- ￥900
- YLKBIO
- YLK-ZL0019
- 国产
- 2026年01月07日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
65
- 英文名：
pGADT7-Rec
- 保质期：
90天
- 供应商：
优利科（上海）生命科学有限公司
- 保存条件：
-20℃
- 规格：
质粒干粉
产品名称：pGADT7-Rec质粒
产品规格：质粒干粉
有效期：90天，请尽快转化。
保存温度：一般在-20℃，置于-80℃保存时间更长。
运输方式：常温运输，1周内。
应用领域：科研
生长条件：LB +氨苄青霉素，37℃（克隆菌株DH5α，8058bp ,启动子:ADH1 复制子:2U ）
注意事项：转化前请准确查找该质粒相应的抗性、感受态和培养温度。（请向客服QQ索要质粒信息目录）
1.溶解： 收到质粒干粉后，请加入 20μl 无菌水至管底，溶解质粒，室温静置 1min；
2.混合（吸附质粒）： 200μl 感受态细胞 + 质粒 DNA 5~10μl 混匀，冰上放置 30min；
3.热激导入： 42℃静置 90s；
4.收缩膜孔： 冰浴 2min；
5.修复培养： 毎管加 800μl LB 液体培养基，37 ℃培养 1h 150 r/min；
6.筛选培养： 将适当体积（100 μl）的复苏细胞，涂布在相应抗性的 LB 平板上，正置平皿 30min（琼脂面务必干燥后）， 倒置培养 12-16h，出现菌落。
7.提取： 挑取单克隆菌落至相应抗性 LB 液体培养基中，震荡培养 12-16h，根据试验需要提取质粒。
pGADT7-Rec质粒培养基：LB+50mcg/ml氨苄青霉素：酵母膏 5.0g，蛋白胨 10.0g，NaCl 10.0g，蒸馏水 1.0L，pH 7.0。121℃，15min灭菌。灭菌结束后，培养基冷却至40-50℃时加入氨苄青霉素，浓度50mcg/ml。
| pENTR223-BLVRA人源基因质粒 |
| pENTR223-CDCA8人源基因质粒 |
| pENTR223-KLF6人源基因质粒 |
| pENTR223-RSU1人源基因质粒 |
| pENTR223-CCDC82-C445G人源基因质粒 |
| pENTR223-CDCP1人源基因质粒 |
| pENTR223-BTN2A2人源基因质粒 |
| pENTR223-MAX人源基因质粒 |
| pENTR223-CRAT人源基因质粒 |
| pENTR223-FKBPL人源基因质粒 |
| pENTR223-SCAMP3-A10-C1033T人源基因质粒 |
| pENTR223-MBOAT7-C696A-T781C人源基因质粒 |
| pENTR223-SIAT7E人源基因质粒 |
| pENTR223-AATF人源基因质粒 |
| pENTR223-SMN2-aa225缺失人源基因质粒 |
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文献和实验-Rec2-53和p53HIS2作为阳性对照以及pGADT7-Rec2-53和pHIS2作为阴性对照。 小结：酵母单杂交实验中cDNA文库筛，选择重组质粒的阳性克隆是关键点，实验室最常听说的就是BD 公司的Clontech。
tianjiaoya 我想构建一个真核表达质粒，用这个真核表达质粒来表达绿色荧光蛋白，但是我想让绿色荧光蛋白的表达受酵母菌GLA4转录因子的调控，也就是说有GLA4存在，这个质粒就表达绿色荧光蛋白，没有GLA4存在，就不表达绿色荧光蛋白。当然需要对真核表达质粒上的启动子做相应的调整，但是我现在的问题是，转录因子GLA4能不能对质粒上有相应调控元件的表达盒，进行调控？据说GLA4上有核定位元件，要是将这个核定位序列删除，可行吗？据说核内有很多的辅助因子，参与了蛋白
构建 ① 设定温度梯度(26-35°C)和时间梯度(12-72 h)，对龙须菜进行高温胁迫。 ② 提取龙须菜总RNA(RNA提取按照Qiagen试剂盒说明书进行，RNeasy Plant Mini Kit，Qiagen)。 ③ 应用SMART技术构建龙须菜高温胁迫表达cDNA文库，3’和5’引物分别加接酶切位点。 4.文库筛选载体构建 将龙须菜高温胁迫表达文库cDNA双酶切，连入同样双酶切的AD 克隆质粒pGADT7中，用PEG/LiAc 转化
