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- Xybio
- 上海
- P1422
- 2025年07月16日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20
- 保质期：
2年
- 英文名：
pJB866
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
基本信息
名称：pJB866质粒
别称: pJB866
质粒属性
质粒简介
pJB866是一个革兰氏阴性菌广宿主表达载体，Pm启动子驱动目的基因的表达。
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 8296 bp ds-DNA circular SYN 15-SEP-2017
DEFINITION synthetic circular DNA
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 8296)
TITLE Direct Submission
JOURNAL Exported Sep 15, 2017 from MiaoLingPlasmid
http://www.miaolingbio.com
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..8296
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
misc_feature 5..127
/label=MCS
promoter complement(133..266)
/label=Pm promoter
/note="The bacterial Pm promoter is activated by XylS in
the presence of benzoate or m-toluate (Marques et al.,
1999)."
CDS 966..1931
/codon_start=1
/gene="xylS"
/product="XylS regulator encoded by the Pseudomonas putida
TOL plasmid pWWO"
/label=XylS
/note="stimulates transcription from the Pm promoter in the
presence of aromatic compounds such as m-toluate or
benzoate"
/translation="MDFCLLNEKSQIFVHAEPYAVSDYVNQYVGTHSIRLPKGGPPAGR
LHHRIFGCLDLCRISYGGSVRVISPGLETCYHLQIILKGHCLWRGHGQEHYFAPGELLL
LNPDDQADLTYSEDCEKFIVKLPSVVLDRACSDNNWHKPREGIRFAARHNLQQLDGFIN
LLGLVCDEAEHTKSMPRVQEHYAGIIASKLLEMLGSNVSREIFSKGNPSFERVVQFIEE
NLKRNISLERLAELAMMSPRSLYNLFEKHAGTTPKNYIRNRKLESIRACLNDPSANVRS
ITEIALDYGFLHLGRFAENYRSAFGELPSDTLRQCKKEVA"
oriT 2471..2579
/note="incP origin of transfer"
CDS complement(3036..3686)
/codon_start=1
/label=TetR
/translation="MTKLQPNTVIRAALDLLNEVGVDGLTTRKLAERLGVQQPALYWHF
RNKRALLDALAEAMLAENHSTSVPRADDDWRSFLTGNARSFRQALLAYRDGARIHAGTR
PGAPQMETADAQLRFLCEAGFSAGDAVNALMTISYFTVGAVLEEQAGDSESGERGGTVE
QAPLSPLLRAAIDAFDEAGPDAAFEQGLAVIVDGLAKRRLVVRNVEGPRKGDD"
CDS 3717..4991
/codon_start=1
/label=TetA
/translation="MSTNLSVIKNPRVQSDQRRLVRRPDVKPNIPLIVILSTVALDAVG
IGLIMPVLPGLLRDLVHSNDVTAHYGILLALYALVQFACAPVLGAL-SDRFGRRPILLVS
LAGATVDYAIMATAPFLWVLYIGRIVAGITGATGAVAGAYIADITDGDERARHFGFMSA
CFGFGMVAGPVLGGLMGGFSPHAPFFAAAALNGLNFLTGCFLLPESHKGERRPLRREAL
NPLSFVRWARGMTVVAALMAVFFIMQLVGQVPAALWVIFGEDRFHWDATTIGISLAAFG
ILHSLAQAMITGPVAARLGERRALMLGMIADGTGYILLAFATRGWMAFPIMVLLASGGI
GMPALQAMLSRQVDEERQGQLQGSLAALTSLTSIVGPLLFTAIYAASITTWNGWAWIAG
AALYLLCLPALRRGLWSGAGQRADR"
rep_origin 5566..6096
/label=RK2 oriV
/note="incP origin of replication"
misc_feature 6318..6436
/label=Neo Promoter
CDS 6488..7636
/codon_start=1
/product="trans-acting replication protein that binds to
and activates oriV"
/label=trfA
/translation="MNRTFDRKAYRQELIDAGFSAEDAETIASRTVMRAPRETFQSVGS
MVQQATAKIERDSVQLAPPALPAPSAAVERSRRLEQEAAGLAKSMTIDTRGTMTTKKRK
TAGEDLAKQVSEAKQAALLKHTKQQIKEMQLSLFDIAPWPDTMRAMPNDTARSALFTTR
NKKIPREALQNKVIFHVNKDVKITYTGVELRADDDELVWQQVLEYAKRTPIGEPITFTF
YELCQDLGWSINGRYYTKAEECLSRLQATAMGFTSDRVGHLESVSLLHRFRVLDRGKKT
SRCQVLIDEEIVVLFAGDHYTKFIWEKYRKLSPTARRMFDYFSSHREPYPLKLETFRLM
CGSDSTRVKKWREQVGEACEELRGSGLVEHAWVNDDLVHCKR"
misc_feature 7687..8296
/label=Termnator
ORIGIN
1 gatcttcgaa tgcatcgcgc gcaccgtacg tctcgaggaa ttcctgcagg atatctggat
61 ccacgaagct tcccatggtg acgtcaccgg ttctagatac ctaggtgagc tctggtaccg
121 cggccgcaat tcacatgttc atgactccat tattattgtt tctgttgcat aaagcctaag
181 gggtaggcct ttctagagat agccattttt tgcactcctg tatccgcttc ttgcaaggct
241 ggacttatcc ctatcaaacc ggacacccgg tcgttggtca gatcaagcta attcccatgc
301 atggtgaaaa cgggggcgaa gaagttgtcc atattggcca cgtttaaatc aaaactggtg
361 aaactcaccc agggattggc tgagacgaaa aacatattct caataaaccc tttagggaaa
421 taggccaggt tttcaccgta acacgccaca tcttgcgaat atatgtgtag aaactgccgg
481 aaatcgtcgt ggtattcact ccagagcgat gaaaacgttt cagtttgctc atggaaaacg
541 gtgtaacaag ggtgaacact atcccatatc accagctcac cgtctttcat tgccatacgt
601 aattccggat gagcattcat caggcgggca agaatgtgaa taaaggccgg ataaaacttg
661 tgcttatttt tctttacggt ctttaaaaag gccgtaatat ccagcagatc ccctttatcc
721 gccaattcgt cgccgcatgc cccgacagca cgaacttctg gtgttctcgc ttcttaaaaa
781 gaacgtcttc gttctgcttg gcgttatttt tgcttggaaa agtggtcact gattgcaaaa
841 aggatggcgc aacgtggcaa tgggggtaac ccgtatacgc atcacgtcga gatgcatttt
901 catcgacttg gcgcctttct acatcacacc aagcagccca cattaaaata agagaaccgt
961 gaactatgga tttttgctta ttgaacgaga aaagtcagat cttcgtccac gccgagccct
1021 atgcagtctc cgattatgtt aaccagtatg tcggtacgca ctctattcgc ctgcccaagg
1081 gcgggccccc ggcaggcagg ctgcaccaca gaatcttcgg atgcctcgac ctgtgtcgaa
1141 tcagctacgg cggtagcgtg agggtaatct cgcctggatt agagacctgt tatcatctgc
1201 aaataatact caaaggccat tgcctgtggc gtggccatgg ccaggagcac tattttgcgc
1261 cgggcgaact attgctgctc aatccggatg accaagccga cctgacctat tcagaagatt
1321 gcgagaaatt tatcgttaaa ttgccctcag tggtccttga tcgggcatgc agtgacaaca
1381 attggcacaa gccgagggag ggtatccgtt tcgccgcgcg acacaatctc cagcaactcg
1441 atggctttat caatctactc gggttagttt gtgacgaagc ggaacataca aagtcgatgc
1501 ctcgggtcca agagcactat gcggggatca tcgcttccaa gctgctcgaa atgctgggca
1561 gcaatgtcag ccgtgaaatt ttcagcaaag gtaacccgtc tttcgagcga gtcgttcaat
1621 tcattgagga gaatctcaaa cggaatatca gccttgagcg gttagcggag ctggcgatga
1681 tgagtccacg ctcgctctac aatttgttcg agaagcatgc cggcaccacg ccgaagaact
1741 acatccgcaa ccgcaagctc gaaagcatcc gcgcctgctt gaacgatccc agtgccaatg
1801 tgcgtagtat aactgagata gccctagact acggcttctt acatttggga cgcttcgctg
1861 aaaactatag gagcgcgttc ggcgagttgc cttccgacac cctgcgtcaa tgcaaaaagg
1921 aagtggcttg attacgaacg tagccgaaga agggatgggt tggcatcgcc cggctttctt
1981 agacactctc caagctctga aatagcgttt tacaaactcc actggctata gtgccggcgt
2041 ttgcccgcgc tctccgtggc cgcgtcccaa tgcaggtcgg gttcctcgac ccgaagtgcc
2101 cttgggcatc tccacttcag cgtctgacct tgctggccag ttcgccgccg atgccgaagt
2161 ggcccttggc catctccgtg ataatcactc gcacgctggt cagcggcgca tccagggagc
2221 gcgagatggc ctcgctgact tcccgaatga gggtttcctt ctgctcgtcg ctgcggcctt
2281 caaggatgtg gatctgctgg ccgaaagggg gatgtgctgc aaggcgatta agttgggtaa
2341 cgccagggtt ttcccagtca cgacgttgta aaacgacggc cagtgaatta attcttgaag
2401 acgaaagggc ctcgtgatac gcctattttt ataggttaat gtcatgataa taatggtttc
2461 ttagagctta cggccagcct cgcagagcag gattcccgtt gagcaccgcc aggtgcgaat
2521 aagggacagt gaagaaggaa cacccgctcg cgggtgggcc tacttcacct atcctgcccg
2581 gctgacgccg ttggatacac caaggaaagt ctacacgaac cctttggcaa aatcctgtat
2641 atcgtgcgaa aaaggatgga tataccgaaa aaatcgctat aatgaccccg aagcagggtt
2701 atgcagcgga aaagatccgt cggctgcagc gatccgtcga tctatctcat ctgcgcaagg
2761 cagaacgtga agacggccgc cctggacctc gcccgcgagc gccagcgcac gaggccggcg
2821 cgcggacccg ccgcggccca cgagcggacg ccgcagcagg agcgccagaa ggccgccaga
2881 gaggccgagc gcggcgtgag gcttggacgc tagggcaggg catgaaaaag cccgtagcgg
2941 gcgctacggg gctctgacgc ggtggaaagg gggaggggat gttgtctaca tggctctgct
3001 gtagtgagtg ggttgcgctc cggcagcggt cctgatcaat cgtcaccctt tctcggtcct
3061 tcaacgttcc tgacaacgag cctccttttc gccaatccat cgacaatcac cgcgagtccc
3121 tgctcgaacg ctgcgtccgg accggcttcg tcgaaggcgt ctatcgcggc ccgcaacagc
3181 ggcgagagcg gagcctgttc aacggtgccg ccgcgctcgc cggactcgct gtcgccggcc
3241 tgctcctcaa gcacggcccc aacagtgaag tagctgattg tcatcagcgc attgacggcg
3301 tccccggccg aaaaacccgc ctcgcagagg aagcgaagct gcgcgtcggc cgtttccatc
3361 tgcggtgcgc ccggtcgcgt gccggcatgg atgcgcgcgc catcgcggta ggcgagcagc
3421 gcctgcctga agctgcgggc attcccagtc agaaatgagc gccagtcgtc gtcggctctc
3481 ggcaccgaag tgctatgatt ctccgccagc atggcttcgg ccagtgcgtc gagcagcgcc
3541 cgcttgttcc tgaagtgcca gtaaagcgcc ggctgctgaa cccccaaccg ttccgccagt
3601 ttgcgtgtcg tcagaccgtc tacgccgacc tcgttcaaca ggtctagggc ggcacggatc
3661 actgtattcg gctgcaactt tgtcatgctt gacactttat cactgataaa cataatatgt
3721 ccaccaactt atcagtgata aagaatccgc gcgttcaatc ggaccagcgg aggctggtcc
3781 ggaggccaga cgtgaaaccc aacatacccc tgatcgtaat tctgagcact gtcgcgctcg
3841 acgctgtcgg catcggcctg attatgccgg tgctgccggg cctcctgcgc gatctggttc
3901 actcgaacga cgtcaccgcc cactatggca ttctgctggc gctgtatgcg ttggtgcaat
3961 ttgcctgcgc acctgtgctg ggcgcgctgt cggatcgttt cgggcggcgg ccaatcttgc
4021 tcgtctcgct ggccggcgcc actgtcgact acgccatcat ggcgacagcg cctttccttt
4081 gggttctcta tatcgggcgg atcgtggccg gcatcaccgg ggcgactggg gcggtagccg
4141 gcgcttatat tgccgatatc actgatggcg atgagcgcgc gcggcacttc ggcttcatga
4201 gcgcctgttt cgggttcggg atggtcgcgg gacctgtgct cggtgggctg atgggcggtt
4261 tctcccccca cgctccgttc ttcgccgcgg cagccttgaa cggcctcaat ttcctgacgg
4321 gctgtttcct tttgccggag tcgcacaaag gcgaacgccg gccgttacgc cgggaggctc
4381 tcaacccgct cagcttcgtt cggtgggccc ggggcatgac cgtcgtcgcc gccctgatgg
4441 cggtcttctt catcatgcaa cttgtcggac aggtgccggc cgcgctttgg gtcattttcg
4501 gcgaggatcg ctttcactgg gacgcgacca cgatcggcat ttcgcttgcc gcatttggca
4561 ttctgcattc actcgcccag gcaatgatca ccggccctgt agccgcccgg ctcggcgaaa
4621 ggcgggcact catgctcgga atgattgccg acggcacagg ctacatcctg cttgccttcg
4681 cgacacgggg atggatggcg ttcccgatca tggtcctgct tgcttcgggt ggcatcggaa
4741 tgccggcgct gcaagcaatg ttgtccaggc aggtggatga ggaacgccag gggcagctgc
4801 aaggctcact ggcggcgctc accagcctga cctcgatcgt cggacccctc ctcttcacgg
4861 cgatctatgc ggcttctata acaacgtgga acgggtgggc atggattgca ggcgctgccc
4921 tctacttgct ctgcctgccg gcgctgcgtc gcgggctttg gagcggcgca gggcaacgag
4981 ccgatcgctg atcgtggaaa cgatagggac ggatcgctgc agcgcaaact attaactggc
5041 gaactactta ctctagcttc ccggcaacaa ttaatagact ggatggaggc ggataaagtt
5101 gcaggaccac ttctgcgctc ggcccttccg gctggctggt ttattgctga taaatctgga
5161 gccggtgagc gtgggtctcg cggtatcatt gcagcactgg ggccagatgg taagccctcc
5221 cgtatcgtag ttatctacac gacggggagt caggcaacta tggatgaacg aaatagacag
5281 atcgctgaga taggtgcctc actgattaag cattggtaac tgtcagacca agtttactca
5341 tatatacttt agattgattt aaaacttcat ttttaattta aaaggatcta ggtgaagatc
5401 ctttttgata atctcatgac caaaatccct taacgtgagt tttcgttcca ctgagcgtca
5461 gaccccgtag aaaagatcaa aggatcttct tgagatcctt tttttctgcg ggggatcagg
5521 accgctgccg gagcgcaacc cactcactac agcagagcca tgtagggccg ccggcgttgt
5581 ggataccacg cggaaaactt ggccctcact gacagatgag gggcggacgt tgacacttga
5641 ggggccgact cacccggcgc ggcgttgaca gatgaggggc aggctcgatt tcggccggcg
5701 acgtggagct ggccagcctc gcaaatcggc gaaaacgcct gattttacgc gagtttccca
5761 cagatgatgt ggacaagcct ggggataagt gccctgcggt attgacactt gaggggcgcg
5821 actactgaca gatgaggggc gcgatccttg acacttgagg ggcagagtga tgacagatga
5881 ggggcgcacc tattgacatt tgaggggctg tccacaggca gaaaatccag catttgcaag
5941 ggtttccgcc cgtttttcgg ccaccgctaa cctgtctttt aacctgcttt taaaccaata
6001 tttataaacc ttgtttttaa ccagggctgc gccctggcgc gtgaccgcgc acgccgaagg
6061 ggggtgcccc cccttctcga accctcccgg cccgctaacg cggcacccca tccccccagg
6121 ggctgcgccc ctcggccgcg aacgacctca ccccaaaaat ggcagccacg tagaaagcca
6181 gtccgcagaa acggtgctga ccccggatga atgtcagcta ctgggctatc tggacaaggg
6241 aaaacgcaag cgcaaagaga aagcaggtag cttgcagtgg gcttacatgg cgatagctag
6301 actgggcggt tttatggaca gcaagcgaac cggaattgcc agctggggcg ccctctggta
6361 aggttgggaa gccctgcaaa gtaaactgga tggctttctt gccgccaagg atctgatggc
6421 gcaggggatc aagatcgacg gatcgatccg gggaattaat tccggggcaa tcccgcaagg
6481 agggtgaatg aatcggacgt ttgaccggaa ggcatacagg caagaactga tcgacgcggg
6541 gttttccgcc gaggatgccg aaaccatcgc aagccgcacc gtcatgcgtg cgccccgcga
6601 aaccttccag tccgtcggct cgatggtcca gcaagctacg gccaagatcg agcgcgacag
6661 cgtgcaactg gctccccctg ccctgcccgc gccatcggcc gccgtggagc gttcgcgtcg
6721 tctcgaacag gaggcggcag gtttggcgaa gtcgatgacc atcgacacgc gaggaactat
6781 gacgaccaag aagcgaaaaa ccgccggcga ggacctggca aaacaggtca gcgaggccaa
6841 gcaggccgcg ttgctgaaac acacgaagca gcagatcaag gaaatgcagc tttccttgtt
6901 cgatattgcg ccgtggccgg acacgatgcg agcgatgcca aacgacacgg cccgctctgc
6961 cctgttcacc acgcgcaaca agaaaatccc gcgcgaggcg ctgcaaaaca aggtcatttt
7021 ccacgtcaac aaggacgtga agatcaccta caccggcgtc gagctgcggg ccgacgatga
7081 cgaactggtg tggcagcagg tgttggagta cgcgaagcgc acccctatcg gcgagccgat
7141 caccttcacg ttctacgagc tttgccagga cctgggctgg tcgatcaatg gccggtatta
7201 cacgaaggcc gaggaatgcc tgtcgcgcct acaggcgacg gcgatgggct tcacgtccga
7261 ccgcgttggg cacctggaat cggtgtcgct gctgcaccgc ttccgcgtcc tggaccgtgg
7321 caagaaaacg tcccgttgcc aggtcctgat cgacgaggaa atcgtcgtgc tgtttgctgg
7381 cgaccactac acgaaattca tatgggagaa gtaccgcaag ctgtcgccga cggcccgacg
7441 gatgttcgac tatttcagct cgcaccggga gccgtacccg ctcaagctgg aaaccttccg
7501 cctcatgtgc ggatcggatt ccacccgcgt gaagaagtgg cgcgagcagg tcggcgaagc
7561 ctgcgaagag ttgcgaggca gcggcctggt ggaacacgcc tgggtcaatg atgacctggt
7621 gcattgcaaa cgctagggcc ttgtggggtc agttccggct gggggttcag cagccacctg
7681 catcgcaagc tagcttgcta gagggtcagc tttatgcttg taaaccgttt tgtgaaaaaa
7741 tttttaaaat aaaaaagggg acctctaggg tccccaatta attagtaata taatctatta
7801 aaggtcattc aaaaggtcat ccaccggatc aattcccctg ctcgcgcagg ctgggtgcca
7861 agctctcggg taacatcaag gcccgatcct tggtagtcgg caaataatgt ctaacaattc
7921 gttcaagccg acgccgcttc gcggcgcggc ttaactcaag cgttagatgc actaagcaca
7981 taattgctca cagccaaact atcaggtcaa gtctgctttt attattttta agcgtgcata
8041 ataagcccta cacaaattgg gagatatatc atgaaaggct ggctttttct tgttatcgca
8101 atagttggcg aagtaatcgc aacatccgca ttaaaatcta gcgagggctt tactaagctg
8161 atccggtgga tgaccttttg aatgaccttt aatagattat attactaatt aattggggac
8221 cctagaggtc ccctttttta ttttaaaaat tttttcacaa aacggtttac aagcataaag
8281 ctgactctag ctagag
//
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
名称：pJB866质粒
别称: pJB866
| 启动子: | Pm |
|---|---|
| 复制子: | RK2 oriV |
| 终止子: | Termnator |
| 质粒分类: | 其它宿主质粒；其它系列质粒；其它功能质粒 |
| 质粒大小: | 8296bp |
| 原核抗性: | Tet |
| 克隆菌株: | DH5a |
| 培养条件: | 30度 |
| 表达宿主: | 革兰氏阴性菌 |
| 培养条件: | 请参考文献 |
| 5'测序引物: | Pm-F：cggtttgatagggataagtcc |
| 3'测序引物: | Ter-R：ccgcattaaaatctagcgagg |
质粒属性
| 载体宿主： | 广宿主 |
|---|---|
| 载体用途： | 蛋白表达 |
| 基因种属： | |
| 基因类型： | ORF |
| 原核抗性： | Tet |
| 筛选标记： | |
| 荧光蛋白： |
质粒简介
pJB866是一个革兰氏阴性菌广宿主表达载体，Pm启动子驱动目的基因的表达。
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 8296 bp ds-DNA circular SYN 15-SEP-2017
DEFINITION synthetic circular DNA
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 8296)
TITLE Direct Submission
JOURNAL Exported Sep 15, 2017 from MiaoLingPlasmid
http://www.miaolingbio.com
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..8296
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
misc_feature 5..127
/label=MCS
promoter complement(133..266)
/label=Pm promoter
/note="The bacterial Pm promoter is activated by XylS in
the presence of benzoate or m-toluate (Marques et al.,
1999)."
CDS 966..1931
/codon_start=1
/gene="xylS"
/product="XylS regulator encoded by the Pseudomonas putida
TOL plasmid pWWO"
/label=XylS
/note="stimulates transcription from the Pm promoter in the
presence of aromatic compounds such as m-toluate or
benzoate"
/translation="MDFCLLNEKSQIFVHAEPYAVSDYVNQYVGTHSIRLPKGGPPAGR
LHHRIFGCLDLCRISYGGSVRVISPGLETCYHLQIILKGHCLWRGHGQEHYFAPGELLL
LNPDDQADLTYSEDCEKFIVKLPSVVLDRACSDNNWHKPREGIRFAARHNLQQLDGFIN
LLGLVCDEAEHTKSMPRVQEHYAGIIASKLLEMLGSNVSREIFSKGNPSFERVVQFIEE
NLKRNISLERLAELAMMSPRSLYNLFEKHAGTTPKNYIRNRKLESIRACLNDPSANVRS
ITEIALDYGFLHLGRFAENYRSAFGELPSDTLRQCKKEVA"
oriT 2471..2579
/note="incP origin of transfer"
CDS complement(3036..3686)
/codon_start=1
/label=TetR
/translation="MTKLQPNTVIRAALDLLNEVGVDGLTTRKLAERLGVQQPALYWHF
RNKRALLDALAEAMLAENHSTSVPRADDDWRSFLTGNARSFRQALLAYRDGARIHAGTR
PGAPQMETADAQLRFLCEAGFSAGDAVNALMTISYFTVGAVLEEQAGDSESGERGGTVE
QAPLSPLLRAAIDAFDEAGPDAAFEQGLAVIVDGLAKRRLVVRNVEGPRKGDD"
CDS 3717..4991
/codon_start=1
/label=TetA
/translation="MSTNLSVIKNPRVQSDQRRLVRRPDVKPNIPLIVILSTVALDAVG
IGLIMPVLPGLLRDLVHSNDVTAHYGILLALYALVQFACAPVLGAL-SDRFGRRPILLVS
LAGATVDYAIMATAPFLWVLYIGRIVAGITGATGAVAGAYIADITDGDERARHFGFMSA
CFGFGMVAGPVLGGLMGGFSPHAPFFAAAALNGLNFLTGCFLLPESHKGERRPLRREAL
NPLSFVRWARGMTVVAALMAVFFIMQLVGQVPAALWVIFGEDRFHWDATTIGISLAAFG
ILHSLAQAMITGPVAARLGERRALMLGMIADGTGYILLAFATRGWMAFPIMVLLASGGI
GMPALQAMLSRQVDEERQGQLQGSLAALTSLTSIVGPLLFTAIYAASITTWNGWAWIAG
AALYLLCLPALRRGLWSGAGQRADR"
rep_origin 5566..6096
/label=RK2 oriV
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and activates oriV"
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MVQQATAKIERDSVQLAPPALPAPSAAVERSRRLEQEAAGLAKSMTIDTRGTMTTKKRK
TAGEDLAKQVSEAKQAALLKHTKQQIKEMQLSLFDIAPWPDTMRAMPNDTARSALFTTR
NKKIPREALQNKVIFHVNKDVKITYTGVELRADDDELVWQQVLEYAKRTPIGEPITFTF
YELCQDLGWSINGRYYTKAEECLSRLQATAMGFTSDRVGHLESVSLLHRFRVLDRGKKT
SRCQVLIDEEIVVLFAGDHYTKFIWEKYRKLSPTARRMFDYFSSHREPYPLKLETFRLM
CGSDSTRVKKWREQVGEACEELRGSGLVEHAWVNDDLVHCKR"
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ORIGIN
1 gatcttcgaa tgcatcgcgc gcaccgtacg tctcgaggaa ttcctgcagg atatctggat
61 ccacgaagct tcccatggtg acgtcaccgg ttctagatac ctaggtgagc tctggtaccg
121 cggccgcaat tcacatgttc atgactccat tattattgtt tctgttgcat aaagcctaag
181 gggtaggcct ttctagagat agccattttt tgcactcctg tatccgcttc ttgcaaggct
241 ggacttatcc ctatcaaacc ggacacccgg tcgttggtca gatcaagcta attcccatgc
301 atggtgaaaa cgggggcgaa gaagttgtcc atattggcca cgtttaaatc aaaactggtg
361 aaactcaccc agggattggc tgagacgaaa aacatattct caataaaccc tttagggaaa
421 taggccaggt tttcaccgta acacgccaca tcttgcgaat atatgtgtag aaactgccgg
481 aaatcgtcgt ggtattcact ccagagcgat gaaaacgttt cagtttgctc atggaaaacg
541 gtgtaacaag ggtgaacact atcccatatc accagctcac cgtctttcat tgccatacgt
601 aattccggat gagcattcat caggcgggca agaatgtgaa taaaggccgg ataaaacttg
661 tgcttatttt tctttacggt ctttaaaaag gccgtaatat ccagcagatc ccctttatcc
721 gccaattcgt cgccgcatgc cccgacagca cgaacttctg gtgttctcgc ttcttaaaaa
781 gaacgtcttc gttctgcttg gcgttatttt tgcttggaaa agtggtcact gattgcaaaa
841 aggatggcgc aacgtggcaa tgggggtaac ccgtatacgc atcacgtcga gatgcatttt
901 catcgacttg gcgcctttct acatcacacc aagcagccca cattaaaata agagaaccgt
961 gaactatgga tttttgctta ttgaacgaga aaagtcagat cttcgtccac gccgagccct
1021 atgcagtctc cgattatgtt aaccagtatg tcggtacgca ctctattcgc ctgcccaagg
1081 gcgggccccc ggcaggcagg ctgcaccaca gaatcttcgg atgcctcgac ctgtgtcgaa
1141 tcagctacgg cggtagcgtg agggtaatct cgcctggatt agagacctgt tatcatctgc
1201 aaataatact caaaggccat tgcctgtggc gtggccatgg ccaggagcac tattttgcgc
1261 cgggcgaact attgctgctc aatccggatg accaagccga cctgacctat tcagaagatt
1321 gcgagaaatt tatcgttaaa ttgccctcag tggtccttga tcgggcatgc agtgacaaca
1381 attggcacaa gccgagggag ggtatccgtt tcgccgcgcg acacaatctc cagcaactcg
1441 atggctttat caatctactc gggttagttt gtgacgaagc ggaacataca aagtcgatgc
1501 ctcgggtcca agagcactat gcggggatca tcgcttccaa gctgctcgaa atgctgggca
1561 gcaatgtcag ccgtgaaatt ttcagcaaag gtaacccgtc tttcgagcga gtcgttcaat
1621 tcattgagga gaatctcaaa cggaatatca gccttgagcg gttagcggag ctggcgatga
1681 tgagtccacg ctcgctctac aatttgttcg agaagcatgc cggcaccacg ccgaagaact
1741 acatccgcaa ccgcaagctc gaaagcatcc gcgcctgctt gaacgatccc agtgccaatg
1801 tgcgtagtat aactgagata gccctagact acggcttctt acatttggga cgcttcgctg
1861 aaaactatag gagcgcgttc ggcgagttgc cttccgacac cctgcgtcaa tgcaaaaagg
1921 aagtggcttg attacgaacg tagccgaaga agggatgggt tggcatcgcc cggctttctt
1981 agacactctc caagctctga aatagcgttt tacaaactcc actggctata gtgccggcgt
2041 ttgcccgcgc tctccgtggc cgcgtcccaa tgcaggtcgg gttcctcgac ccgaagtgcc
2101 cttgggcatc tccacttcag cgtctgacct tgctggccag ttcgccgccg atgccgaagt
2161 ggcccttggc catctccgtg ataatcactc gcacgctggt cagcggcgca tccagggagc
2221 gcgagatggc ctcgctgact tcccgaatga gggtttcctt ctgctcgtcg ctgcggcctt
2281 caaggatgtg gatctgctgg ccgaaagggg gatgtgctgc aaggcgatta agttgggtaa
2341 cgccagggtt ttcccagtca cgacgttgta aaacgacggc cagtgaatta attcttgaag
2401 acgaaagggc ctcgtgatac gcctattttt ataggttaat gtcatgataa taatggtttc
2461 ttagagctta cggccagcct cgcagagcag gattcccgtt gagcaccgcc aggtgcgaat
2521 aagggacagt gaagaaggaa cacccgctcg cgggtgggcc tacttcacct atcctgcccg
2581 gctgacgccg ttggatacac caaggaaagt ctacacgaac cctttggcaa aatcctgtat
2641 atcgtgcgaa aaaggatgga tataccgaaa aaatcgctat aatgaccccg aagcagggtt
2701 atgcagcgga aaagatccgt cggctgcagc gatccgtcga tctatctcat ctgcgcaagg
2761 cagaacgtga agacggccgc cctggacctc gcccgcgagc gccagcgcac gaggccggcg
2821 cgcggacccg ccgcggccca cgagcggacg ccgcagcagg agcgccagaa ggccgccaga
2881 gaggccgagc gcggcgtgag gcttggacgc tagggcaggg catgaaaaag cccgtagcgg
2941 gcgctacggg gctctgacgc ggtggaaagg gggaggggat gttgtctaca tggctctgct
3001 gtagtgagtg ggttgcgctc cggcagcggt cctgatcaat cgtcaccctt tctcggtcct
3061 tcaacgttcc tgacaacgag cctccttttc gccaatccat cgacaatcac cgcgagtccc
3121 tgctcgaacg ctgcgtccgg accggcttcg tcgaaggcgt ctatcgcggc ccgcaacagc
3181 ggcgagagcg gagcctgttc aacggtgccg ccgcgctcgc cggactcgct gtcgccggcc
3241 tgctcctcaa gcacggcccc aacagtgaag tagctgattg tcatcagcgc attgacggcg
3301 tccccggccg aaaaacccgc ctcgcagagg aagcgaagct gcgcgtcggc cgtttccatc
3361 tgcggtgcgc ccggtcgcgt gccggcatgg atgcgcgcgc catcgcggta ggcgagcagc
3421 gcctgcctga agctgcgggc attcccagtc agaaatgagc gccagtcgtc gtcggctctc
3481 ggcaccgaag tgctatgatt ctccgccagc atggcttcgg ccagtgcgtc gagcagcgcc
3541 cgcttgttcc tgaagtgcca gtaaagcgcc ggctgctgaa cccccaaccg ttccgccagt
3601 ttgcgtgtcg tcagaccgtc tacgccgacc tcgttcaaca ggtctagggc ggcacggatc
3661 actgtattcg gctgcaactt tgtcatgctt gacactttat cactgataaa cataatatgt
3721 ccaccaactt atcagtgata aagaatccgc gcgttcaatc ggaccagcgg aggctggtcc
3781 ggaggccaga cgtgaaaccc aacatacccc tgatcgtaat tctgagcact gtcgcgctcg
3841 acgctgtcgg catcggcctg attatgccgg tgctgccggg cctcctgcgc gatctggttc
3901 actcgaacga cgtcaccgcc cactatggca ttctgctggc gctgtatgcg ttggtgcaat
3961 ttgcctgcgc acctgtgctg ggcgcgctgt cggatcgttt cgggcggcgg ccaatcttgc
4021 tcgtctcgct ggccggcgcc actgtcgact acgccatcat ggcgacagcg cctttccttt
4081 gggttctcta tatcgggcgg atcgtggccg gcatcaccgg ggcgactggg gcggtagccg
4141 gcgcttatat tgccgatatc actgatggcg atgagcgcgc gcggcacttc ggcttcatga
4201 gcgcctgttt cgggttcggg atggtcgcgg gacctgtgct cggtgggctg atgggcggtt
4261 tctcccccca cgctccgttc ttcgccgcgg cagccttgaa cggcctcaat ttcctgacgg
4321 gctgtttcct tttgccggag tcgcacaaag gcgaacgccg gccgttacgc cgggaggctc
4381 tcaacccgct cagcttcgtt cggtgggccc ggggcatgac cgtcgtcgcc gccctgatgg
4441 cggtcttctt catcatgcaa cttgtcggac aggtgccggc cgcgctttgg gtcattttcg
4501 gcgaggatcg ctttcactgg gacgcgacca cgatcggcat ttcgcttgcc gcatttggca
4561 ttctgcattc actcgcccag gcaatgatca ccggccctgt agccgcccgg ctcggcgaaa
4621 ggcgggcact catgctcgga atgattgccg acggcacagg ctacatcctg cttgccttcg
4681 cgacacgggg atggatggcg ttcccgatca tggtcctgct tgcttcgggt ggcatcggaa
4741 tgccggcgct gcaagcaatg ttgtccaggc aggtggatga ggaacgccag gggcagctgc
4801 aaggctcact ggcggcgctc accagcctga cctcgatcgt cggacccctc ctcttcacgg
4861 cgatctatgc ggcttctata acaacgtgga acgggtgggc atggattgca ggcgctgccc
4921 tctacttgct ctgcctgccg gcgctgcgtc gcgggctttg gagcggcgca gggcaacgag
4981 ccgatcgctg atcgtggaaa cgatagggac ggatcgctgc agcgcaaact attaactggc
5041 gaactactta ctctagcttc ccggcaacaa ttaatagact ggatggaggc ggataaagtt
5101 gcaggaccac ttctgcgctc ggcccttccg gctggctggt ttattgctga taaatctgga
5161 gccggtgagc gtgggtctcg cggtatcatt gcagcactgg ggccagatgg taagccctcc
5221 cgtatcgtag ttatctacac gacggggagt caggcaacta tggatgaacg aaatagacag
5281 atcgctgaga taggtgcctc actgattaag cattggtaac tgtcagacca agtttactca
5341 tatatacttt agattgattt aaaacttcat ttttaattta aaaggatcta ggtgaagatc
5401 ctttttgata atctcatgac caaaatccct taacgtgagt tttcgttcca ctgagcgtca
5461 gaccccgtag aaaagatcaa aggatcttct tgagatcctt tttttctgcg ggggatcagg
5521 accgctgccg gagcgcaacc cactcactac agcagagcca tgtagggccg ccggcgttgt
5581 ggataccacg cggaaaactt ggccctcact gacagatgag gggcggacgt tgacacttga
5641 ggggccgact cacccggcgc ggcgttgaca gatgaggggc aggctcgatt tcggccggcg
5701 acgtggagct ggccagcctc gcaaatcggc gaaaacgcct gattttacgc gagtttccca
5761 cagatgatgt ggacaagcct ggggataagt gccctgcggt attgacactt gaggggcgcg
5821 actactgaca gatgaggggc gcgatccttg acacttgagg ggcagagtga tgacagatga
5881 ggggcgcacc tattgacatt tgaggggctg tccacaggca gaaaatccag catttgcaag
5941 ggtttccgcc cgtttttcgg ccaccgctaa cctgtctttt aacctgcttt taaaccaata
6001 tttataaacc ttgtttttaa ccagggctgc gccctggcgc gtgaccgcgc acgccgaagg
6061 ggggtgcccc cccttctcga accctcccgg cccgctaacg cggcacccca tccccccagg
6121 ggctgcgccc ctcggccgcg aacgacctca ccccaaaaat ggcagccacg tagaaagcca
6181 gtccgcagaa acggtgctga ccccggatga atgtcagcta ctgggctatc tggacaaggg
6241 aaaacgcaag cgcaaagaga aagcaggtag cttgcagtgg gcttacatgg cgatagctag
6301 actgggcggt tttatggaca gcaagcgaac cggaattgcc agctggggcg ccctctggta
6361 aggttgggaa gccctgcaaa gtaaactgga tggctttctt gccgccaagg atctgatggc
6421 gcaggggatc aagatcgacg gatcgatccg gggaattaat tccggggcaa tcccgcaagg
6481 agggtgaatg aatcggacgt ttgaccggaa ggcatacagg caagaactga tcgacgcggg
6541 gttttccgcc gaggatgccg aaaccatcgc aagccgcacc gtcatgcgtg cgccccgcga
6601 aaccttccag tccgtcggct cgatggtcca gcaagctacg gccaagatcg agcgcgacag
6661 cgtgcaactg gctccccctg ccctgcccgc gccatcggcc gccgtggagc gttcgcgtcg
6721 tctcgaacag gaggcggcag gtttggcgaa gtcgatgacc atcgacacgc gaggaactat
6781 gacgaccaag aagcgaaaaa ccgccggcga ggacctggca aaacaggtca gcgaggccaa
6841 gcaggccgcg ttgctgaaac acacgaagca gcagatcaag gaaatgcagc tttccttgtt
6901 cgatattgcg ccgtggccgg acacgatgcg agcgatgcca aacgacacgg cccgctctgc
6961 cctgttcacc acgcgcaaca agaaaatccc gcgcgaggcg ctgcaaaaca aggtcatttt
7021 ccacgtcaac aaggacgtga agatcaccta caccggcgtc gagctgcggg ccgacgatga
7081 cgaactggtg tggcagcagg tgttggagta cgcgaagcgc acccctatcg gcgagccgat
7141 caccttcacg ttctacgagc tttgccagga cctgggctgg tcgatcaatg gccggtatta
7201 cacgaaggcc gaggaatgcc tgtcgcgcct acaggcgacg gcgatgggct tcacgtccga
7261 ccgcgttggg cacctggaat cggtgtcgct gctgcaccgc ttccgcgtcc tggaccgtgg
7321 caagaaaacg tcccgttgcc aggtcctgat cgacgaggaa atcgtcgtgc tgtttgctgg
7381 cgaccactac acgaaattca tatgggagaa gtaccgcaag ctgtcgccga cggcccgacg
7441 gatgttcgac tatttcagct cgcaccggga gccgtacccg ctcaagctgg aaaccttccg
7501 cctcatgtgc ggatcggatt ccacccgcgt gaagaagtgg cgcgagcagg tcggcgaagc
7561 ctgcgaagag ttgcgaggca gcggcctggt ggaacacgcc tgggtcaatg atgacctggt
7621 gcattgcaaa cgctagggcc ttgtggggtc agttccggct gggggttcag cagccacctg
7681 catcgcaagc tagcttgcta gagggtcagc tttatgcttg taaaccgttt tgtgaaaaaa
7741 tttttaaaat aaaaaagggg acctctaggg tccccaatta attagtaata taatctatta
7801 aaggtcattc aaaaggtcat ccaccggatc aattcccctg ctcgcgcagg ctgggtgcca
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7921 gttcaagccg acgccgcttc gcggcgcggc ttaactcaag cgttagatgc actaagcaca
7981 taattgctca cagccaaact atcaggtcaa gtctgctttt attattttta agcgtgcata
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8221 cctagaggtc ccctttttta ttttaaaaat tttttcacaa aacggtttac aagcataaag
8281 ctgactctag ctagag
//
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P0083/pMCSG9大肠表达质粒 |
| P0781/pMCSG19大肠表达质粒 |
| P0078/pRSETA大肠表达质粒 |
| P2206/pRSETB大肠表达质粒 |
| P1636/pRSET6A大肠表达质粒 |
| P0084/pKK223-3大肠表达质粒 |
| P0814/pKK232-8大肠表达质粒 |
| P2290/pDEST15大肠表达质粒 |
| P4367/pCWori大肠杆菌表达质粒 |
| P0055/pET22b-EGFP大肠荧光质粒 |
| P0024/pET28a-EGFP大肠荧光质粒 |
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文献和实验相关实验
1、质粒的概念 质粒（Plasmid）是一种存在于细菌、酵母等微生物细胞中的小型环状双链 DNA 分子，能够独立于宿主染色体进行自我复制，并通常携带对宿主生存非必需但具有特定功能的基因（如抗生素抗性基因）。质粒是分子生物学和基因工程中最重要的工具之一。 质粒根据其用途可以分为多种不同的类型，如用于保存序列信息的克隆质粒（如：pUC 系列质粒），用于表达蛋白的质粒（如哺乳动物细胞表达所用的 pcDNA3.1 系列质粒），用于基因编辑的质粒（如哺乳动物细胞基因编辑所用的 espCas9-2A
) 克隆困难怎么办？ 对于大片段载体构建实验而言，难点在于片段扩增效率低、重组 / 连接困难、质粒稳定性差、容易发生断裂等。需针对这些痛点，从技术路线选择、实验细节优化两方面制定策略，具体方案如下： ①建议首先选择「分段克隆 + 拼接」 策略，降低连接难度； ②大片段克隆的关键在于长片段的扩增，所以需要从源头保证实验成功率，即保证模板完整度，在扩增前确保模板未发生降解；其次优化 PCR 体系，比如选择长片段专用 PCR 酶，通过梯度测试选择最佳模板上样量及退火温度等； ③避免高拷贝载体（如 pUC
summityoung 那位学长有ISRE质粒，谢谢。我有多种质粒可以交换 zfv2007 Do you have any lentivirus plasmid? zhujoker 我有，就是具有IRES启动子的质粒吗？ 本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴 师兄微信号：shixiongcoming
pJB866质粒
￥100 - 1000
