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- 上海
- P1135
- 2025年07月13日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20
- 保质期：
2年
- 英文名：
pGADT7-Rec-53
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
基本信息
名称：pGADT7-Rec-53酵母双杂交质粒
别称: pGADT7-Rec-53
质粒属性
质粒简介
pGADT7-Rec-53质粒
质粒图谱
质粒序列
ORIGIN
1 gaggataaca tacgacgtac cagattacgc tcatatggcc atggaggcca gtgaattcat
61 ggaggagccg cagtcagatc ctagcgtcga gccccctctg agtcaggaaa cattttcaga
121 cctatggaaa ctacttcctg aaaacaacgt tctgtccccc ttgccgtccc aagcaatgga
181 tgatttgatg ctgtccccgg acgatattga acaatggttc actgaagacc caggtccaga
241 tgaagctccc agaatgccag aggctgctcc ccccgtggcc cctgcaccag cagctcctac
301 accggcggcc cctgcaccag ccccctcctg gcccctgtca tcttctgtcc cttcccagaa
361 aacctaccag ggcagctacg gtttccgtct gggcttcttg cattctggga cagccaagtc
421 tgtgacttgc acgtactccc ctgccctcaa caagatgttt tgccaactgg ccaagacctg
481 ccctgtgcag ctgtgggttg attccacacc cccgcccggc acccgcgtcc gcgccatggc
541 catctacaag cagtcacagc acatgacgga ggttgtgagg cgctgccccc accatgagcg
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901 ccggcgcaca gaggaagaaa atctccgcaa gaaaggggag cctcaccacg agctgccccc
961 agggacacta agcgagcact gcccaacaca ccagctcctc ccccagcaaa aaaaaccccg
1021 g
//
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
名称：pGADT7-Rec-53酵母双杂交质粒
别称: pGADT7-Rec-53
| 启动子: | ADH1 |
|---|---|
| 复制子: | 2U |
| 质粒分类: | 酵母细胞质粒；酵母杂交质粒 |
| 原核抗性: | Amp |
| 筛选标记: | LEU2 |
| 克隆菌株: | DH5a |
| 培养条件: | 37度 |
质粒属性
| 载体宿主： | 酵母菌 |
|---|---|
| 载体用途： | 杂交 |
| 基因种属： | 人 |
| 基因类型： | ORF |
| 原核抗性： | Amp |
| 筛选标记： | LEU2 |
| 荧光蛋白： |
质粒简介
pGADT7-Rec-53质粒
质粒图谱
质粒序列
ORIGIN
1 gaggataaca tacgacgtac cagattacgc tcatatggcc atggaggcca gtgaattcat
61 ggaggagccg cagtcagatc ctagcgtcga gccccctctg agtcaggaaa cattttcaga
121 cctatggaaa ctacttcctg aaaacaacgt tctgtccccc ttgccgtccc aagcaatgga
181 tgatttgatg ctgtccccgg acgatattga acaatggttc actgaagacc caggtccaga
241 tgaagctccc agaatgccag aggctgctcc ccccgtggcc cctgcaccag cagctcctac
301 accggcggcc cctgcaccag ccccctcctg gcccctgtca tcttctgtcc cttcccagaa
361 aacctaccag ggcagctacg gtttccgtct gggcttcttg cattctggga cagccaagtc
421 tgtgacttgc acgtactccc ctgccctcaa caagatgttt tgccaactgg ccaagacctg
481 ccctgtgcag ctgtgggttg attccacacc cccgcccggc acccgcgtcc gcgccatggc
541 catctacaag cagtcacagc acatgacgga ggttgtgagg cgctgccccc accatgagcg
601 ctgctcagat agcgatggtc tggcccctcc tcagcatctt atccgagtgg aaggaaattt
661 gcgtgtggag tatttggatg acagaaacac ttttcgacat agtgtggtgg tgccctatga
721 gccgcctgag gttggctctg actgtaccac catccactac aactacatgt gtaacagttc
781 ctgcatgggc ggcatgaacc ggaggcccat cctcaccatc atcacactgg aagactccag
841 tggtaatcta ctgggacgga acagctttga ggtgcgtgtt tgtgcctgtc ctgggagaga
901 ccggcgcaca gaggaagaaa atctccgcaa gaaaggggag cctcaccacg agctgccccc
961 agggacacta agcgagcact gcccaacaca ccagctcctc ccccagcaaa aaaaaccccg
1021 g
//
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P2646/pENTR223-MRPS35（289-972bp）人源基因质粒 |
| P2647/pENTR223-MOB1A-G635A人源基因质粒 |
| P2648/pENTR223-SINHCAF-T10C人源基因质粒 |
| P2649/pENTR223-GAD1人源基因质粒 |
| P2650/pENTR223-TMEM147人源基因质粒 |
| P2651/pENTR223-SNRPB2-A12T人源基因质粒 |
| P2652/pENTR223-ZCRB1-C392A人源基因质粒 |
| P2653/pENTR223-RAB6A人源基因质粒 |
| P2654/pENTR223-CLDN4人源基因质粒 |
| P2655/pENTR223-CINP人源基因质粒 |
| P2656/pENTR223-SLC35A3人源基因质粒 |
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文献和实验相关实验
-Rec2-53和p53HIS2作为阳性对照以及pGADT7-Rec2-53和pHIS2作为阴性对照。 小结：酵母单杂交实验中cDNA文库筛，选择重组质粒的阳性克隆是关键点，实验室最常听说的就是BD 公司的Clontech。
相关专题 酵母双杂交技术专题 1.构建CaM诱饵质粒 ① PCR 扩增CaM基因的开放阅读框，正向和反向引物分别加接酶切位点。 ② 扩增得到的CaM插入T载体 ( T–CaM) 。 ③ T–CaM和pGBKT7 质粒 分别双酶切。 ④ 胶回收目的DNA。 ⑤ 将CaM连入pGBKT7，构建成表达载体 pGBKT-CaM，转化大肠杆菌DH5&alpha
开始做酵母双杂交了，计划用一个膜蛋白去筛库，已经做好了工作量大，而预期结果要靠点小运气的心理准备，面前真是一条很长的路要走！ 在丁香园学习了很久，希望能将我这次试验过程中遇到的困难和思索记录下来，跟大家一同讨论，共同学习。 今天先说说实验之前的试剂准备，为了保证实验能顺利进行，我选择了clontech的matchmaker gold系统，订购了人脑cDNA文库（标准化的），还有培养基也是订的商品化的，再有一个提酵母质粒的KIT 1，GOLD系统式对系统3的升级版，替换了一个报告
pGADT7-Rec-53酵母双杂交质粒
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