- ￥632
- mlBio/酶联生物
- ml2758
- 国内
- 2025年07月23日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
58
- 英文名：
谷氨酰胺合成酶GS测试盒
- 保质期：
12个月
- 供应商：
上海酶联生物科技有限公司
- 保存条件：
避光 , 低温保存
- 规格：
100管/48样
谷氨酰胺合成酶GS测试盒
微量法
注 意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义：
GS（EC 6.3.1.2）主要存在于植物中，是生物体内氨同化的关键酶之一，催化铵离子和谷氨酸合成谷氨酰胺，不仅可以防止过多的铵离子对生物有毒性，而且谷氨酰胺也是氨的主要储存和运输形式。
测定原理：
GS在ATP和Mg2+存在下，催化铵离子和谷氨酸合成谷氨酰胺；谷氨酰胺进一步转化为γ─谷氨酰基异羟肟酸，在酸性条件下与铁形成的络合物在540nm处有大吸收峰，可用分光光度计测定。
所需的仪器和用品：
可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水。
试剂的组成和配制：
提取液：100mL×1瓶，4℃保存。
试剂一：10mL×1瓶，-20℃保存；临用前37℃预热20min，充分混匀，如有沉淀，静置10min，取上清待用。
试剂二：10mL×1瓶，-20℃保存；临用前37℃预热20min，充分混匀，如有沉淀，静置10min，取上清待用。
试剂三：粉剂×2瓶，-20℃保存。用时每瓶加入5mL蒸馏水充分溶解待用。
试剂四：15mL×1瓶，4℃保存。
样本测定的准备：
1、细菌、细胞或组织样品的制备：
细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
2、血清（浆）样品：直接检测。
测定步骤：
1、分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至540nm，蒸馏水调零。
2、在EP管中加入下列试剂：
| 试剂名称（μL） | 测定管 | 对照管 |
| 试剂一 | 160 | |
| 试剂二 | 160 | |
| 试剂三 | 70 | 70 |
| 样本 | 70 | 70 |
| 试剂四 | 100 | 100 |
谷氨酰胺合成酶GS测试盒
GS活力单位的计算：
a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下
标准曲线：y = 0.8348x + 0.0008，R2 = 0.9999
1、血清（浆）GS活性
单位定义：每mL血清（浆）在每mL反应体系中每小时产生1μmol γ-谷氨酰基异羟肟酸定义为一个酶活力单位。
计算公式：
GS（μmol/h/mL）=(ΔA-0.0008)÷0.8348×V反总÷V样÷T =10.268×ΔA
2、组织、细菌或细胞GS活性
（1）按样本蛋白浓度计算：
单位的定义：每mg组织蛋白在每mL反应体系中每小时产生1μmol γ-谷氨酰基异羟肟酸定义为一个酶活力单位。
GS（μmol/h/mg prot）=(ΔA-0.0008)÷0.8348×V反总÷(Cpr×V样)÷T =10.268×ΔA÷Cpr
（2）按样本鲜重计算：
单位的定义：每g组织在每mL反应体系中每小时产生1μmol γ-谷氨酰基异羟肟酸定义为一个酶活力单位。
GS（μmol/h/g 鲜重）=(ΔA-0.0008)÷0.8348×V反总÷(W× V样÷V样总)÷T =10.268×ΔA÷W
（3）按细菌或细胞密度计算
单位定义：每1万个细菌或细胞在每mL反应体系中每小时产生1μmol γ-谷氨酰基异羟肟酸定义为一个酶活力单位。
GS（μmol/h//104 cell）=(ΔA-0.0008)÷0.8348×V反总÷(500×V样÷V样总)÷T =0.021×ΔA
V反总：反应体系总体积，0.3mL； V样：加入样本体积，0.07mL；V样总：加入提取液体积，1 mL；T：反应时间，30 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；500：细菌或细胞总数，500万。
b.用96孔板测定的计算公式如下
标准曲线：y = 0.4174x + 0.0008，R2 = 0.9999
1、血清（浆）GS活性
单位定义：每mL血清（浆）在每mL反应体系中每小时产生1μmol γ-谷氨酰基异羟肟酸定义为一个酶活力单位。
计算公式：
GS（μmol/h/mL）=(ΔA-0.0008)÷0.4174×V反总÷V样÷T =20.535×ΔA
2、组织、细菌或细胞GS活性
（1）按样本蛋白浓度计算：
单位的定义：每mg组织蛋白在每mL反应体系中每小时产生1μmol γ-谷氨酰基异羟肟酸定义为一个酶活力单位。
GS（μmol/h/mg prot）=(ΔA-0.0008)÷0.4174×V反总÷(Cpr×V样)÷T =20.535×ΔA÷Cpr
（2）按样本鲜重计算：
单位的定义：每g组织在每mL反应体系中每小时产生1μmol γ-谷氨酰基异羟肟酸定义为一个酶活力单位。
GS（μmol/h/g 鲜重）=(ΔA-0.0008)÷0.4174×V反总÷(W× V样÷V样总)÷T =20.535×ΔA÷W
（3）按细菌或细胞密度计算
单位定义：每1万个细菌或细胞在每mL反应体系中每小时产生1μmol γ-谷氨酰基异羟肟酸定义为一个酶活力单位。
GS（μmol/h/104 cell）=(ΔA-0.0008)÷0.4174×V反总÷(500×V样÷V样总)÷T =0.041×ΔA
V反总：反应体系总体积，0.3mL； V样：加入样本体积，0.07mL；V样总：加入提取液体积，1 mL；T：反应时间，30 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；500：细菌或细胞总数，500万。
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文献和实验1000kb不等。即使是同一种细胞，选择过程不同，基因扩增的范围也不同。 然而，出现了更有效的扩增系统—GS扩增系统——GS（谷氨酰胺合成酶）扩增系统是新近发展的更有效的系统，具有更高的扩增效率。 这是为什么？ 谷氨酰胺合成酶在ATP水解提供能量时，利用细胞内的氨和谷氨酸合成谷氨酰胺，在缺乏细胞外谷氨酰胺的培养条件下，加入谷氨酰胺合成酶抑制剂甲硫氨酸亚砜（MSX）,可使GS 基因及与之相连的目的基因扩增，达到提高目的基因表达水平的目的，由于只有多拷贝的GS 编码基因才能抗MSX
表达，如扩增标志基因谷氨酰胺合成酶GS，可被MSX(L-methionine sulphosimine)所抑制，GS显性选择标志可在多种类型细胞中表达，通过大剂量一次性筛选，可获得高拷贝扩增。扩增标志基因可分别位于重、轻链载体上，通过共转染来获得抗体，也可将重、轻链串联于一个表达载体上，此时基因顺序很重要，因为下游启动子可被上游启动子通读而产生闭合现象。 2．大肠杆菌中表达 大肠杆菌虽没有糖基化修饰的功能，但是，现在已经证实表达的抗体片段如Fab、ScFv、VH能正确折叠及装配成具有
氏细胞，后者可能是来源于神经周膜和神经内膜细胞。大部分神经源性肉瘤含有S―100蛋白，显示来自于雪旺氏细胞。这些肿瘤对S―100蛋白的反应一般比良性者弱，而且，在高度间变的肿瘤，由于瘤细胞的反向分化，常丧失合成S―100蛋白的能力。 在神经肿瘤诊断和研究中，除上述三种常用标记物外，还有一些标记物可供选择或配合应用：①谷氨酰胺合成酶（glutamine synthetase, GS），其组织中分布与GFAP相同；②髓鞘碱性蛋白（myelin basic protein, MBP），用于少枝胶质
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