- ￥498
- 翌圣生物（Yeasen）
- 10922ES20
- 上海翌圣
- 2025年10月31日
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大量
- 英文名：
Hieff Clone® Universal One Step Cloning Kit
- 保质期：
有效期1年
- 供应商：
翌圣生物科技（上海）股份有限公司
- 保存条件：
-20℃保存
- 规格：
20T
产品信息
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产品名称 |
货号 |
规格 |
价格（元） |
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Hieff Clone® Universal One Step Cloning Kit |
10922ES20 |
20 T |
655.00 |
产品描述
Hieff Clone® Universal One Step Cloning Kit是新一代的同源重组克隆试剂盒，精心优化的2×Hieff Clone® Universal Enzyme Premix预混了重组酶和重组反应所需缓冲液，并添加了独特的重组增强因子，可显著提高重组克隆效率。
该试剂盒可以将PCR产物定向克隆至任何载体的任何位点，浓度可低至5 ng/μL，一次可实现多至6个片段的顺序拼接克隆。将载体线性化，并在插入片段正、反向PCR引物5’端引入15-25 bp的线性化载体末端同源序列，使得插入片段PCR产物5’和3’末端分别带有与线性化载体两末端对应的完全一致的序列。PCR产物和线性化载体在重组酶的作用下，仅需50℃，5-15 min即可完成重组反应。克隆阳性率可达95%以上。
产品组分
| 组分编号 | 组分名称 | 产品规格 | ||
| 10922ES08 (5 T) | 10922ES20 (20 T) | 10922ES50 (50 T) | ||
| 10922-A | 2×Hieff Clone® Universal Enzyme Premix | 50 μL | 200 μL | 500 μL |
| 10922-B | 500 bp Control Insert (25 ng/μL) | 5 μL | 5 μL | 5 μL |
| 10922-C | pUC 19 Control Vector, linearized (50 ng/μL) | 5 μL | 5 μL | 5 μL |
产品应用
快速克隆；定向克隆；定点突变。运输与保存方式
冰袋运输。-20℃保存，有效期1年。
注意事项
1. 需自备的材料：1）自备样品：自备好线性化载体和插入片段。
2）自备试剂（仅罗列部分）：
① 超级感受态：转化效率＞108 cfu/μg，如翌圣DH5α超级感受态细胞（Cat#11802）；
② 高保真酶： 2×Hieff Canace® Gold PCR Master Mix（Cat#10149）或其他等效产品；
③ 菌落PCR mix：2×Hieff® Robust PCR Master Mix（With Dye)（Cat#10106）或其他等效产品；
④ 核酸染料：YeaRed Nucleic Acid Gel Stain (10,000 × in Water)（Cat#10202）或其他等效产品；
3）自备仪器耗材（仅罗列部分）：PCR仪，水平电泳槽，切胶仪，EP管等；
2. 为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。
3. 本产品仅作科研用途！
简版操作步骤
1.线性化载体与插入片段使用量
Hieff Clone® 重组反应体系最适片段及载体插入总量为0.02-1 pmol，1-3片段为0.02-0.5 pmol，4-6片段为0.5-1 pmol。最适载体与插入片段摩尔比为1:3。对应的DNA质量可由以下公式计算获得：
线性化载体使用量ng =（线性化载体碱基对数×0.65×总pmol）/ （1＋3n）
插入片段使用量ng =（插入片段碱基对数×0.65×总pmol×3）/ （1＋3n）
其中n表示插入片段数目。
线性化载体使用体积 = 线性化载体使用量ng / 线性化载体浓度ng/μL
插入片段使用体积 = 插入片段使用量ng /插入片段浓度ng/μL
【注】：当插入片段长度大于载体时，最适载体与插入片段使用量的计算方式应互换，即插入片段当做载体，载体当做插入片段进行计算。线性化载体及插入片段的使用量最低可达到5 ng。线性化载体和插入片段扩增产物未纯化，直接使用时，使用总体积应不超过反应体系体积的1/5，如20 μL体系不超过4 μL。
2.重组反应体系（推荐冰上配制，各组分使用前需混匀）
| 组分 | 重组反应体系 |
| ddH2O | Up to 20 μL |
| 2×Hieff Clone® Universal Enzyme Premix | 10 μL |
| 线性化载体使用体积 | X μL |
| 插入片段使用体积 | Y μL |
1）体系配制完成后，用移液器轻轻吸打混匀各组分，短暂离心将反应液收集至管底。
2）当插入1个片段并且DNA总量＜300 ng时，反应条件为50℃，5 min；当插入片段数为2-6个时，建议反应条件为50℃，15-60 min（反应时间随片段数增多而延长）。建议在PCR仪或金属浴等温控精确的仪器上进行反应。
3）反应产物可直接进行转化，也可储存于-20℃，待需要时解冻转化。
二. 重组产物转化、涂板
1）在冰上解冻克隆感受态细胞（如：DH5α Chemically Competent Cell，Cat#11802）。
2）取10 μL冷却重组产物，加入到100 μL感受态细胞中，轻弹管壁数下混匀，在冰上放置25 min。
3）42℃热激50 sec，冰浴孵育1-2 min。
4）加入750 μL SOC或LB培养基，37℃孵育2 min充分复苏。37℃，200 rpm，摇菌60 min。
5）5000 rpm离心3 min，弃掉750 μL上清。用剩余培养基将菌体重悬，用无菌涂布棒在含有正确抗性的平板上轻轻涂匀。待菌液被吸收，将平板倒置，于37℃过夜培养。
常见问答
1、最佳克隆位点选择？
答：在选择克隆位点时，应避免选择克隆位点上下游50 bp内有重复序列的区域。当克隆位点上下游25 bp区域内GC含量均在40%-60%范围内时，重组效率将达到最大。若高于70%或者低于30%，重组效率会受到较大影响。
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文献和实验immediately in a TA Cloning® or TOPO TA Cloning® reaction. If you wish to store your reaction, continue to Step 4. 4. Extract reaction immediately with an equal volume of phenol-chloroform. This removes all of the polymerases. 5. Precipitate the DNA
有时候也得靠运气啦。实在不行的话再来做定点突变。对于第二种情况：这种情况下一般也就只能做定点突变了。接下来开始聊一聊定点突变的原理吧。那个Stratagene试剂盒！上面有一个说明书，说得好像很正规，不过上面好多都是什么专利啊什么注意之类的话，看都不看，我们简明扼要地只讲实验方面，通过设计引物，并利用PCR将模板扩增出来，然后去掉模板，剩下来的就是我们的PCR产物，在PCR产物上就已经把这个点变过来了，然后再转化，筛选阳性克隆，再测序确定就行了。大家马上就会想到几个问题了：第一：引物怎么设计呢？第二
产物； 5. 转化酶切产物； 6. 筛选 阳性克隆； 7. 送测序并测全长。 最后就是庆祝啦，呵呵，没什么复杂的。 引物和质粒都准备好后，当然就是做PCR喽，不过对于PCR的酶和buffer，不能用平时的，我们做PCR把整个质粒扩出来，延伸长度达到几个K，所以要用那些GC buffer或扩增长片段的buffer，另外，要用保真性能较好的PFU酶来扩增，防止引进新的突变。 那种Quick change试剂盒分为几种不同的类型 什么QuikChange® Site
