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- Xybio
- 上海
- P2766
- 2025年07月14日
企业认证
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- 详细信息
- 询价记录
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20
- 保质期：
2年
- 英文名：
pCR4-TOPO-NBEAL1
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
名称：ER2738大肠杆菌
别称: pCR4-TOPO-NBEAL1
质粒简介：详询
质粒图谱
质粒序列：详询
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P1891/pLVX-mCherry-N1慢病毒表达质粒 |
| P0757/pLVX-mCherry-C1慢病毒表达质粒 |
| P0387/pLVX-Myc-MCS-Strep-IRES-Puro慢病毒表达质粒 |
| P1134/pLVX-10×His-Puro慢病毒表达质粒 |
| P0251/pLVX-AcGFP1-N1慢病毒表达质粒 |
| P0252/pLVX-DsRed-Monomer-N1慢病毒表达质粒 |
| P0253/pLVX-Tight-Puro慢病毒表达质粒 |
| P0254/pLVX-Tet-On-Advanced慢病毒表达质粒 |
| P0961/pLVX-EF1α-IRES-EGFP-PGK-Puro慢病毒表达质粒 |
| P0962/pLVX-AcGFP1-C1慢病毒表达质粒 |
| P0267/pLVX-TRE3G慢病毒表达质粒 |
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文献和实验的试管中，挑选新鲜的大肠杆菌ER2738单菌落，37℃、230r/min振荡培养过夜，将2m1ER2738培养液转入20m1 LB溶液中继续培养50min，然后37℃、100r/min振荡培养15min，即成为感受态细胞。加入噬菌体后，继续37℃、100r/min培养10min，再转到37℃、230r/min的条件下继续培养4．5h，培养物于4℃、8 000r/min离心15min，取上清液加入1/6体积的PEG―NaCl于4℃沉淀过夜。将溶液于4℃、10 000 r/min离心20min，弃
噬菌体： M13KE T7宿主细胞 ： ER2738 BL21/BLT5403/BLT5615噬菌体释放方式： M13噬菌体溶源性，不裂解宿主菌。极大地简化了每轮淘选过程中的噬菌体纯化步骤，只用简单的PEG沉淀方法即可。 T7是裂解性的，其展示的蛋白不需分泌。这一优点使更多的序列可能被展示。 但不利于提纯。融合方式：M13噬菌体N端与pIII蛋白融合，不适合克隆cDNA，因为cDNA中为oligo d(T))常位于翻译终止密码子的下游。T7噬菌体C端与T7基因10 衣壳
pfu指的是噬菌体的空斑形成单位。以下是关于测定M13效价的一个方法：测定噬菌体滴度只有当噬菌体的感染复度MOI (multiplicity of infection)值远低于1时（即细胞过量时），噬菌斑的数量才会随着加入噬菌体的量而呈线性增加。正因如此，建议检测噬菌体贮液的滴度时，在感染前进行稀释，而不是在高MOI值的情况下稀释被感染的细胞。低MOI值有助于确保每个噬菌斑仅含一个DNA序列。1. 接种ER2738单菌落于5-10 ml LB培养基中，摇床培养至对数中期（OD
