pGADT7-Rec酵母双杂交质粒

基本信息
名称：pGADT7-Rec酵母双杂交质粒
别称: pGADT7-Rec

启动子:	ADH1
复制子:	2U
质粒分类:	酵母系列，酵母单杂交载体
质粒大小:	8058bp
原核抗性:	Amp
筛选标记:	LEU2
克隆菌株:	DH5a
培养条件:	37度
表达宿主:	酵母细胞

质粒属性

载体宿主：	酵母菌
载体用途：	杂交
基因种属：
基因类型：
原核抗性：	Amp
筛选标记：	LEU2
荧光蛋白：

质粒简介
          pGADT7-Rec酵母单杂交质粒

质粒图谱


质粒序列
LOCUS       Exported                8058 bp ds-DNA     circular SYN 10-SEP-2016
DEFINITION  synthetic circular DNA
ACCESSION   .
VERSION     .
KEYWORDS    Untitled 22
SOURCE      synthetic DNA construct
  ORGANISM  synthetic DNA construct
REFERENCE   1  (bases 1 to 8058)
  AUTHORS   .
  TITLE     Direct Submission
            http://www.miaolingbio.com
FEATURES             Location/Qualifiers
     source          1..8058
                     /organism="synthetic DNA construct"
                     /mol_type="other DNA"
     rep_origin      4..1168
                     /note="2u ori"
                     /note="yeast 2u plasmid origin of replication"
     promoter        1450..1554
                     /gene="bla"
                     /note="AmpR promoter"
     CDS             1555..2415
                     /codon_start=1
                     /gene="bla"
                     /product="beta-lactamase"
                     /note="AmpR"
                     /note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
                     related antibiotics"
                     /translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI
                     ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
                     PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
                     EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
                     LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
                     LIKHW"
     rep_origin      2586..3174
                     /direction=RIGHT
                     /note="ori"
                     /note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of 
                     replication"
     protein_bind    3414..3447
                     /bound_moiety="Cre recombinase"
                     /note="loxP"
                     /note="Cre-mediated recombination occurs in the 8-bp core 
                     sequence (GCATACAT)."
     protein_bind    3525..3558
                     /bound_moiety="Cre recombinase"
                     /note="loxP"
                     /note="Cre-mediated recombination occurs in the 8-bp core 
                     sequence (GCATACAT)."
     protein_bind    3613..3634
                     /bound_moiety="E. coli catabolite activator protein"
                     /note="CAP binding site"
                     /note="CAP binding activates transcription in the presence 
                     of cAMP."
     promoter        3649..3679
                     /note="lac promoter"
                     /note="promoter for the E. coli lac operon"
     protein_bind    3687..3703
                     /bound_moiety="lac repressor encoded by lacI"
                     /note="lac operator"
                     /note="The lac repressor binds to the lac operator to 
                     inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be 
                     relieved by adding lactose or 
                     isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG)."
     primer_bind     3711..3727
                     /note="M13 rev"
                     /note="common sequencing primer, one of multiple similar 
                     variants"
     promoter        3769..4174
                     /gene="S. cerevisiae LEU2"
                     /note="LEU2 promoter"
     CDS             4175..5269
                     /codon_start=1
                     /gene="S. cerevisiae LEU2"
                     /product="3-isopropylmalate dehydrogenase, required for 
                     leucine biosynthesis"
                     /note="LEU2"
                     /note="yeast auxotrophic marker"
                     /translation="MSAPKKIVVLPGDHVGQEITAEAIKVLKAISDVRSNVKFDFENHL
                     IGGAAIEATGVPLPDEALEASKKADAVLLGAVGGPKWGTGSVRPEQGLLKIRKELQLYA
                     NLRPCNFASDSLLDLSPIKPQFAKGTDFVVVRELVGGIYFGKRKEDDGDGVAWDSEQYT
                     VPEVQRITRMAAFMALQHEPPLPIWSLDKANVLASSRLWRKTVEETIKNEFPTLKVQHQ
                     LIDSAAMILVKNPTHLNGIIITSNMFGDIISDEASVIPGSLGLLPSASLASLPDKNTAF
                     GLYEPCHGSAPDLPKNKVNPIATILSAAMMLKLSLNLPEEGKAIEDAVKKVLDAGIRTG
                     DLGGSNSTTEVGDAVAEEVKKILA"
     terminator      5386..5573
                     /gene="S. cerevisiae ADH1"
                     /note="ADH1 terminator"
                     /note="transcription terminator for the S. cerevisiae 
                     alcohol dehydrogenase 1 (ADH1) gene"
     CDS             complement(6092..6118)
                     /codon_start=1
                     /product="HA (human influenza hemagglutinin) epitope tag"
                     /note="HA"
                     /translation="YPYDVPDYA"
     promoter        complement(6137..6155)
                     /note="T7 promoter"
                     /note="promoter for bacteriophage T7 RNA polymerase"
     CDS             complement(6161..6502)
                     /codon_start=1
                     /gene="Saccharomyces cerevisiae GAL4 (truncated)"
                     /product="activation domain of the GAL4 transcriptional 
                     activator"
                     /note="GAL4 activation domain"
                     /translation="ANFNQSGNIADSSLSFTFTNSSNGPNLITTQTNSQALSQPIASSN
                     VHDNFMNNEITASKIDDGNNSKPLSPGWTDQTAYNAFGITTGMFNTTTMDDVYNYLFDD
                     EDTPPNPKKE"
     CDS             complement(6518..6538)
                     /codon_start=1
                     /product="nuclear localization signal of SV40 large T 
                     antigen"
                     /note="SV40 NLS"
                     /translation="PKKKRKV"
     promoter        complement(6584..7288)
                     /gene="S. cerevisiae ADH1"
                     /note="ADH1 promoter"
                     /note="promoter for alcohol dehydrogenase 1"
ORIGIN
        1 agcaacgaag catctgtgct tcattttgta gaacaaaaat gcaacgcgag agcgctaatt
       61 tttcaaacaa agaatctgag ctgcattttt acagaacaga aatgcaacgc gaaagcgcta
      121 ttttaccaac gaagaatctg tgcttcattt ttgtaaaaca aaaatgcaac gcgagagcgc
      181 taatttttca aacaaagaat ctgagctgca tttttacaga acagaaatgc aacgcgagag
      241 cgctatttta ccaacaaaga atctatactt cttttttgtt ctacaaaaat gcatcccgag
      301 agcgctattt ttctaacaaa gcatcttaga ttactttttt tctcctttgt gcgctctata
      361 atgcagtctc ttgataactt tttgcactgt aggtccgtta aggttagaag aaggctactt
      421 tggtgtctat tttctcttcc ataaaaaaag cctgactcca cttcccgcgt ttactgatta
      481 ctagcgaagc tgcgggtgca ttttttcaag ataaaggcat ccccgattat attctatacc
      541 gatgtggatt gcgcatactt tgtgaacaga aagtgatagc gttgatgatt cttcattggt
      601 cagaaaatta tgaacggttt cttctatttt gtctctatat actacgtata ggaaatgttt
      661 acattttcgt attgttttcg attcactcta tgaatagttc ttactacaat ttttttgtct
      721 aaagagtaat actagagata aacataaaaa atgtagaggt cgagtttaga tgcaagttca
      781 aggagcgaaa ggtggatggg taggttatat agggatatag cacagagata tatagcaaag
      841 agatactttt gagcaatgtt tgtggaagcg gtattcgcaa tattttagta gctcgttaca
      901 gtccggtgcg tttttggttt tttgaaagtg cgtcttcaga gcgcttttgg ttttcaaaag
      961 cgctctgaag ttcctatact ttctagctag agaataggaa cttcggaata ggaacttcaa
     1021 agcgtttccg aaaacgagcg cttccgaaaa tgcaacgcga gctgcgcaca tacagctcac
     1081 tgttcacgtc gcacctatat ctgcgtgttg cctgtatata tatatacatg agaagaacgg
     1141 catagtgcgt gtttatgctt aaatgcgtta tggtgcactc tcagtacaat ctgctctgat
     1201 gccgcatagt taagccagcc ccgacacccg ccaacacccg ctgacgcgcc ctgacgggct
     1261 tgtctgctcc cggcatccgc ttacagacaa gctgtgaccg tctccgggag ctgcatgtgt
     1321 cagaggtttt caccgtcatc accgaaacgc gcgagacgaa agggcctcgt gatacgccta
     1381 tttttatagg ttaatgtcat gataataatg gtttcttaga cgtcaggtgg cacttttcgg
     1441 ggaaatgtgc gcggaacccc tatttgttta tttttctaaa tacattcaaa tatgtatccg
     1501 ctcatgagac aataaccctg ataaatgctt caataatatt gaaaaaggaa gagtatgagt
     1561 attcaacatt tccgtgtcgc ccttattccc ttttttgcgg cattttgcct tcctgttttt
     1621 gctcacccag aaacgctggt gaaagtaaaa gatgctgaag atcagttggg tgcacgagtg
     1681 ggttacatcg aactggatct caacagcggt aagatccttg agagttttcg ccccgaagaa
     1741 cgttttccaa tgatgagcac ttttaaagtt ctgctatgtg gcgcggtatt atcccgtatt
     1801 gacgccgggc aagagcaact cggtcgccgc atacactatt ctcagaatga cttggttgag
     1861 tactcaccag tcacagaaaa gcatcttacg gatggcatga cagtaagaga attatgcagt
     1921 gctgccataa ccatgagtga taacactgcg gccaacttac ttctgacaac gatcggagga
     1981 ccgaaggagc taaccgcttt tttgcacaac atgggggatc atgtaactcg ccttgatcgt
     2041 tgggaaccgg agctgaatga agccatacca aacgacgagc gtgacaccac gatgcctgta
     2101 gcaatggcaa caacgttgcg caaactatta actggcgaac tacttactct agcttcccgg
     2161 caacaattaa tagactggat ggaggcggat aaagttgcag gaccacttct gcgctcggcc
     2221 cttccggctg gctggtttat tgctgataaa tctggagccg gtgagcgtgg gtctcgcggt
     2281 atcattgcag cactggggcc agatggtaag ccctcccgta tcgtagttat ctacacgacg
     2341 gggagtcagg caactatgga tgaacgaaat agacagatcg ctgagatagg tgcctcactg
     2401 attaagcatt ggtaactgtc agaccaagtt tactcatata tactttagat tgatttaaaa
     2461 cttcattttt aatttaaaag gatctaggtg aagatccttt ttgataatct catgaccaaa
     2521 atcccttaac gtgagttttc gttccactga gcgtcagacc ccgtagaaaa gatcaaagga
     2581 tcttcttgag atcctttttt tctgcgcgta atctgctgct tgcaaacaaa aaaaccaccg
     2641 ctaccagcgg tggtttgttt gccggatcaa gagctaccaa ctctttttcc gaaggtaact
     2701 ggcttcagca gagcgcagat accaaatact gttcttctag tgtagccgta gttaggccac
     2761 cacttcaaga actctgtagc accgcctaca tacctcgctc tgctaatcct gttaccagtg
     2821 gctgctgcca gtggcgataa gtcgtgtctt accgggttgg actcaagacg atagttaccg
     2881 gataaggcgc agcggtcggg ctgaacgggg ggttcgtgca cacagcccag cttggagcga
     2941 acgacctaca ccgaactgag atacctacag cgtgagctat gagaaagcgc cacgcttccc
     3001 gaagggagaa aggcggacag gtatccggta agcggcaggg tcggaacagg agagcgcacg
     3061 agggagcttc cagggggaaa cgcctggtat ctttatagtc ctgtcgggtt tcgccacctc
     3121 tgacttgagc gtcgattttt gtgatgctcg tcaggggggc ggagcctatg gaaaaacgcc
     3181 agcaacgcgg cctttttacg gttcctggcc ttttgctggc cttttgctca catgttcttt
     3241 cctgcgttat cccctgattc tgtggataac cgtattaccg cctttgagtg agctgatacc
     3301 gctcgccgca gccgaacgac cgagcgcagc gagtcagtga gcgaggaagc ggaagagcgc
     3361 ccaatacgca aaccgcctct ccccgcgcgt tggccgattc attaatgcag ctgataactt
     3421 cgtatagcat acattatacg aagttatatt aagggttccg gatcgcggcc gctcgacctg
     3481 cagccaagct agcttggctg gacgtaaact cctcttcaga cctaataact tcgtatagca
     3541 tacattatac gaagttatca gctggcacga caggtttccc gactggaaag cgggcagtga
     3601 gcgcaacgca attaatgtga gttagctcac tcattaggca ccccaggctt tacactttat
     3661 gcttccggct cgtatgttgt gtggaattgt gagcggataa caatttcaca caggaaacag
     3721 ctatgacatg attacgaatt gatcctctag ctagagtcga gatcccccaa ctgtgggaat
     3781 actcaggtat cgtaagatgc aagagttcga atctcttagc aaccattatt tttttcctca
     3841 acataacgag aacacacagg ggcgctatcg cacagaatca aattcgatga ctggaaattt
     3901 tttgttaatt tcagaggtcg cctgacgcat ataccttttt caactgaaaa attgggagaa
     3961 aaaggaaagg tgagagcgcc ggaaccggct tttcatatag aatagagaag cgttcatgac
     4021 taaatgcttg catcacaata cttgaagttg acaatattat ttaaggacct attgtttttt
     4081 ccaataggtg gttagcaatc gtcttacttt ctaacttttc ttacctttta catttcagca
     4141 atatatatat atatttcaag gatataccat tctaatgtct gcccctaaga agatcgtcgt
     4201 tttgccaggt gaccacgttg gtcaagaaat cacagccgaa gccattaagg ttcttaaagc
     4261 tatttctgat gttcgttcca atgtcaagtt cgatttcgaa aatcatttaa ttggtggtgc
     4321 tgctatcgaa gctacaggtg tcccacttcc agatgaggcg ctggaagcct ccaagaaggc
     4381 tgatgccgtt ttgttaggtg ctgtgggtgg tcctaaatgg ggtacaggta gtgttagacc
     4441 tgaacaaggt ttactaaaaa tccgtaaaga acttcaattg tacgccaact taagaccatg
     4501 taactttgca tccgactctc ttttagactt atctccaatc aagccacaat ttgctaaagg
     4561 tactgacttc gttgttgtca gagaattagt gggaggtatt tactttggta agagaaagga
     4621 agacgatggt gatggtgtcg cttgggatag tgaacaatac accgttccag aagtgcaaag
     4681 aatcacaaga atggccgctt tcatggccct acaacatgag ccaccattgc ctatttggtc
     4741 cttggataaa gctaatgttt tggcctcttc aagattatgg agaaaaactg tggaggaaac
     4801 catcaagaac gaatttccta cattgaaggt tcaacatcaa ttgattgatt ctgccgccat
     4861 gatcctagtt aagaacccaa cccacctaaa tggtattata atcaccagca acatgtttgg
     4921 tgatatcatc tccgatgaag cctccgttat cccaggttcc ttgggtttgt tgccatctgc
     4981 gtccttggcc tctttgccag acaagaacac cgcatttggt ttgtacgaac catgccacgg
     5041 ttctgctcca gatttgccaa agaataaggt caaccctatc gccactatct tgtctgctgc
     5101 aatgatgttg aaattgtcat tgaacttgcc tgaagaaggt aaggccattg aagatgcagt
     5161 taaaaaggtt ttggatgcag gtatcagaac tggtgattta ggtggttcca acagtaccac
     5221 cgaagtcggt gatgctgtcg ccgaagaagt taagaaaatc cttgcttaaa aagattctct
     5281 ttttttatga tatttgtaca taaactttat aaatgaaatt cataatagaa acgacacgaa
     5341 attacaaaat ggaatatgtt catagggtag gggaatttcg accggccggt agaggtgtgg
     5401 tcaataagag cgacctcatg ctatacctga gaaagcaacc tgacctacag gaaagagtta
     5461 ctcaagaata agaattttcg ttttaaaacc taagagtcac tttaaaattt gtatacactt
     5521 atttttttta taacttattt aataataaaa atcataaatc ataagaaatt cgcttattta
     5581 gaagtgtcaa caacgtatct accaacgatt tgaccctttt ccatcttttc gtaaatttct
     5641 ggcaaggtag acaagccgac aaccttgatt ggagacttga ccaaacctct ggcgaagaag
     5701 tccaaagctt ctgaataagc cctcgtaata tattttcatg aagaatttag gtccaaaaaa
     5761 aagatgggca ttaattctag tcatttaaaa aattctatag atcagaggtt acatggccaa
     5821 gattgaaact tagaggagta tagttacata aaagaaggca aaacgatgta taaatgaaag
     5881 aaattgagat ggtgcacgat gcacagttga agtgaacttg cggggttttt cagtatctac
     5941 gattcatctg cagctcgagc tcgatggatc ccgtatcgat gcccaccctc tagaggccga
     6001 ggcggccgac atgttttttc ccgggccata atggccactc tgcgttgata ccactgcttg
     6061 ggtggaattc actggcctcc atggccatat gagcgtaatc tggtacgtcg tatgggtact
     6121 ccatggcggc gctcgcccta tagtgagtcg tattaaagat ctcttttttt gggtttggtg
     6181 gggtatcttc atcatcgaat agatagttat atacatcatc cattgtagtg gtattaaaca
     6241 tccctgtagt gattccaaac gcgttatacg cagtttggtc cgtccaacca ggtgacagtg
     6301 gttttgaatt attaccatca tcaattttac tagccgtgat ttcattattc atgaagttat
     6361 catgaacgtt agaggaggca attggttgtg aaagcgcttg agaatttgtt tgagttgtta
     6421 tgaggttcgg accgttgcta ctgttagtga aagtgaagga caatgagcta tcagcaatat
     6481 tcccactttg attaaaattg gcggcggtac ccaattcgac ctttctcttc ttttttggag
     6541 gctcgggaat taattccgct ttatccatct ttgcaaagct tggagttgat tgtatgcttg
     6601 gtatagcttg aaatattgtg cagaaaaaga aacaaggaag aaagggaacg agaacaatga
     6661 cgaggaaaca aaagattaat aattgcaggt ctatttatac ttgatagcaa gacagcaaac
     6721 ttttttttat ttcaaattca agtaactgga aggaaggccg tataccgttg ctcattagag
     6781 agtagtgtgc gtgaatgaag gaaggaaaaa gtttcgtgtg cttcgagata cccctcatca
     6841 gctctggaac aacgacatct gttggtgctg tctttgtcgt taattttttc ctttagtgtc
     6901 ttccatcatt tttttgtcat tgcggatatg gtgagacaac aacgggggag agagaaaaga
     6961 aaaaaaaaga aaagaagttg catgcgccta ttattacttc aatagatggc aaatggaaaa
     7021 agggtagtga aacttcgata tgatgatggc tatcaagtct agggctacag tattagttcg
     7081 ttatgtacca ccatcaatga ggcagtgtaa ttggtgtagt cttgtttagc ccattatgtc
     7141 ttgtctggta tctgttctat tgtatatctc ccctccgcca cctacatgtt agggagacca
     7201 acgaaggtat tataggaatc ccgatgtatg ggtttggttg ccagaaaaga ggaagtccat
     7261 attgtacacc cggaaacaac aaaaggatat ccgaaatatt ccacggttta gaaaaaaatc
     7321 ggaaaagagc gcggaggggt gttacccccc ttctctacta gcattggact ttaattaata
     7381 tatgtgcata ggagaagtgt aaagttccct tccatattgt aacataataa agtgcacacc
     7441 caaatgaatt gaaagcgtac tcaaacagac aaccatttcc agtgttgtat gtacctgtct
     7501 atttatactg gtagcaaccc tattgctgtt tcctcttcaa agtactctag cggttatgcg
     7561 cgtctcacct tcaaggtcat ggtcgctcta ttgttcgcac caccggcaaa ctcgcgtctc
     7621 gcaagtcttg gctcattctt ctagtatact catgttgcaa atgcactcag gttctttcgg
     7681 caacttaaat aatgacacca gttgtcgtgg tcgtcatcat cgcaacccca accggcattc
     7741 ttattgcttc tccaatctcg ccccttagcg cagggtaaac cttggaaaat gcaggcgcaa
     7801 aaaactccgc cgggcacagc ctcacgccca gcgttatcgc cgggccggca agagcgcggg
     7861 tccgccacag agtcagcatg attgtgcaat tgcgtaaact cgttttttcg gcgccgcaaa
     7921 gccaaataca tcatatcaac acttttcact ttatttttcg ttcgaccctt atatttgtct
     7981 tttgccttca tgctccttga tttcctattt catttaccat catttcttcg atcccggatc
     8041 tcgacctgca ggcatgca
//
 

质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
         收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
         1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
              ①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
              ②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
              ③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
              ④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
              ⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
              ⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
        2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
              四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
        3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
              穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
        4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
              直接挑取单菌落至液体培养基中。
        5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
              单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
        6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
              收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。

二、转化图片

P2630/pENTR223-PSMD2-A2170T人源基因质粒

P2631/pENTR223-PCDHB15-A1420C-G1481A人源基因质粒

P2632/pENTR223-ELP2人源基因质粒

P2633/pENTR223-TTC12-A13T人源基因质粒

P2634/pENTR223-LENG8-A10G人源基因质粒

P2639/pENTR223-CAPN1人源基因质粒

P2640/pENTR223-FOXM1人源基因质粒

P2641/pENTR223-RBPMS人源基因质粒

P2642/pENTR223-NDUFB11-T16C人源基因质粒

P2643/pENTR223-HBE1人源基因质粒

P2644/pENTR223-TMEM18人源基因质粒

P2645/pENTR223-FAM86C1人源基因质粒