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- YLK-XB1608
- 上海
- 2025年12月08日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 品系：
肺癌
- 细胞类型：
细胞系
- 肿瘤类型：
肺癌
- 供应商：
优利科（上海）生命科学有限公司
- 库存：
100
- 英文名：
A 549; A549; NCI-A549; A549/ATCC; A549 ATCC; A549ATCC; hA549
- 生长状态：
贴壁生长
- 年限：
永久
- 运输方式：
快递形式
- 器官来源：
肺
- 是否是肿瘤细胞：
/
- 细胞形态：
上皮细胞样
- 免疫类型：
/
- 物种来源：
人
- 相关疾病：
/
- 组织来源：
肺
- 规格：
1×10⁶cells/T25培养瓶
A549细胞是由D·J·Griad通过肺癌组织移植培养建系，源自于一位58岁白人男性；A549能通过胞苷二磷酸胆碱途径合成含有高含量不饱和脂肪酸的卵磷脂。
细胞英文名称：A 549; A549; NCI-A549; A549/ATCC; A549 ATCC; A549ATCC; hA549
细胞中文名称：A549 [A-549] (人非小细胞肺癌细胞)带鉴定
形态特性：上皮细胞样
生长特性：贴壁培养
| 名称 | A549 [A-549] (人非小细胞肺癌细胞) (STR鉴定正确) |
| 别称 | A 549; A549; NCI-A549; A549/ATCC; A549 ATCC; A549ATCC; hA549 |
| 种属 | 人类 |
| 年龄（性别） | 男性，58岁 |
| 组织来源 | 肺癌 |
| 生长特性 | 贴壁细胞 |
| 细胞形态 | 上皮细胞样 |
| 背景描述 | A549细胞是由D·J·Griad通过肺癌组织移植培养建系，源自于一位58岁白人男性；A549能通过胞苷二磷酸胆碱途径合成含有高含量不饱和脂肪酸的卵磷脂。 |
| 生长培养基 | Ham's F-12K＋10% FBS＋1% P/S |
| 推荐传代比例 | 1:3-1:4 |
| 推荐换液频率 | 2~3次/周 |
| 倍增时间 | ~22小时 |
| 冻存条件 | 冻存液：55% 基础培养基+40%FBS+5%DMSO温度：液氮 |
| 培养条件 | 气相：空气，95%；CO2，5%温度：37℃ |
| 保藏机构 | ATCC; CCL-185 ATCC; CRM-CCL-185 ATCC; CRL-7909 BCRC; 60074 BCRJ; 0033 DSMZ; ACC-107 ECACC; 86012804 |
STR位点信息
| Amelogenin | X,Y | D21S11 | 29 |
| CSF1PO | 10,12 | FGA | 23 |
| D2S1338 | 24 | PentaD | 9 |
| D3S1358 | 16 | PentaE | 7,11 |
| D5S818 | 11 | TH01 | 8,9.3 |
| D7S820 | 8,11 | TPOX | 8,11 |
| D8S1179 | 13,14 | vWA | 14 |
| D13S317 | 11 | D6S1043 | 11,13 |
| D16S539 | 11,12 | D12S391 | 18 |
| D18S51 | 14,17 | D2S441 | 10,13 |
| D19S433 | 13 |
1、 细胞传代：
1）细胞生长至覆盖培养瓶的 80%面积时，弃 25cm2 培养瓶中的培养液，用 PBS 清洗细胞一次；
2）添加 0.25%胰蛋白酶消化液约 1ml 至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后加入 5ml 完全培养
液终止消化，再轻轻吹打细胞使之脱落，然后将悬液转移至 15ml 离心管中， 1000rpm 离心 5min；
3）弃上清，沉淀细胞用 1-2ml 完全培养基重悬，然后按 1:2 比例进行分瓶传代，最后放入 37℃， 5%CO2 细胞
培养箱中培养；
2、 细胞冻存：
1）细胞生长至覆盖培养瓶的 80%面积时，弃 25cm2 培养瓶中的培养液，用 PBS 清洗细胞一次；
2）添加 0.25%胰蛋白酶消化液约 1ml 至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后加入完全培养液终
止消化，轻轻吹打细胞使之脱落，然后将悬液转移至 15ml 离心管中， 1000rpm 离心 5min；
3）用适量的冻存液（FBS： DMSO=9 ： 1）重悬细胞，并放置于冻存管中；
4）先将细胞冻存管放置于-20℃ 1.5h，然后将其移入-80℃过夜， 24h 后转入液氮中进行长期保存。使用程序
降温盒可直接放入-80℃。
3、细胞复苏：
1）从液氮中取出细胞冻存管（注意：佩戴防爆管面具），快速将其置入 37℃水浴中解冻，直至冻存管中无结
晶，然后用 75%的酒精擦拭冻存管外壁；
2）将冻存管中的细胞移至含 6ml 完全培养基的 15ml 离心管中， 1000rpm 离心 5min；
3）弃上清，沉淀用 6ml 完全培养基重悬，接种 25cm2 培养瓶，于 37℃， 5%CO2 细胞培养箱中培养
A549 [A-549] (人非小细胞肺癌细胞)带鉴定收到后处理
细胞在培养瓶中培养至良好状态后灌满完全培养液并封好瓶口是细胞运输的最好办法。收到细胞回到自己的实验室后，先打开外包装，用75%酒精喷洒整个瓶消毒后放到超净台内，严格无菌操作。镜下观察：未超过80%汇合度时，可将瓶装的完全培养液移入废液缸中，悬浮细胞需离心处理，加入6ml新鲜完全培养基，放入37℃、5%CO2孵箱培养；超过80%汇合度时，根据情况传代或者冻存，具体操作见细胞培养步骤说明书。
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文献和实验2： 个人认为很可能是操作过程中混入其它细胞所致，由于这两株细胞的形态差异较大，因此在没有十分严格的鉴定标准的情况下，建议采用两者方法： 1、重新获取细胞，复苏较早保存的细胞，或者从邻近实验室或者ATCC等细胞库购买低代次的A549。 2、传代是以1000-2000 cells/60mm dish的密度接种细胞，连续培养10
我也在养A549细胞，也来讲讲自己的经验，希望大家共同学习。我们主要是看细胞的密度，大概有80-90%铺满培养瓶底就可以传代了，时间长短不一，大概有5-7天吧，一瓶一般传3-4瓶，中间一般会有一次换液的。培养基用的是1640+10%的小牛血清+200u/ml庆大霉素。传代时先倒掉就培养基，然后用PBS洗一两次，然后再用0.25%胰酶消化（100ml培养瓶盖住表面大概要两滴管左右），可镜经下观察细胞间已出现细胞胞质回缩变圆，缝隙变大（我的细胞大概要2min左右），即可倒去消化液，加入培养基，吹打细胞
我养了三种贴壁的细胞，用同样的消化方法，都很好。这三种细胞是A549，ECV304，2BS。1、0.25%胰酶新鲜解冻,不需要预热。2、倒掉培养瓶中的培养基,并用预冷的D-Hank‘s洗两次（要冷，用前4度中取出）。3、加入约1-2ml的胰酶,晃动瓶子,使液体浸润瓶底。4、超净台上放置约1-2分钟（2BS需要的时间更短，约1分钟）5、镜下观察（我一般都省略了，因为每次的效果都很好）,见细胞变圆或细胞间隙变大,即可加入含血清的培养基终止消化。（我们的胰酶都不去掉）6、从瓶口到瓶底吹打，可见细胞
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