Annexin V-PE/7-AAD Apoptosis D

图2. Annexin V-PE/7-AAD染色检测不同程度凋亡

用喜树碱（Camptothecin，CPT）诱导Jurkat细胞（人T淋巴瘤细胞）凋亡，诱导浓度分别为0、4、8、12、16 μM，分别诱导4小时后，参照产品说明书实验方案进行染色，用流式细胞仪检测结果如图2。

(A)0 μM. (B)4 μM.(C)8 μM.(D)12 μM.(E)16μM.(F)竞争封闭实验，采用16 μM CPT诱导Jurkat细胞4小时后，参照说明书收集并洗涤细胞，于染色前加入无染料标记的Annexin V蛋白孵育10分钟，再进行Annexin V-PE/7-AAD染色。无染料标记的Annexin V结合了细胞上的PS，再进行染色时，Annexin V-PE无法结合PS，这说明了染色的特异性。

在正常细胞中，磷酯酰丝氨酸(PS)只分布在细胞膜脂质双层的内侧，而在细胞凋亡早期，细胞膜中的PS由内侧外翻至外侧，从而将PS暴露于细胞外部环境。Annexin V是一种35 - 36 kDa的Ca2+依赖性磷脂结合蛋白，与PS具有高度亲和力，故可通过细胞外侧暴露的PS与凋亡早期细胞的细胞膜结合。因此Annexin V被公认为检测细胞早期凋亡的灵敏指标之一。

将Annexin V以藻红蛋白(Phycoerythrin, PE)进行标记，标记后的Annexin V保留了与PS的高亲和力，可作为探针，利用流式细胞仪进行细胞凋亡的检测。由于在凋亡早期即发生PS外翻，故Annexin V-PE染色在凋亡早期就能识别出凋亡的发生。7-氨基放线 菌素(7-AAD)是一种核酸染料，7-AAD不能透过正常细胞或早期凋亡细胞完整的细胞膜，但可穿透膜损伤细胞如晚期凋亡细胞或者坏死细胞的细胞膜并与其内的DNA结合，可用来区分早期凋亡细胞和晚期凋亡细胞或坏死细胞。因此将Annexin V-PE与7-AAD进行共染，就可以区分不同凋亡时期的细胞。

本试剂盒所有组分均在2 - 8℃保存，Annexin V-PE和7-AAD Staining Solution需避光保存，勿冷冻。