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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件:
-20
- 保质期:
2年
- 英文名:
Plasmid:#27098
- 库存:
100
- 供应商:
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格:
干粉/液体
名称:pBiFC-bJunVN155(I152L)双分荧光质粒
别称: Plasmid:#27098
| 启动子: | CMV |
|---|---|
| 复制子: | pUC |
| 质粒分类: | 哺乳细胞载体;信号通路报告质粒 |
| 原核抗性: | Amp |
| 克隆菌株: | DH5a |
| 培养条件: | 37度 |
质粒属性
| 载体宿主: | 哺乳细胞 |
|---|---|
| 载体用途: | 双分子荧光 |
| 基因种属: | 空载体 |
| 基因类型: | BIFC |
| 原核抗性: | Amp |
| 真核抗性: | |
| 荧光蛋白: |
质粒简介
pBiFC-bJunVN155(I152L)质粒由上海烜雅生物科技有限公司提供
质粒图谱
质粒序列:详询
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后,请先根据产品管壁标签来判断产品形式,并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉(常温运输,存于-20度,90天保质期,请务必转化挑单克隆培养,不要直接使用和测序)
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min,再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒;
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min,加入2μl质粒,再冰浴30min后,42℃热激60s,不要搅动,再冰浴2min;(从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作)
③加入900μl无抗的LB液体培养基,180rpm震荡37℃培养45min;
④6000rpm离心5min,仅留100μl上清液重悬细菌沉淀,并涂布至目标质粒抗性的LB平板上;(可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布,可以比传统涂布方法获得更多转化子)
⑤将平板正向培养1h,再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h;
(菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态,要先转克隆感受态,重提质粒后再导入表达感受态)
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中,加入对应抗生素,220rpm震荡培养14h,根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种(冰袋运输,存于-80℃,保质期90天,请务必划线挑单克隆培养)
四区划线后挑单菌落培养,酵母菌需要先液体复苏再四区划线,再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种(冰袋运输,存于4℃,保质期7天)
穿刺接种,液体培养后四区划线,再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板(冰袋运输,存于4℃,保质期7天)
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒(冰袋运输,存于-20℃,保质期90天)
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒(常温运输,存于-20度,90天保质期,请务必转化挑单克隆培养,不要直接使用和测序)
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中,加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min,吸取5ul质粒转化,离心全涂。
二、转化图片
| P4064/pCMV-SPORT6-CALM1人源基因质粒 |
| P4065/pCMV-SPORT6-DAD1人源基因质粒 |
| P4066/pCMV-SPORT6-CST3人源基因质粒 |
| P4067/pCMV-SPORT6-RPL13(2同义突变)人源基因质粒 |
| P4068/pCMV-SPORT6-RNF208人源基因质粒 |
| P4069/pCMV-SPORT6-UBE2F人源基因质粒 |
| P4070/pCMV-SPORT6-IMP3(1同义突变)人源基因质粒 |
| P4071/pCMV-SPORT6-SNX12(1-477bp)人源基因质粒 |
| P4072/pCMV-SPORT6-CENPH(1同义突变)人源基因质粒 |
| P4073/pCMV-SPORT6-CHURC1(10-420bp)人源基因质粒 |
| P4074/pCMV-SPORT6-TRIR人源基因质粒 |
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文献和实验数矛盾):指核小体DNA中-2 超螺旋的存在和当组蛋白质移 开时测量的-1 超螺旋间不一致。 Lipids (脂质):具有极性头,包括磷酸盐(磷脂)、固醇(如胆固醇)或糖类(糖脂)与由脂肪酸 组成的疏水性尾结合。 Lipid bilayer (脂质双分子层):脂质聚集形成的形式,疏水性的脂肪酸在外边而极性头朝向 中间。 Liquid (solution) hybridization (液相杂交):在溶液中进行互补核酸链的反应。 Locus (基因座):染色体上某个具有特殊
子层,而形成主要是跟球状蛋白质疏水基在一起的单位,这种单位平面地聚合在一起,就是生物膜。1972年S.J.Singer和G.L.Nicolson又提出流动镶嵌模型,进一步修改了Danielli、Davson、Robertson的模型。这种模型现在基本上被广泛接受,现在认为,在流动镶嵌模型中,有的蛋白质结合在脂质双分子层的外侧和内侧,有的蛋白质嵌入脂质双分子层的疏水部位,或者有时穿过疏水部位。一般认为,脂质分子至少在生理的条件下,大部分进行活泼的分子运动,蛋白质分子能非常自由地在这种脂质层内活动。虽然已知
实验的原理: (一)细胞凝集反应 细胞膜是由脂类双分子层镶嵌蛋白质构成的单位膜,而脂类和蛋白质又与糖分子结合为细胞表面的分枝状糖外被。凝集素是一类可逆结合特异糖基的蛋白质,具有使细胞凝集、血型鉴定、促进淋巴细胞分裂、防害抗虫等作用。凝集素使细胞凝集是由于它与细胞外被的寡糖链相连接,起到“桥”的作用。 (二)细胞膜的渗透性 细胞膜是细胞与环境之间进行物质与能量交换的一种选择性通透屏障,可选择性地控制不同物质进出细胞,各种物质跨膜运输的方式是不同的,物质的通透性是由物质










