生物碱含量试剂盒

生物碱含量试剂盒
分光光度法 
注    意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。 

测定意义：
生物碱存在于自然界（主要为植物，但有的也存在于动物）中的一类含氮的碱性有机化合物， 大多数有复杂的环状结构，氮素多包含在环内，有显著的生物活性，是中草药中重要的有效成分之一。

测定原理：
生物碱与溴jia酚绿指示剂反应，生成绿色化合物，在 416nm 处有大吸收峰。

需自备的仪器和用品：
分光光度计、水浴锅、超声波清洗器、可调式移液器、1mL 玻璃比色皿、研钵、80%乙醇、氯仿和蒸馏水。



试剂的组成和配制：
试剂一：液体 10mL× 1 瓶，4℃保存； 试剂二：液体 50mL × 1 瓶，4℃保存；
试剂三：液体 20mL × 1 瓶，4℃避光保存；

生物碱的提取：
样本烘干粉碎，过 80 目筛。称取约 0.1g 样本，加入 0.1mL 试剂一，再加入 0.9,mL80%乙醇， 充分混匀后转移到EP 管中，超声波提取 60min， 8000 g，25℃离心 10 min，取上清液待测。另取空 EP 管，加入 0.1mL 试剂一和 0.9,mL80%乙醇，混匀后作为空白液。

测定步骤：
1、分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 416nm 处。
2、操作表：在EP 管中加入如下试剂

试剂名称（µL ）	空白管	测定管
样本		150
空白液	150
试剂二	750	750
试剂三	300	300

混匀，室温静置 5min

氯仿

1500

1500

剧烈振荡混匀，室温静置 40min，吸取下层氯仿层 1mL 于 1mL 玻璃比色皿，416nm 处读取吸光值 A，ΔA=A 测定-A 空白，空白管只要做一管。

生物碱含量试剂盒
生物碱含量计算：
标准条件下测定的回归方程为 y = 3.83x - 0.0005，R2 = 0.9942；x 为标准品浓度（mg/mL），
y 为 ΔA。
生物碱含量(mg/g 干重)=(ΔA+0.0005)÷3.83×V 样总÷W= 0.261×(ΔA+0.0005) ÷W
V 样总：加入提取液体积，1mL；W：样本鲜重，g。