pG+HOST9革兰阳性质粒

基本信息
名称：pG+HOST9革兰阳性质粒
别称:  pGhost9;pG+host9

复制子:	repA
质粒分类:	其它宿主质粒；其它系列质粒
质粒大小:	3752bp
原核抗性:	Ery
克隆菌株:	MC1061
培养条件:	37度

质粒属性

载体宿主：	广宿主
载体用途：	蛋白表达
基因种属：	空载体
基因类型：	ORF
原核抗性：	Ery
筛选标记：
荧光蛋白：

质粒简介
 pG+HOST9质粒是乳酸菌和其他革兰氏阳性菌的温敏型整合载体。

质粒图谱


质粒序列
LOCUS       Exported                3752 bp ds-DNA     circular SYN 21-SEP-2017
DEFINITION  synthetic circular DNA
SOURCE      synthetic DNA construct
  ORGANISM  synthetic DNA construct
REFERENCE   1  (bases 1 to 3752)
  TITLE     Direct Submission
  JOURNAL   Exported Sep 21, 2017 from MiaoLingPlasmid
            http://www.miaolingbio.com
FEATURES             Location/Qualifiers
     source          1..3752
                     /organism="synthetic DNA construct"
                     /mol_type="other DNA"
     CDS             complement(151..888)
                     /codon_start=1
                     /label=Erm
                     /translation="MNKNIKYSQNFLTSEKVLNQIIKQLNLKETDTVYEIGTGKGHLTT
                     KLAKISKQVTSIELDSHLFNLSSEKLKLNTRVTLIHQDILQFQFPNKQRYKIVGSIPYH
                     LSTQIIKKVVFESHASDIYLIVEEGFYKRTLDIHRTLGLLLHTQVSIQQLLKLPAECFH
                     PKPKVNSVLIKLTRHTTDVPDKYWKLYTYFVSKWVNREYRQLFTKNQFHQAMKHAKVNN
                     LSTVTYEQVLSIFNSYLLFNGRK"
     CDS             2216..2914
                     /codon_start=1
                     /label=repA
                     /translation="MAIKNTKARNFGFLLYPDSIPNDWKEKLESLGVSMAVSPLHDMDE
                     KKDKDTWNNSNIIQNGKHYKKPHYHVIYIARNPVTIESVRNKIKRKLGNSSVAHVEILD
                     YIKGSYEYLTHESKDAIAKNKHIYDKKDILNINDFDIDRYITLDESQKRELKNLLLDIV
                     DDYNLVNTKDLMAFIRLRGAEFGILNTNDVKDIVSTNSSAFRLWFEGNYQCGYRASYAK
                     VLDAETGEIK"
     promoter        3647..3665
                     /label=T7 promoter
                     /note="promoter for bacteriophage T7 RNA polymerase"
     misc_feature    3674..3751
                     /label=MCS
ORIGIN
        1 ctagagcggc cgccaccgcg gtgggatcct ctagagtccg ctagggacct ctttagctcc
       61 ttggaagctg tcagtagtat acctaataat ttatctacat tccctttagt aacgtgtaac
      121 tttccaaatt tacaaaagcg actcatagaa ttatttcctc ccgttaaata atagataact
      181 attaaaaata gacaatactt gctcataagt aacggtactt aaattgttta ctttggcgtg
      241 tttcattgct tgatgaaact gatttttagt aaacagttga cgatattctc gattgaccca
      301 ttttgaaaca aagtacgtat atagcttcca atatttatct ggaacatctg tggtatggcg
      361 ggtaagtttt attaagacac tgtttacttt tggtttagga tgaaagcatt ccgctggcag
      421 cttaagcaat tgctgaatcg agacttgagt gtgcaagagc aaccctagtg ttcggtgaat
      481 atccaaggta cgcttgtaga atccttcttc aacaatcaga tagatgtcag acgcatggct
      541 ttcaaaaacc acttttttaa taatttgtgt gcttaaatgg taaggaatac tcccaacaat
      601 tttatacctc tgtttgttag ggaattgaaa ctgtagaata tcttggtgaa ttaaagtgac
      661 acgagtattc agttttaatt tttctgacga taagttgaat agatgactgt ctaattcaat
      721 agacgttacc tgtttactta ttttagccag tttcgtcgtt aaatgccctt tacctgttcc
      781 aatttcgtaa acggtatcgg tttcttttaa attcaattgt tttattattt ggttgagtac
      841 tttttcactc gttaaaaagt tttgagaata ttttatattt ttgttcatgt aatcactcct
      901 tcttaattac aaatttttag catctaattt aacttcaatt cctattatac aaaattttaa
      961 gatactgcac tatcaacaca ctcttaagtt tgcttctaag tcttatttcc ataacttctt
     1021 ttacgtttcc gccattcttt gctgtttcga tttttatgat atggtgcaag tcagcacgaa
     1081 cacgaaccgt cttatctccc attatatctt tttttgcact gattggtgta tcatttcgtt
     1141 tttcttttgc gcgactctag aggatcctga taaatatgaa catgatgagt gatcgttaaa
     1201 tttatactgc aatcggatgc gattattgaa taaaagatat gagagattta tctaatttct
     1261 tttttcttgt aaaaaaagaa agttcttaaa ggttttatag ttttggtcgt agagcacacg
     1321 gtttaacgac ttaattacga agtaaataag tctagtgtgt tagactttat gaaatctata
     1381 tacgtttata tatatttatt atccgatttt ttattaaaac gtctcaaaat cgtttctgag
     1441 acgttttagc gtttatttcg tttagttatc ggcataatcg ttaaaacagg cgttatcgta
     1501 gcgtaaaagc ccttgagcgt agcgtggctt tgcagcgaag atgttgtctg ttagattatg
     1561 aaagccgatg actgaatgaa ataataagcg cagcgccctt ctatttcggt tggaggaggc
     1621 tcaagggagt atgagggaat gaaattccct catgggtttg attttaaaaa ttgcttgcaa
     1681 ttttgccgag cggtagcgct ggaaaatttt tgaaaaaaat ttggaatttg gaaaaaaatg
     1741 gggggaaagg aagcgaattt tgcttccgta ctacgacccc ccattaagtg ccgagtgcca
     1801 atttttgtgc caaaaacgct ctatcccaac tggctcaagg gtttaagggg tttttcaatc
     1861 gccaacgaat cgccaacgtt ttcgccaacg ttttttataa atctatattt aagtagcttt
     1921 attgttgttt ttatgattac aaagtgatac actaacttta taaaattatt tgattggagt
     1981 tttttaaatg gtgatttcag aatcgaaaaa aagagttatg atttctctga caaaagagca
     2041 agataaaaaa ttaacagata tggcgaaaca aaaaggtttt tcaaaatctg cggttgcggc
     2101 gttagctata gaagaatatg caagaaagga atcagaacaa aaaaaataag cgaaagctcg
     2161 cgtttttaga aggatacgag ttttcgctac ttgtttttga taaggtaatt atatcatggc
     2221 tattaaaaat actaaagcta gaaattttgg atttttatta tatcctgact caattcctaa
     2281 tgattggaaa gaaaaattag agagtttggg cgtatctatg gctgtcagtc ctttacacga
     2341 tatggacgaa aaaaaagata aagatacatg gaataatagt aatattatac aaaatggaaa
     2401 gcactataaa aaaccacact atcacgttat atatattgca cgaaatcctg taacaataga
     2461 aagcgttagg aacaagatta agcgaaaatt ggggaatagt tcagttgctc atgttgagat
     2521 acttgattat atcaaaggtt catatgaata tttgactcat gaatcaaagg acgctattgc
     2581 taagaataaa catatatacg acaaaaaaga tattttgaac attaatgatt ttgatattga
     2641 ccgctatata acacttgatg aaagccaaaa aagagaattg aagaatttac ttttagatat
     2701 agtggatgac tataatttgg taaatacaaa agatttaatg gcttttattc gccttagggg
     2761 agcggagttt ggaattttaa atacgaatga tgtaaaagat attgtttcaa caaactctag
     2821 cgcctttaga ttatggtttg agggcaatta tcagtgtgga tatagagcaa gttatgcaaa
     2881 ggttcttgat gctgaaacgg gggaaataaa atgacaaaca aagaaaaaga gttatttgct
     2941 gaaaatgagg aattaaaaaa agaaattaag gacttaaaag agcgtattga aagatacaga
     3001 gaaatggaag ttgaattaag tacaacaata gatttattga gaggagggat tattgaataa
     3061 ataaaagccc cctgacgaaa gtcgaagggg gtttttattt tggtttgatg ttgcgattaa
     3121 tagcaataca attgcaataa acaaaatgat cttccttcag gttatgacca tctgtgccag
     3181 ttcgtaatgt ctggtcaact ttccgactct gagaaacttc tggaatcgct agagaatttc
     3241 tggaatggga ttcaggagtg gacagaacga cacggatata tagtggatgt gtcaaaacgc
     3301 ataccatttt gaacgatgac ctctaataat tgttaatcat gttggttacg tatttattaa
     3361 cttctcctag tattagtaat tatcatggct gtcatggcgc attaacggaa taaagggtgt
     3421 gcttaaatcg ggccattttg cgtaataaga aaaaggatta attatgagcg aattgaatta
     3481 ataataaggt aatagattta cattagaaaa tgaaagggga ttttatgcgt gagaatgtta
     3541 cagtctatcc ctggcgaaag ggggatgtgc tgcaaggcga ttaagttggg taacgccagg
     3601 gttttcccag tcacgacgtt gtaaaacgac ggccagtgag cgcgcgtaat acgactcact
     3661 atagggcgaa ttgggtaccg ggccccccct cgaggtcgac ggtatcgata agcttgatat
     3721 cgaattcctg cagcccgggg gatccactag tt
//

质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
         收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
         1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
              ①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
              ②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
              ③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
              ④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
              ⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
              ⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
        2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
              四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
        3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
              穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
        4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
              直接挑取单菌落至液体培养基中。
        5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
              单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
        6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
              收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。

二、转化图片

P0091/pGEM-3Zf(+)体外转录质粒 P0094/pSP73体外转录质粒 P0791/pSPT18体外转录质粒 P0092/pBluescript II-SK(+)噬菌体展示质粒 P0093/pBluescript II-KS(+)噬菌体展示质粒 P0187/SuperCos I噬菌体展示质粒 P0830/pComb3XLambda噬菌体展示质粒 P0831/pComb3XTT噬菌体展示质粒 P0862/pComb3XSS噬菌体展示质粒 P1099/pCANTAB-5E噬菌体展示质粒(非空载) P0908/pBeloBAC11细菌人工染色体质粒(单拷贝）