pECMV-3×FLAG-Halo-K73T质粒

基本信息
名称：pECMV-3×FLAG-Halo-K73T质粒
别称: pECMV-3×FLAG-Halo-K73T
启动子：CMV
复制子: pUC
原核抗性: Amp
筛选标记：G418
克隆菌株: DH5a
培养条件: 37度

质粒属性
载体宿主：哺乳细胞
载体用途：蛋白表达
基因种属：
基因类型：ORF
原核抗性：Amp
真核抗性：Neo/G418
荧光蛋白：

质粒简介
 pECMV-3×FLAG-Halo-K73T质粒

质粒图谱


质粒序列
LOCUS       Exported                6376 bp ds-DNA     circular SYN 06-JUL-2018
DEFINITION  synthetic circular DNA
ACCESSION   .
VERSION     .
KEYWORDS    pECMV-3×FLAG-Halo-K73T
SOURCE      synthetic DNA construct
  ORGANISM  synthetic DNA construct
REFERENCE   1  (bases 1 to 6376)
  AUTHORS   .
  TITLE     Direct Submission
FEATURES             Location/Qualifiers
     source          1..6376
                     /organism="synthetic DNA construct"
                     /mol_type="other DNA"
     enhancer        235..614
                     /note="CMV enhancer"
                     /note="human cytomegalovirus immediate early enhancer"
     promoter        615..818
                     /note="CMV promoter"
                     /note="human cytomegalovirus (CMV) immediate early 
                     promoter"
     promoter        863..881
                     /note="T7 promoter"
                     /note="promoter for bacteriophage T7 RNA polymerase"
     regulatory      913..922
                     /regulatory_class="other"
                     /note="Kozak sequence"
                     /note="vertebrate consensus sequence for strong initiation 
                     of translation (Kozak, 1987)"
     CDS             922..987
                     /codon_start=1
                     /product="three tandem FLAG(R) epitope tags, followed by an
                     enterokinase cleavage site"
                     /note="3xFLAG"
                     /translation="DYKDHDGDYKDHDIDYKDDDDK"
     CDS             1009..1893
                     /codon_start=1
                     /product="modified bacterial dehalogenase that forms 
                     covalent bonds with chloroalkane derivatives"
                     /note="HaloTag(R)"
                     /translation="MEIGTGFPFDPHYVEVLGERMHYVDVGPRDGTPVLFLHGNPTSSY
                     VWRNIIPHVAPTHRCIAPDLIGMGKSDTPDLGYFFDDHVRFMDAFIEALGLEEVVLVIH
                     DWGSALGFHWAKRNPERVKGIAFMEFIRPIPTWDEWPEFARETFQAFRTTDVGRKLIID
                     QNVFIEGTLPMGVVRPLTEVEMDHYREPFLNPVDREPLWRFPNELPIAGEPANIVALVE
                     EYMDWLHQSPVPKLLFWGTPGVLIPPAEAARLAKSLPNCKAVDIGPGLNLLQEDNPDLI
                     GSEIARWLSTLEIS"
     polyA_signal    1976..2200
                     /note="bGH poly(A) signal"
                     /note="bovine growth hormone polyadenylation signal"
     rep_origin      2246..2674
                     /direction=RIGHT
                     /note="f1 ori"
                     /note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow 
                     indicates direction of (+) strand synthesis"
     promoter        2688..3017
                     /note="SV40 promoter"
                     /note="SV40 enhancer and early promoter"
     rep_origin      2868..3003
                     /note="SV40 ori"
                     /note="SV40 origin of replication"
     CDS             3084..3878
                     /codon_start=1
                     /gene="aph(3')-II (or nptII)"
                     /product="aminoglycoside phosphotransferase from Tn5"
                     /note="Neo"
                     /note="confers resistance to neomycin, kanamycin, and G418 
                     (Geneticin(R))"
                     /translation="MIEQDGLHAGSPAAWVERLFGYDWAQQTIGCSDAAVFRLSAQGRP
                     VLFVKTDLSGALNELQDEAARLSWLATTGVPCAAVLDVVTEAGRDWLLLGEVPGQDLLS
                     SHLAPAEKVSIMADAMRRLHTLDPAT-CPFDHQAKHRIERARTRMEAGLVDQDDLDEEHQ
                     GLAPAELFARLKARMPDGEDLVVTHGDACLPNIMVENGRFSGFIDCGRLGVADRYQDIA
                     LATRDIAEELGGEWADRFLVLYGIAAPDSQRIAFYRLLDEFF"
     polyA_signal    4052..4173
                     /note="SV40 poly(A) signal"
                     /note="SV40 polyadenylation signal"
     rep_origin      complement(4624..5209)
                     /direction=LEFT
                     /note="ori"
                     /note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of 
                     replication"
     CDS             complement(5380..6240)
                     /codon_start=1
                     /gene="bla"
                     /product="beta-lactamase"
                     /note="AmpR"
                     /note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
                     related antibiotics"
                     /translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI
                     ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
                     PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
                     EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
                     LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
                     LIKHW"
     promoter        complement(6241..6345)
                     /gene="bla"
                     /note="AmpR promoter"
ORIGIN
        1 gacggatcgg gagatctccc gatcccctat ggtgcactct cagtacaatc tgctctgatg
       61 ccgcatagtt aagccagtat ctgctccctg cttgtgtgtt ggaggtcgct gagtagtgcg
      121 cgagcaaaat ttaagctaca acaaggcaag gcttgaccga caattgcatg aagaatctgc
      181 ttagggttag gcgttttgcg ctgcttcgcg atgtacgggc cagatatacg cgttgacatt
      241 gattattgac tagttattaa tagtaatcaa ttacggggtc attagttcat agcccatata
      301 tggagttccg cgttacataa cttacggtaa atggcccgcc tggctgaccg cccaacgacc
      361 cccgcccatt gacgtcaata atgacgtatg ttcccatagt aacgccaata gggactttcc
      421 attgacgtca atgggtggag tatttacggt aaactgccca cttggcagta catcaagtgt
      481 atcatatgcc aagtacgccc cctattgacg tcaatgacgg taaatggccc gcctggcatt
      541 atgcccagta catgacctta tgggactttc ctacttggca gtacatctac gtattagtca
      601 tcgctattac catggtgatg cggttttggc agtacatcaa tgggcgtgga tagcggtttg
      661 actcacgggg atttccaagt ctccacccca ttgacgtcaa tgggagtttg ttttggcacc
      721 aaaatcaacg ggactttcca aaatgtcgta acaactccgc cccattgacg caaatgggcg
      781 gtaggcgtgt acggtgggag gtctatataa gcagagctct ctggctaact agagaaccca
      841 ctgcttactg gcttatcgaa attaatacga ctcactatag ggagacccaa gctggctagc
      901 gtttaaactt aagccaccat ggactacaaa gaccatgacg gtgattataa agatcatgac
      961 atcgactaca aggatgacga tgacaagctt ggtaccgagc tcggatccat ggaaatcggt
     1021 actggctttc cattcgaccc ccattatgtg gaagtcctgg gcgagcgcat gcactacgtc
     1081 gatgttggtc cgcgcgatgg cacccctgtg ctgttcctgc acggtaaccc gacctcctcc
     1141 tacgtgtggc gcaacatcat cccgcatgtt gcaccgaccc atcgctgcat tgctccagac
     1201 ctgatcggta tgggcaaatc cgacacacca gacctgggtt atttcttcga cgaccacgtc
     1261 cgcttcatgg atgccttcat cgaagccctg ggtctggaag aggtcgtcct ggtcattcac
     1321 gactggggct ccgctctggg tttccactgg gccaagcgca atccagagcg cgtcaaaggt
     1381 attgcattta tggagttcat ccgccctatc ccgacctggg acgaatggcc agaatttgcc
     1441 cgcgagacct tccaggcctt ccgcaccacc gacgtcggcc gcaagctgat catcgatcag
     1501 aacgttttta tcgagggtac gctgccgatg ggtgtcgtcc gcccgctgac tgaagtcgag
     1561 atggaccatt accgcgagcc gttcctgaat cctgttgacc gcgagccact gtggcgcttc
     1621 ccaaacgagc tgccaatcgc cggtgagcca gcgaacatcg tcgcgctggt cgaagaatac
     1681 atggactggc tgcaccagtc ccctgtcccg aagctgctgt tctggggcac cccaggcgtt
     1741 ctgatcccac cggccgaagc cgctcgcctg gccaaaagcc tgcctaactg caaggctgtg
     1801 gacatcggcc cgggtctgaa tctgctgcaa gaagacaacc cggacctgat cggcagcgag
     1861 atcgcgcgct ggctgtctac tctggagatt tccggttaag aattctgcag atatccagca
     1921 cagtggcggc cgctcgagtc tagagggccc gtttaaaccc gctgatcagc ctcgactgtg
     1981 ccttctagtt gccagccatc tgttgtttgc ccctcccccg tgccttcctt gaccctggaa
     2041 ggtgccactc ccactgtcct ttcctaataa aatgaggaaa ttgcatcgca ttgtctgagt
     2101 aggtgtcatt ctattctggg gggtggggtg gggcaggaca gcaaggggga ggattgggaa
     2161 gacaatagca ggcatgctgg ggatgcggtg ggctctatgg cttctgaggc ggaaagaacc
     2221 agctggggct ctagggggta tccccacgcg ccctgtagcg gcgcattaag cgcggcgggt
     2281 gtggtggtta cgcgcagcgt gaccgctaca cttgccagcg ccctagcgcc cgctcctttc
     2341 gctttcttcc cttcctttct cgccacgttc gccggctttc cccgtcaagc tctaaatcgg
     2401 gggctccctt tagggttccg atttagtgct ttacggcacc tcgaccccaa aaaacttgat
     2461 tagggtgatg gttcacgtag tgggccatcg ccctgataga cggtttttcg ccctttgacg
     2521 ttggagtcca cgttctttaa tagtggactc ttgttccaaa ctggaacaac actcaaccct
     2581 atctcggtct attcttttga tttataaggg attttgccga tttcggccta ttggttaaaa
     2641 aatgagctga tttaacaaaa atttaacgcg aattaattct gtggaatgtg tgtcagttag
     2701 ggtgtggaaa gtccccaggc tccccagcag gcagaagtat gcaaagcatg catctcaatt
     2761 agtcagcaac caggtgtgga aagtccccag gctccccagc aggcagaagt atgcaaagca
     2821 tgcatctcaa ttagtcagca accatagtcc cgcccctaac tccgcccatc ccgcccctaa
     2881 ctccgcccag ttccgcccat tctccgcccc atggctgact aatttttttt atttatgcag
     2941 aggccgaggc cgcctctgcc tctgagctat tccagaagta gtgaggaggc ttttttggag
     3001 gcctaggctt ttgcaaaaag ctcccgggag cttgtatatc cattttcgga tctgatcaag
     3061 agacaggatg aggatcgttt cgcatgattg aacaagatgg attgcacgca ggttctccgg
     3121 ccgcttgggt ggagaggcta ttcggctatg actgggcaca acagacaatc ggctgctctg
     3181 atgccgccgt gttccggctg tcagcgcagg ggcgcccggt tctttttgtc aagaccgacc
     3241 tgtccggtgc cctgaatgaa ctgcaggacg aggcagcgcg gctatcgtgg ctggccacga
     3301 cgggcgttcc ttgcgcagct gtgctcgacg ttgtcactga agcgggaagg gactggctgc
     3361 tattgggcga agtgccgggg caggatctcc tgtcatctca ccttgctcct gccgagaaag
     3421 tatccatcat ggctgatgca atgcggcggc tgcatacgct tgatccggct acctgcccat
     3481 tcgaccacca agcgaaacat cgcatcgagc gagcacgtac tcggatggaa gccggtcttg
     3541 tcgatcagga tgatctggac gaagagcatc aggggctcgc gccagccgaa ctgttcgcca
     3601 ggctcaaggc gcgcatgccc gacggcgagg atctcgtcgt gacccatggc gatgcctgct
     3661 tgccgaatat catggtggaa aatggccgct tttctggatt catcgactgt ggccggctgg
     3721 gtgtggcgga ccgctatcag gacatagcgt tggctacccg tgatattgct gaagagcttg
     3781 gcggcgaatg ggctgaccgc ttcctcgtgc tttacggtat cgccgctccc gattcgcagc
     3841 gcatcgcctt ctatcgcctt cttgacgagt tcttctgagc gggactctgg ggttcgaaat
     3901 gaccgaccaa gcgacgccca acctgccatc acgagatttc gattccaccg ccgccttcta
     3961 tgaaaggttg ggcttcggaa tcgttttccg ggacgccggc tggatgatcc tccagcgcgg
     4021 ggatctcatg ctggagttct tcgcccaccc caacttgttt attgcagctt ataatggtta
     4081 caaataaagc aatagcatca caaatttcac aaataaagca tttttttcac tgcattctag
     4141 ttgtggtttg tccaaactca tcaatgtatc ttatcatgtc tgtataccgt cgacctctag
     4201 ctagagcttg gcgtaatcat ggtcatagct gtttcctgtg tgaaattgtt atccgctcac
     4261 aattccacac aacatacgag ccggaagcat aaagtgtaaa gcctggggtg cctaatgagt
     4321 gagctaactc acattaattg cgttgcgctc actgcccgct ttccagtcgg gaaacctgtc
     4381 gtgccagctg cattaatgaa tcggccaacg cgcggggaga ggcggtttgc gtattgggcg
     4441 ctcttccgct tcctcgctca ctgactcgct gcgctcggtc gttcggctgc ggcgagcggt
     4501 atcagctcac tcaaaggcgg taatacggtt atccacagaa tcaggggata acgcaggaaa
     4561 gaacatgtga gcaaaaggcc agcaaaaggc caggaaccgt aaaaaggccg cgttgctggc
     4621 gtttttccat aggctccgcc cccctgacga gcatcacaaa aatcgacgct caagtcagag
     4681 gtggcgaaac ccgacaggac tataaagata ccaggcgttt ccccctggaa gctccctcgt
     4741 gcgctctcct gttccgaccc tgccgcttac cggatacctg tccgcctttc tcccttcggg
     4801 aagcgtggcg ctttctcata gctcacgctg taggtatctc agttcggtgt aggtcgttcg
     4861 ctccaagctg ggctgtgtgc acgaaccccc cgttcagccc gaccgctgcg ccttatccgg
     4921 taactatcgt cttgagtcca acccggtaag acacgactta tcgccactgg cagcagccac
     4981 tggtaacagg attagcagag cgaggtatgt aggcggtgct acagagttct tgaagtggtg
     5041 gcctaactac ggctacacta gaagaacagt atttggtatc tgcgctctgc tgaagccagt
     5101 taccttcgga aaaagagttg gtagctcttg atccggcaaa caaaccaccg ctggtagcgg
     5161 tttttttgtt tgcaagcagc agattacgcg cagaaaaaaa ggatctcaag aagatccttt
     5221 gatcttttct acggggtctg acgctcagtg gaacgaaaac tcacgttaag ggattttggt
     5281 catgagatta tcaaaaagga tcttcaccta gatcctttta aattaaaaat gaagttttaa
     5341 atcaatctaa agtatatatg agtaaacttg gtctgacagt taccaatgct taatcagtga
     5401 ggcacctatc tcagcgatct gtctatttcg ttcatccata gttgcctgac tccccgtcgt
     5461 gtagataact acgatacggg agggcttacc atctggcccc agtgctgcaa tgataccgcg
     5521 agacccacgc tcaccggctc cagatttatc agcaataaac cagccagccg gaagggccga
     5581 gcgcagaagt ggtcctgcaa ctttatccgc ctccatccag tctattaatt gttgccggga
     5641 agctagagta agtagttcgc cagttaatag tttgcgcaac gttgttgcca ttgctacagg
     5701 catcgtggtg tcacgctcgt cgtttggtat ggcttcattc agctccggtt cccaacgatc
     5761 aaggcgagtt acatgatccc ccatgttgtg caaaaaagcg gttagctcct tcggtcctcc
     5821 gatcgttgtc agaagtaagt tggccgcagt gttatcactc atggttatgg cagcactgca
     5881 taattctctt actgtcatgc catccgtaag atgcttttct gtgactggtg agtactcaac
     5941 caagtcattc tgagaatagt gtatgcggcg accgagttgc tcttgcccgg cgtcaatacg
     6001 ggataatacc gcgccacata gcagaacttt aaaagtgctc atcattggaa aacgttcttc
     6061 ggggcgaaaa ctctcaagga tcttaccgct gttgagatcc agttcgatgt aacccactcg
     6121 tgcacccaac tgatcttcag catcttttac tttcaccagc gtttctgggt gagcaaaaac
     6181 aggaaggcaa aatgccgcaa aaaagggaat aagggcgaca cggaaatgtt gaatactcat
     6241 actcttcctt tttcaatatt attgaagcat ttatcagggt tattgtctca tgagcggata
     6301 catatttgaa tgtatttaga aaaataaaca aataggggtt ccgcgcacat ttccccgaaa
     6361 agtgccacct gacgtc
//

质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
         收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
         1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
              ①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
              ②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
              ③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
              ④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
              ⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
              ⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
        2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
              四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
        3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
              穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
        4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
              直接挑取单菌落至液体培养基中。
        5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
              单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
        6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
              收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。

二、转化图片

P3969/pCMV-SPORT6-NCAPH2（219-1818bp）人源基因质粒

P3971/pCMV-SPORT6-C11orf74人源基因质粒

P3972/pCMV-SPORT6-PBXIP1人源基因质粒

P3973/pCMV-SPORT6-USP48人源基因质粒

P3974/pCMV-SPORT6-ABCD1人源基因质粒

P3975/pCMV-SPORT6-C1D人源基因质粒

P3976/pCMV-SPORT6-BCL7B人源基因质粒

P3977/pCMV-SPORT6-ALDOA人源基因质粒

P3978/pCMV-SPORT6-PFKL人源基因质粒

P3979/pCMV-SPORT6-ACAD10人源基因质粒

P3980/pCMV-SPORT6-MOAP1人源基因质粒