb标准溶液的平均吸光度值
7.2 标准曲线的绘制与计算
以标准液百分吸光率为纵坐标，对应的标准液浓度（ppb）的对数为横坐标，绘制标准液的半对数曲线图。将样本的百分吸光率代入标准曲线中，从标准曲线上读出样本所对应的浓度，乘以其对应的稀释倍数即为样本中待测物的实际浓度。
若利用试剂盒专业分析软件进行计算，更便于大量样本的准确、快速分析。（欢迎来电索取）
8 注意事项
8.1 室温低于25℃或试剂及样本没有回到室温（25℃）会导致所有标准的OD值偏低。
8.2 在洗板过程中如果出现板孔干燥的情况，则会出现标准曲线不成线性，重复性不好的现象。所以洗板拍干后应立即进行下一步操作。
8.3 混合要均匀，洗板要彻底，在ELISA分析中的再现性，很大程度上取决于洗板的一致性。
8.4 在所有孵育过程中，用盖板膜封住微孔板，避免光线照射。
8.5 不要使用过了有效期的试剂盒，不要交换使用不同批号试剂盒中的试剂。
8.6 显色液若有任何颜色表明变质，应当弃之。0标准的吸光度值小于0.5个单位（A450nm< 0.5 ）时，表示试剂可能变质。
8.7 反应终止液有腐蚀性，避免接触皮肤。
9 贮藏及保存期
储藏条件：试剂盒于2-8℃保存，避免冷冻。
保 质 期：该产品有效期为1年，生产日期见包装盒。
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文献和实验进行检测，采用配对t检验法比较两种方法的检测结果是否存在显著性差异。经计算，四个项目的液相色谱参考值与 ROSA 测定值之间均无显著差异。以高效液相色谱法的测定结果作为认定值，将 ROSA 快速测试条的测定结果与之比较，按正确度（%）=检测值/认定值×100% 计算，黄曲霉毒素 B1、呕吐毒素、玉米赤霉烯酮、赭曲霉毒素 A 的平均准确度分别为 99%、106%、117% 和 95%，准确度均在粮油检测行业标准规定的范围内。总结而言，Charm Rosa 霉菌毒素检测系统具有以下特点。首先前处理简单
应用超高压液相-质谱联用技术同时测定花生及其制品中的六种黄曲霉毒素
2+G1+G2)。因此，研究一种新的高灵敏度、高选择性的同时测定黄曲霉毒素的检测方法，对于食品的安全性检测和食品的质量控制具有十分重要的意义。 现在应用比较广泛的黄曲霉毒素的检测方法主要有：薄层色谱法（TLC）[4]、高效液相色谱法（HPLC）[5]、二维薄层色谱法[6]、酶联免疫吸附测定法（ELISA）[7]等。薄层色谱法操作繁琐、污染大、定量差、耗时长；而酶联免疫法虽操作简单、灵敏度高，但特异性差。普通的HPLC结合荧光检测的方法，黄曲霉毒素需要经过衍生化以后才能进行测定，操作烦琐，分析
Oxford Biomedical Research的氧化应激及慢性炎症生物标志物检测
一氧化氮浓度，仅需5-100 ul样品。 5. 一氧化氮比色法检测试剂盒，货号NB98，96孔板: 可检测低至1 pmol/ul(~1uM) 的一氧化氮，根据样品中一氧化氮浓度，仅需5-85 ul样品。 部分炎症研究产品： 组胺酶联免疫检测试剂盒，货号EA31，96孔板 皮质醇酶联免疫检测试剂盒，货号EA65，96孔板 更多产品信息 如需订购产品，请联系北京启维
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