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- LMAI Bio
- 上海
- LM140439-20
- 2025年09月26日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
低温运输，-20℃保存
- 保质期：
一年
- 英文名：
Mammalian Two-Hybrid Kit
- 库存：
大量
- 供应商：
联迈生物
- 规格：
20 μg
哺乳动物双杂交试剂盒产品及特点：
双杂交系统是在体内检测蛋白-蛋白相互作用的极强有力方法。双杂交系统的基础是在一些转录因子上发现的模域(modular domains): 一个DNA结合域，它可以结合一段特异的DNA序列，和一个转录激活域，这个转录激活域与基础转录机制相作用。一个转录激活域联合一个DNA结合域可能在TATA盒启动RNA聚合酶II复合体的装配，同时增强转录。在本哺乳动物双杂交系统中，DNA结合域和转录激活域分别由不同质粒产生，融合于DNA结合域的一个蛋白质(“X”)与融合于转录激活域的第二个蛋白质(“Y”)相互作用时，DNA结合域就与转录激活域紧密关联。在这个系统中，蛋白X与Y的相互作用导致报告基因的转录。蛋白相互作用正对照反应的概略图如下：
同转染哺乳动物细胞。载体pG5luc的萤火虫萤光素酶基因上游含有在基本TATA盒上游的5个GAL4结合位点。细胞温育2-3天，裂解，然后用双荧光素酶活性检测试剂盒检测萤火虫和海肾萤光素酶。在正对照实验中，在GAL-4Id和 VP16-MyoD上融合的蛋白Id和MyoD之间的相作用导致载体pG5 luc上的萤光素酶的高水平表达。
本产品具有下列特点：
1. 用户可在所选哺乳动物细胞系中研究蛋白质的相互作用，使蛋白质更可能处于其本来构型，从而使目的蛋白更好地保持了诸如糖基化、磷酸化和酰基化等翻译后的修饰。
2. 易于定量：可使用双荧光素酶活性检测试剂盒（产品编号：130595）快捷检测萤火虫和海肾萤光素酶。
3. 快速瞬时检测：转染后两天即可得到结果，而酵母系统则需3-4天。
4. 稳定转染：pACT载体含有新霉素磷酸转移酶基因，可用于稳定转染的选择。
哺乳动物双杂交试剂盒使用及效果
详细使用步骤请参见产品使用手册。
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文献和实验更易实施，有报道将双杂交筛出的基因片段插入一个带有抗原决定簇标记的质粒载体，该载体可在哺乳动物细胞中高水平表达被抗原决定簇所标记的蛋白质。用BD-X质粒和带有AD-Y插入的抗原决定簇质粒载体共转染哺乳动物细胞，即可直接进行免疫共沉淀检测。应用这一方法已证实了Bcl-XL和Bad/Bax之间的相互作用。7、哺乳动物细胞双杂交系统也发展起来。它是利用体内重建转录因子的原理，在基因水平上分析蛋白质-蛋白质相互作用，已成为酵母双杂交系统的辅助手段。该系统与酵母双杂交系统的区别在于报告基因与融合基因位于不同
的相互作用的技术平台，在近几年来得到了广泛运用。酵母双杂交系统是在真核模式生物酵母中进行的，研究活细胞内蛋白质相互作用，对蛋白质之间微弱的、瞬间的作用也能够通过报告基因的表达产物敏感地检测得到，它是一种具有很高灵敏度的研究蛋白质之间关系的技术。 大量的研究文献表明，酵母双杂交技术既可以用来研究哺乳动物基因组编码的蛋白质之间的互作，也可以用来研究高等植物基因组编码的蛋白质之间的互作。因此，它在许多的研究领域中有着广泛的应用。本文就酵母双杂交的技术平台和应用加以介绍。 酵母双杂交
酵母双杂交系统是在真核模式生物酵母中进行的，研究活细胞内蛋白质相互作用，对蛋白质之间微弱的、瞬间的作用也能够通过报告基因的表达产物敏感地检测得到，它是一种具有很高灵敏度的研究蛋白质之间关系的技术。大量的研究文献表明，酵母双杂交技术既可以用来研究哺乳动物基因组编码的蛋白质之间的互作，也可以用来研究高等植物基因组编码的蛋白质之间的互作。因此，它在许多的研究领域中有着广泛的应用。 一、利用酵母双杂交发现新的蛋白质和蛋白质的新功能 酵母双杂交技术已经成为发现新基因的主要途径
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