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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20
- 保质期：
2年
- 英文名：
pABAI
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
基本信息
名称：pABAI酵母单杂交质粒
别称: pABAI
质粒属性
质粒简介
pABAI质粒是一种单杂交酵母报告质粒，可以识别和分析蛋白质与DNA之间的相互作用，而不仅仅是证明蛋白之间的相互作用。这个质粒具有AbA抗性因而具有很强的筛选能力，可极大地降低背景水平。
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 4894 bp ds-DNA circular SYN 10-SEP-2016
DEFINITION synthetic circular DNA
KEYWORDS Untitled 21
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 4894)
TITLE Direct Submission
JOURNAL Exported Saturday, September 10, 2016 from MiaoLingPlasmid
http://www.miaolingbio.com
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..4894
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/mol_type="other DNA"
CDS 185..1390
/codon_start=1
/gene="S. cerevisiae AUR1 with a dominant F158Y mutation"
/product="aureobasidin A-resistant mutant of inositol
phosphorylceramide synthase"
/note="AurR"
/note="confers fungal resistance to Aureobasidin A"
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VHYIFLGSIMLFVFITNPAPWIFKILFYCFLGTLFIIPATSQFFFNALPILTWVALYFT
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VAAILFVFGPPTVLQGYAFAFGYMNLFGVIMQNVFPAAPPWYKILYGLQSANYDMHGSP
GGLARIDKLLGINMYTTCFSNSSVIFGAFPSLHSGCATMEALFFCYCFPKLKPLFIAYV
CWLWWSTMYLTHHYFVDLMAGSVLSYVIFQYTKYTHLPIVDTSLFCRWSYTSIEKYDIS
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RA"
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/note="M13 rev"
/note="common sequencing primer, one of multiple similar
variants"
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/bound_moiety="lac repressor encoded by lacI"
/note="lac operator"
/note="The lac repressor binds to the lac operator to
inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be
relieved by adding lactose or
isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG)."
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/note="lac promoter"
/note="promoter for the E. coli lac operon"
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/bound_moiety="E. coli catabolite activator protein"
/note="CAP binding site"
/note="CAP binding activates transcription in the presence
of cAMP."
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/direction=LEFT
/note="ori"
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
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/gene="bla"
/product="beta-lactamase"
/note="AmpR"
/note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
related antibiotics"
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LIKHW"
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for uracil biosynthesis"
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5-fluoroorotic acid (5-FOA)"
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ORIGIN
1 aagcttgaat tcgagctcgg tacccgggga tctgtcgacc tcgaggcatg tgctctgtat
61 gtatataaaa ctcttgtttt cttcttttct ctaaatattc tttccttata cattaggtcc
121 tttgtagcat aaattactat acttctatag acacgcaaac acaaatacac acactaaatt
181 aataatggca aacccttttt cgagatggtt tctatcagag agacctccaa actgccatgt
241 agccgattta gaaacaagtt tagatcccca tcaaacgttg ttgaaggtgc aaaaatacaa
301 acccgcttta agcgactggg tgcattacat cttcttggga tccatcatgc tgtttgtgtt
361 cattactaat cccgcacctt ggatcttcaa gatccttttt tattgtttct tgggcacttt
421 attcatcatt ccagctacgt cacagttttt cttcaatgcc ttgcccatcc taacatgggt
481 ggcgctgtat ttcacttcat cgtactttcc agatgaccgc aggcctccta ttactgtcaa
541 agtgttacca gcggtggaaa caattttata cggcgacaat ttaagtgata ttcttgcaac
601 atcgacgaat tcctttttgg acattttagc atggttaccg tacggactat ttcattatgg
661 ggccccattt gtcgttgctg ccatcttatt cgtatttggt ccaccaactg ttttgcaagg
721 ttatgctttt gcatttggtt atatgaacct gtttggtgtt atcatgcaaa atgtctttcc
781 agccgctccc ccatggtata aaattctcta tggattgcaa tcagccaact atgatatgca
841 tggctcgcct ggtggattag ctagaattga taagctactc ggtattaata tgtatactac
901 atgtttttca aattcctccg tcattttcgg tgcttttcct tcactgcatt ccgggtgtgc
961 tactatggaa gccctgtttt tctgttattg ttttccaaaa ttgaagccct tgtttattgc
1021 ttatgtttgc tggttatggt ggtcaactat gtatctgaca caccattatt ttgtagacct
1081 tatggcaggt tctgtgctgt catacgttat tttccagtac acaaagtaca cacatttacc
1141 aattgtagat acatctcttt tttgcagatg gtcatacact tcaattgaga aatacgatat
1201 atcaaagagt gatccattgg ctgcagattc aaacgatatc gaaagtgtcc ctttgtccaa
1261 cttggaactt gactttgatc ttaatatgac tgatgaaccc agtgtaagcc cttcgttatt
1321 tgatggatct acttctgttt ctcgttcgtc cgccacgtct ataacgtcac taggtgtaaa
1381 gagggcttaa ggaaatccat tatgtactat ttaaaaaaca caaacttttg gatgttcggt
1441 ttattctttt tcttttactt ttttatcatg ggagcctact tcccgttttt cccgatttgg
1501 ctacatgaca tcaaccatat cagcaaaagt gatacgggta ttatttttgc cgctatttct
1561 ctgttctcgc tattattcca accgctgttt ggtctgcttt ctgacaaact cggcctcgac
1621 tctagcgaat taattcgtaa tcatgtcata gctgtttcct gtgtgaaatt gttatccgct
1681 cacaattcca cacaacatac gagccggaag cataaagtgt aaagcctggg gtgcctaatg
1741 agtgagctaa ctcacattaa ttgcgttgcg ctcactgccc gctttccagt cgggaaacct
1801 gtcgtgccag ctgcattaat gaatcggcca acgcgcgggg agaggcggtt tgcgtattgg
1861 gcgctcttcc gcttcctcgc tcactgactc gctgcgctcg gtcgttcggc tgcggcgagc
1921 ggtatcagct cactcaaagg cggtaatacg gttatccaca gaatcagggg ataacgcagg
1981 aaagaacatg tgagcaaaag gccagcaaaa ggccaggaac cgtaaaaagg ccgcgttgct
2041 ggcgtttttc cataggctcc gcccccctga cgagcatcac aaaaatcgac gctcaagtca
2101 gaggtggcga aacccgacag gactataaag ataccaggcg tttccccctg gaagctccct
2161 cgtgcgctct cctgttccga ccctgccgct taccggatac ctgtccgcct ttctcccttc
2221 gggaagcgtg gcgctttctc atagctcacg ctgtaggtat ctcagttcgg tgtaggtcgt
2281 tcgctccaag ctgggctgtg tgcacgaacc ccccgttcag cccgaccgct gcgccttatc
2341 cggtaactat cgtcttgagt ccaacccggt aagacacgac ttatcgccac tggcagcagc
2401 cactggtaac aggattagca gagcgaggta tgtaggcggt gctacagagt tcttgaagtg
2461 gtggcctaac tacggctaca ctagaagaac agtatttggt atctgcgctc tgctgaagcc
2521 agttaccttc ggaaaaagag ttggtagctc ttgatccggc aaacaaacca ccgctggtag
2581 cggtggtttt tttgtttgca agcagcagat tacgcgcaga aaaaaaggat ctcaagaaga
2641 tcctttgatc ttttctacgg ggtctgacgc tcagtggaac gaaaactcac gttaagggat
2701 tttggtcatg agattatcaa aaaggatctt cacctagatc cttttaaatt aaaaatgaag
2761 ttttaaatca atctaaagta tatatgagta aacttggtct gacagttacc aatgcttaat
2821 cagtgaggca cctatctcag cgatctgtct atttcgttca tccatagttg cctgactccc
2881 cgtcgtgtag ataactacga tacgggaggg cttaccatct ggccccagtg ctgcaatgat
2941 accgcgagac ccacgctcac cggctccaga tttatcagca ataaaccagc cagccggaag
3001 ggccgagcgc agaagtggtc ctgcaacttt atccgcctcc atccagtcta ttaattgttg
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3121 tacaggcatc gtggtgtcac gctcgtcgtt tggtatggct tcattcagct ccggttccca
3181 acgatcaagg cgagttacat gatcccccat gttgtgcaaa aaagcggtta gctccttcgg
3241 tcctccgatc gttgtcagaa gtaagttggc cgcagtgtta tcactcatgg ttatggcagc
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//
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
名称：pABAI酵母单杂交质粒
别称: pABAI
| 启动子: | URA3 |
|---|---|
| 复制子: | pUC |
| 质粒分类: | 酵母系列质粒；酵母杂交质粒；单杂交类质粒 |
| 质粒大小: | 4894bp |
| 原核抗性: | Amp |
| 筛选标记: | URA3 |
| 克隆菌株: | DH5a |
| 培养条件: | 37度 |
| 表达宿主: | Y1Hgold等酵母菌 |
| 培养条件: | 30℃，YPDA，有氧 |
| 5'测序引物: | pABAI-F（GTTCCTTATATGTAGCTTTCGACA） |
| 3'测序引物: | pABAI-R（CCATCTCGAAAAAGGGTTTGCC） |
| 备注: | 低拷贝质粒 |
质粒属性
| 载体宿主： | 酵母菌 |
|---|---|
| 载体用途： | 杂交 |
| 基因种属： | |
| 基因类型： | |
| 原核抗性： | Amp |
| 筛选标记： | URA3 |
| 荧光蛋白： |
质粒简介
pABAI质粒是一种单杂交酵母报告质粒，可以识别和分析蛋白质与DNA之间的相互作用，而不仅仅是证明蛋白之间的相互作用。这个质粒具有AbA抗性因而具有很强的筛选能力，可极大地降低背景水平。
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 4894 bp ds-DNA circular SYN 10-SEP-2016
DEFINITION synthetic circular DNA
KEYWORDS Untitled 21
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 4894)
TITLE Direct Submission
JOURNAL Exported Saturday, September 10, 2016 from MiaoLingPlasmid
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FEATURES Location/Qualifiers
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ORIGIN
1 aagcttgaat tcgagctcgg tacccgggga tctgtcgacc tcgaggcatg tgctctgtat
61 gtatataaaa ctcttgtttt cttcttttct ctaaatattc tttccttata cattaggtcc
121 tttgtagcat aaattactat acttctatag acacgcaaac acaaatacac acactaaatt
181 aataatggca aacccttttt cgagatggtt tctatcagag agacctccaa actgccatgt
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2281 tcgctccaag ctgggctgtg tgcacgaacc ccccgttcag cccgaccgct gcgccttatc
2341 cggtaactat cgtcttgagt ccaacccggt aagacacgac ttatcgccac tggcagcagc
2401 cactggtaac aggattagca gagcgaggta tgtaggcggt gctacagagt tcttgaagtg
2461 gtggcctaac tacggctaca ctagaagaac agtatttggt atctgcgctc tgctgaagcc
2521 agttaccttc ggaaaaagag ttggtagctc ttgatccggc aaacaaacca ccgctggtag
2581 cggtggtttt tttgtttgca agcagcagat tacgcgcaga aaaaaaggat ctcaagaaga
2641 tcctttgatc ttttctacgg ggtctgacgc tcagtggaac gaaaactcac gttaagggat
2701 tttggtcatg agattatcaa aaaggatctt cacctagatc cttttaaatt aaaaatgaag
2761 ttttaaatca atctaaagta tatatgagta aacttggtct gacagttacc aatgcttaat
2821 cagtgaggca cctatctcag cgatctgtct atttcgttca tccatagttg cctgactccc
2881 cgtcgtgtag ataactacga tacgggaggg cttaccatct ggccccagtg ctgcaatgat
2941 accgcgagac ccacgctcac cggctccaga tttatcagca ataaaccagc cagccggaag
3001 ggccgagcgc agaagtggtc ctgcaacttt atccgcctcc atccagtcta ttaattgttg
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4201 atagggagcc cttgcatgac aattctgcta acatcaaaag gcctctaggt tcctttgtta
4261 cttcttctgc cgcctgcttc aaaccgctaa caatacctgg gcccaccaca ccgtgtgcat
4321 tcgtaatgtc tgcccattct gctattctgt atacacccgc agagtactgc aatttgactg
4381 tattaccaat gtcagcaaat tttctgtctt cgaagagtaa aaaattgtac ttggcggata
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4621 tggcagcaac aggactagga tgagtagcag cacgttcctt atatgtagct ttcgacatga
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质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P2492/pENTR223-SLC43A1人源基因质粒 |
| P2493/pENTR223-NRBP1人源基因质粒 |
| P2494/pENTR223-NAE1人源基因质粒 |
| P2505/pENTR223-CCDC28A人源基因质粒 |
| P2506/pENTR223-UBC人源基因质粒 |
| P2507/pENTR223-PFN1人源基因质粒 |
| P2508/pENTR223-TMEM239人源基因质粒 |
| P2509/pCMV-SPORT6-CDH16人源基因质粒 |
| P2510/pENTR223-PMCH人源基因质粒 |
| P2511/pENTR223-WDR63人源基因质粒 |
| P2512/pENTR223-PLA2G16人源基因质粒 |
| P2513/pENTR223-CEP290人源基因质粒 |
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文献和实验相关实验
细胞内不能稳定地表达，或融合蛋白发生错误折叠，或者不能定位于酵母细胞核内，以及融合的Gal4AD封闭了蛋白质上与DNA相互作用的位点，则都可能干扰AD融合蛋白结合于靶元件的能力，从而产生假阴性结果。 3．酵母单杂交的基本操作过程 (1)设计含目的基因(称为诱饵)和下游报告基因的质粒，并将其转入酵母细胞。 (2)将文库蛋白的编码基因片段与GAL4转录激活域融合表达的cDNA文库质粒转化人同一酵母中。 (3)若文库蛋白与目的基因相互
tianjiaoya 我想构建一个真核表达质粒，用这个真核表达质粒来表达绿色荧光蛋白，但是我想让绿色荧光蛋白的表达受酵母菌GLA4转录因子的调控，也就是说有GLA4存在，这个质粒就表达绿色荧光蛋白，没有GLA4存在，就不表达绿色荧光蛋白。当然需要对真核表达质粒上的启动子做相应的调整，但是我现在的问题是，转录因子GLA4能不能对质粒上有相应调控元件的表达盒，进行调控？据说GLA4上有核定位元件，要是将这个核定位序列删除，可行吗？据说核内有很多的辅助因子，参与了蛋白
[试剂] PLATE 溶液： 40 ％聚乙二醇（ PEG ，分子量 3350 ； Sigma P 3640 ） 0.1mol/L 醋酸锂 10 mmol/L Tris-HCl （ pH7.5 ） 1 mmol/L EDTA [试验方法] 1． 用牙签从平板中挑取单菌落（直径 2 ～ 3mm ），转移到 1.5ml 的无菌离心管中。 2． 将 10 μ l 载体 DNA （ 100 μ g ）与 10 μ l 转化质粒 DNA
pABAI酵母单杂交质粒
￥100 - 1000
