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- Xybio
- 上海
- P1857
- 2025年07月13日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20
- 保质期：
2年
- 英文名：
pOst1-NubI
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
名称：pOst1-NubI膜蛋白双杂交质粒
别称: pOst1-NubI
| 原核抗性: | Amp |
|---|---|
| 筛选标记: | TRP1 |
| 克隆菌株: | DH5a |
| 培养条件: | 37度 |
质粒属性
| 载体宿主： | 酵母菌 |
|---|---|
| 载体用途： | 杂交 |
| 基因种属： | |
| 基因类型： | |
| 原核抗性： | Amp |
| 筛选标记： | TRP1 |
| 荧光蛋白： |
质粒简介
pOst1-NubI质粒由上海烜雅生物科技有限公司提供
质粒图谱
质粒序列：详询
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P2905/pENTR223-KRR1-T617C人源基因质粒 |
| P2906/pENTR223-SEPT6-T1217C人源基因质粒 |
| P2907/pENTR223-COPS2人源基因质粒 |
| P2908/pENTR223-DNAJA4-A7（1同义突变）人源基因质粒 |
| P2909/pENTR223-FAM53C人源基因质粒 |
| P2910/pENTR223-ANKMY1（240-1551bp）人源基因质粒 |
| P2911/pENTR223-CHID1人源基因质粒 |
| P2912/pENTR223-CERS4（1同义突变2点突变）人源基因质粒 |
| P2913/pENTR223-PER3人源基因质粒 |
| P2914/pENTR223-TMEFF1（1同义突变）人源基因质粒 |
| P2915/pENTR223-DNASE1L3人源基因质粒 |
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文献和实验分裂泛素化膜酵母双杂交（MYTH）系统：鉴别蛋白质相互作用的有力工具
完整膜蛋白在基本生物学和临床上的重要性，使得高通量鉴别全长跨膜蛋白质相互作用的酵母双杂交系统得以快速发展，因此我们实验室发提出了分裂泛素化膜酵母双杂交（MYTH）系统。0:00 分裂泛素化膜酵母双杂交（MYTH）系统：鉴别蛋白质相互作用的有力工具 0:21 内容订阅 1:22 内容简介 1:41 选择诱饵和适合的MYTH系统 3:04 用缺口修复生成tMYTH诱饵 3:07 a.制备载体、扩增目的基因 5:30 b.转化酵母、提取诱饵质粒DNA 7:03 确认诱饵 8:10
于质粒的纯化。 recA1 减少克隆DNA的非特异性重组。 DE3 编码T7 RNA聚合酶，用于诱导T7-启动的表达系统的表达。 DeoR 可以高效吸收大片段DNA，有利于文库的构建。 Tn10 含 有四环素抗性的转座子。 OmpT 表明大肠杆菌缺乏外膜蛋白酶。缺乏外膜蛋白酶的菌株可以降低表达的外源蛋白在细菌中被降解的程度，有利于获得完整的重组蛋白。 PLys 含编码T7溶菌酶的质粒；通过抑制T7 RNA聚合酶基础表达水平来降低T7启动的表达体系的基础表达水平。 ArgF 由于突变
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