pPR3-C膜蛋白双杂交质粒

基本信息
名称：pPR3-C膜蛋白双杂交质粒
别称: pPR3-C

启动子:	ADH1 promoter
复制子:	pUC ori，F1 ori，2μ ori
终止子:	CYC1 terminator
质粒分类:	酵母细胞质粒；酵母杂交质粒；双杂交类质粒
质粒大小:	6620bp
质粒标签:	C-HA，C-NubG
原核抗性:	Amp
筛选标记:	TRP1
克隆菌株:	DH5a
培养条件:	37度
表达宿主:	酵母菌
培养条件:	30℃，YPD，有氧
备注:	高拷贝质粒

质粒属性

载体宿主：	酵母菌
载体用途：	杂交
基因种属：
基因类型：
原核抗性：	Amp
筛选标记：	TRP1
荧光蛋白：

质粒简介
 pPR3-C是一个用于膜蛋白酵母双杂交实验的质粒。

质粒图谱


质粒序列：详询


质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
         收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
         1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
              ①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
              ②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
              ③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
              ④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
              ⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
              ⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
        2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
              四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
        3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
              穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
        4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
              直接挑取单菌落至液体培养基中。
        5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
              单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
        6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
              收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。

二、转化图片

P2820/pENTR223-IQUB（1-1119bp）人源基因质粒

P2821/pENTR223-PTPN2-C15G人源基因质粒

P2822/pENTR223-NFKBIE（418-1503bp）人源基因质粒

P2823/pENTR223-DNAJB11人源基因质粒

P2824/pENTR223-B4GALT3（2同义突变）人源基因质粒

P2825/pENTR223-KCNJ13（3点突变）人源基因质粒

P2848/pENTR223-NGEF人源基因质粒

P1600/pENTR-GFP-MDC1 (770-7)人源基因质粒

P1337/R777-E011 Hs.ARHGAP35人源基因质粒

P2850/pENTR223-C9orf78(2点突变）人源基因质粒

P2851/pENTR223-AAR2人源基因质粒