- ￥530
- Xkbio
- XK-SJH-A309
- 国产
- 2025年07月13日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
69
- 英文名：
Glutamine Synthetase (GS) Test Kit
- CAS号：
无
- 保质期：
1年
- 供应商：
上海晅科生物科技有限公司
- 保存条件：
2-8℃
- 规格：
100管/48样
谷氨酰胺合成酶（Glutamine synthetase，GS）试剂盒
微量法 100 管/48 样
正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定测定意义
GS（EC 6.3.1.2）主要存在于植物中，是生物体内氨同化的关键酶之一，催化铵离子和谷氨酸合成谷氨酰胺，不仅可以防止过多的铵离子对生物有毒性，而且谷氨酰胺也是氨的主要储存和运输形式。测定原理
GS 在 ATP 和 Mg2+存在下，催化铵离子和谷氨酸合成谷氨酰胺；谷氨酰胺进一步转化为 γ─ 谷氨酰基异羟肟酸，在酸性条件下与铁形成的络合物在 540nm 处有最大吸收峰，可用分光光度计测定。所需的仪器和用品
可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研钵、冰和蒸馏水。试剂的组成和配制
提取液：100mL×1 瓶，4℃保存。试剂一：10mL×1 瓶，-20℃保存；临用前 37℃预热 20min，充分混匀，如有沉淀，静置 10min，取上清待用。
试剂二：10mL×1 瓶，-20℃保存；临用前 37℃预热 20min，充分混匀，如有沉淀，静置 10min，取上清待用。
试剂三：粉剂×2 瓶，-20℃保存。用时每瓶加入 5mL 蒸馏水充分溶解待用。试剂四：15mL×1 瓶，4℃保存。
样本测定的准备
1、细菌、细胞或组织样品的制备：细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量
（104 个）：提取液体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20％或 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）； 8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
2、血清（浆）样品：直接检测。
测定步骤
1、 分光光度计或酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 540nm，蒸馏水调零。2、 在 EP 管中加入下列试剂：
| 试剂名称（μL） | 测定管 | 对照管 |
| 试剂一 | 160 | |
| 试剂二 | 160 | |
| 试剂三 | 70 | 70 |
| 样本 | 70 | 70 |
| 试剂四 | 100 | 100 |
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GS 活力单位的计算
- 用微量石英比色皿测定的计算公式如下
1、血清（浆）GS 活性
单位定义：每 mL 血清（浆）在每 mL 反应体系中每小时产生 1μmol γ-谷氨酰基异羟肟酸定义为一个酶活力单位。
计算公式：
GS（μmol/h/mL）=(ΔA-0.0008)÷0.8348×V 反总÷V 样÷T
=10.268×(ΔA-0.0008)
2、组织、细菌或细胞 GS 活性
- 按样本蛋白浓度计算：
GS（μmol/h/mg prot）=(ΔA-0.0008)÷0.8348×V 反总÷(Cpr×V 样)÷T
=10.268×(ΔA-0.0008)÷Cpr
- 按样本鲜重计算：
GS（μmol/h/g 鲜重）=(ΔA-0.0008)÷0.8348×V 反总÷(W× V 样÷V 样总)÷T
=10.268×(ΔA-0.0008)÷W
- 按细菌或细胞密度计算
GS（μmol/h//104 cell）=(ΔA-0.0008)÷0.8348×V 反总÷(500×V 样÷V 样总)÷T
=0.021×(ΔA-0.0008)
V 反总：反应体系总体积，0.3mL； V 样：加入样本体积，0.07mL；V 样总：加入提取液体积，1 mL；T：反应时间，30 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g； 500：细菌或细胞总数，500 万。
- 用 96 孔板测定的计算公式如下
1、血清（浆）GS 活性
单位定义：每 mL 血清（浆）在每 mL 反应体系中每小时产生 1μmol γ-谷氨酰基异羟肟酸定义为一个酶活力单位。
计算公式：
GS（μmol/h/mL）=(ΔA-0.0008)÷0.4174×V 反总÷V 样÷T
=20.535×(ΔA-0.0008)
2、组织、细菌或细胞 GS 活性
- 按样本蛋白浓度计算：
GS（μmol/h/mg prot）=(ΔA-0.0008)÷0.4174×V 反总÷(Cpr×V 样)÷T
=20.535×(ΔA-0.0008)÷Cpr
- 按样本鲜重计算：
GS（μmol/h/g 鲜重）=(ΔA-0.0008)÷0.4174×V 反总÷(W× V 样÷V 样总)÷T
=20.535×(ΔA-0.0008)÷W
- 按细菌或细胞密度计算
GS（μmol/h/104 cell）=(ΔA-0.0008)÷0.4174×V 反总÷(500×V 样÷V 样总)÷T
=0.041×(ΔA-0.0008)
V 反总：反应体系总体积，0.3mL； V 样：加入样本体积，0.07mL；V 样总：加入提取液体积，1 mL；T：反应时间，30 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g； 500：细菌或细胞总数，500 万。
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文献和实验1000kb不等。即使是同一种细胞，选择过程不同，基因扩增的范围也不同。 然而，出现了更有效的扩增系统—GS扩增系统——GS（谷氨酰胺合成酶）扩增系统是新近发展的更有效的系统，具有更高的扩增效率。 这是为什么？ 谷氨酰胺合成酶在ATP水解提供能量时，利用细胞内的氨和谷氨酸合成谷氨酰胺，在缺乏细胞外谷氨酰胺的培养条件下，加入谷氨酰胺合成酶抑制剂甲硫氨酸亚砜（MSX）,可使GS 基因及与之相连的目的基因扩增，达到提高目的基因表达水平的目的，由于只有多拷贝的GS 编码基因才能抗MSX
表达，如扩增标志基因谷氨酰胺合成酶GS，可被MSX(L-methionine sulphosimine)所抑制，GS显性选择标志可在多种类型细胞中表达，通过大剂量一次性筛选，可获得高拷贝扩增。扩增标志基因可分别位于重、轻链载体上，通过共转染来获得抗体，也可将重、轻链串联于一个表达载体上，此时基因顺序很重要，因为下游启动子可被上游启动子通读而产生闭合现象。 2．大肠杆菌中表达 大肠杆菌虽没有糖基化修饰的功能，但是，现在已经证实表达的抗体片段如Fab、ScFv、VH能正确折叠及装配成具有
氏细胞，后者可能是来源于神经周膜和神经内膜细胞。大部分神经源性肉瘤含有S―100蛋白，显示来自于雪旺氏细胞。这些肿瘤对S―100蛋白的反应一般比良性者弱，而且，在高度间变的肿瘤，由于瘤细胞的反向分化，常丧失合成S―100蛋白的能力。 在神经肿瘤诊断和研究中，除上述三种常用标记物外，还有一些标记物可供选择或配合应用：①谷氨酰胺合成酶（glutamine synthetase, GS），其组织中分布与GFAP相同；②髓鞘碱性蛋白（myelin basic protein, MBP），用于少枝胶质
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