pGADT7-Rec-53酵母双杂交质粒

基本信息
名称：pGADT7-Rec-53酵母双杂交质粒
别称: pGADT7-Rec-53

启动子:	ADH1
复制子:	2U
质粒分类:	酵母细胞质粒；酵母杂交质粒
原核抗性:	Amp
筛选标记:	LEU2
克隆菌株:	DH5a
培养条件:	37度

质粒属性

载体宿主：	酵母菌
载体用途：	杂交
基因种属：	人
基因类型：	ORF
原核抗性：	Amp
筛选标记：	LEU2
荧光蛋白：

质粒简介
     pGADT7-Rec-53质粒

质粒图谱


质粒序列
ORIGIN
        1 gaggataaca tacgacgtac cagattacgc tcatatggcc atggaggcca gtgaattcat
       61 ggaggagccg cagtcagatc ctagcgtcga gccccctctg agtcaggaaa cattttcaga
      121 cctatggaaa ctacttcctg aaaacaacgt tctgtccccc ttgccgtccc aagcaatgga
      181 tgatttgatg ctgtccccgg acgatattga acaatggttc actgaagacc caggtccaga
      241 tgaagctccc agaatgccag aggctgctcc ccccgtggcc cctgcaccag cagctcctac
      301 accggcggcc cctgcaccag ccccctcctg gcccctgtca tcttctgtcc cttcccagaa
      361 aacctaccag ggcagctacg gtttccgtct gggcttcttg cattctggga cagccaagtc
      421 tgtgacttgc acgtactccc ctgccctcaa caagatgttt tgccaactgg ccaagacctg
      481 ccctgtgcag ctgtgggttg attccacacc cccgcccggc acccgcgtcc gcgccatggc
      541 catctacaag cagtcacagc acatgacgga ggttgtgagg cgctgccccc accatgagcg
      601 ctgctcagat agcgatggtc tggcccctcc tcagcatctt atccgagtgg aaggaaattt
      661 gcgtgtggag tatttggatg acagaaacac ttttcgacat agtgtggtgg tgccctatga
      721 gccgcctgag gttggctctg actgtaccac catccactac aactacatgt gtaacagttc
      781 ctgcatgggc ggcatgaacc ggaggcccat cctcaccatc atcacactgg aagactccag
      841 tggtaatcta ctgggacgga acagctttga ggtgcgtgtt tgtgcctgtc ctgggagaga
      901 ccggcgcaca gaggaagaaa atctccgcaa gaaaggggag cctcaccacg agctgccccc
      961 agggacacta agcgagcact gcccaacaca ccagctcctc ccccagcaaa aaaaaccccg
     1021 g
//

质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
         收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
         1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
              ①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
              ②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
              ③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
              ④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
              ⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
              ⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
        2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
              四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
        3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
              穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
        4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
              直接挑取单菌落至液体培养基中。
        5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
              单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
        6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
              收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。

二、转化图片

P2646/pENTR223-MRPS35（289-972bp）人源基因质粒

P2647/pENTR223-MOB1A-G635A人源基因质粒

P2648/pENTR223-SINHCAF-T10C人源基因质粒

P2649/pENTR223-GAD1人源基因质粒

P2650/pENTR223-TMEM147人源基因质粒

P2651/pENTR223-SNRPB2-A12T人源基因质粒

P2652/pENTR223-ZCRB1-C392A人源基因质粒

P2653/pENTR223-RAB6A人源基因质粒

P2654/pENTR223-CLDN4人源基因质粒

P2655/pENTR223-CINP人源基因质粒

P2656/pENTR223-SLC35A3人源基因质粒