pYEp352酿酒酵母质粒

基本信息
名称：pYEp352酿酒酵母质粒
别称: YEp352

启动子:	URA3
复制子:	2U
质粒分类:	酵母系列，酿酒酵母表达载体
质粒大小:	5881bp
原核抗性:	Amp
筛选标记:	URA3
克隆菌株:	DH5a
培养条件:	37度
表达宿主:	酵母细胞
5'测序引物:	M13F:TGTAAAACGACGGCCAGT
3'测序引物:	根据序列设计引物

质粒属性

载体宿主：	酵母菌
载体用途：	蛋白表达
基因种属：
基因类型：	ORF
原核抗性：	Amp
筛选标记：	URA3
荧光蛋白：

质粒简介


质粒图谱


质粒序列
LOCUS       Exported                5181 bp ds-DNA     circular SYN 11-SEP-2016
DEFINITION  synthetic circular DNA
ACCESSION   .
VERSION     .
KEYWORDS    Untitled 5
SOURCE      synthetic DNA construct
  ORGANISM  synthetic DNA construct
REFERENCE   1  (bases 1 to 5181)
  AUTHORS   .
  TITLE     Direct Submission
  JOURNAL   Exported Sunday, September 11, 2016 from SnapGene Viewer 3.1.4
            http://www.miaolingbio.com
FEATURES             Location/Qualifiers
     source          1..5181
                     /organism="synthetic DNA construct"
                     /mol_type="other DNA"
     protein_bind    20..36
                     /bound_moiety="lac repressor encoded by lacI"
                     /note="lac operator"
                     /note="The lac repressor binds to the lac operator to 
                     inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be 
                     relieved by adding lactose or 
                     isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG)."
     promoter        complement(44..74)
                     /note="lac promoter"
                     /note="promoter for the E. coli lac operon"
     rep_origin      complement(398..986)
                     /direction=LEFT
                     /note="ori"
                     /note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of 
                     replication"
     CDS             complement(1157..2017)
                     /codon_start=1
                     /gene="bla"
                     /product="beta-lactamase"
                     /note="AmpR"
                     /note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
                     related antibiotics"
                     /translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI
                     ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
                     PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
                     EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
                     LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
                     LIKHW"
     promoter        complement(2018..2122)
                     /gene="bla"
                     /note="AmpR promoter"
     rep_origin      2404..3568
                     /note="2u ori"
                     /note="yeast 2u plasmid origin of replication"
     promoter        3804..4014
                     /gene="S. cerevisiae URA3"
                     /note="URA3 promoter"
     CDS             4015..4818
                     /codon_start=1
                     /gene="S. cerevisiae URA3"
                     /product="orotidine-5'-phosphate decarboxylase, required 
                     for uracil biosynthesis"
                     /note="URA3"
                     /note="yeast auxotrophic marker, counterselectable with 
                     5-fluoroorotic acid (5-FOA)"
                     /translation="MSKATYKERAATHPSPVAAKLFNIMHEKQTNLCASLDVRTTKELL
                     ELVEALGPKICLLKTHVDILTDFSMEGTVKPLKALSAKYNFLLFEDRKFADIGNTVKLQ
                     YSAGVYRIAEWADITNAHGVVGPGIVSGLKQAAEEVTKEPRGLLMLAELSCKGSLSTGE
                     YTKGTVDIAKSDKDFVIGFIAQRDMGGRDEGYDWLIMTPGVGLDDKGDALGQQYRTVDD
                     VVSTGSDIIIVGRGLFAKGRDAKVEGERYRKAGWEAYLRRCGQQN"
     CDS             complement(4891..5181)
                     /codon_start=1
                     /gene="lacZ fragment"
                     /product="LacZ-alpha fragment of beta-galactosidase"
                     /note="lacZ-alpha"
                     /translation="MTMITNSSSVPGDPLESTCRHASLALAVVLQRRDWENPGVTQLNR
                     LAAHPPFASWRNSEEARTDRPSQQLRSLNGEWRLMRYFLLTHLCGISHRIG"
     primer_bind     5091..5107
                     /note="M13 fwd"
                     /note="common sequencing primer, one of multiple similar 
                     variants"
     misc_feature    5111..5167
                     /note="MCS"
                     /note="pUC18/19 multiple cloning site"
     primer_bind     complement(5177..12)
                     /note="M13 rev"
                     /note="common sequencing primer, one of multiple similar 
                     variants"
ORIGIN
        1 agctgtttcc tgtgtgaaat tgttatccgc tcacaattcc acacaacata cgagccggaa
       61 gcataaagtg taaagcctgg ggtgcctaat gagtgaggta actcacatta attgcgttgc
      121 gctcactgcc cgctttccag tcgggaaacc tgtcgtgcca gctggattaa tgaatcggcc
      181 aacgcgcggg gagaggcggt ttgcgtattg ggcgctcttc cgcttcctcg ctcactgact
      241 cgctgcgctc ggtcgttcgg ctgcggcgag cggtatcagc tcactcaaag gcggtaatac
      301 ggttatccac agaatcaggg gataacgcag gaaagaacat gtgagcaaaa ggccagcaaa
      361 aggccaggaa ccgtaaaaag gccgcgttgc tggcgttttt ccataggctc cgcccccctg
      421 acgagcatca caaaaatcga cgctcaagtc agaggtggcg aaacccgaca ggactataaa
      481 gataccaggc gtttccccct ggaagctccc tcgtgcgctc tcctgttccg accctgccgc
      541 ttaccggata cctgtccgcc tttctccctt cgggaagcgt ggcgctttct caatgctcac
      601 gctgtaggta tctcagttcg gtgtaggtcg ttcgctccaa gctgggctgt gtgcacgaac
      661 cccccgttca gcccgaccgc tgcgccttat ccggtaacta tcgtcttgag tccaacccgg
      721 taagacacga cttatcgcca ctggcagcag ccactggtaa caggattagc agagcgaggt
      781 atgtaggcgg tgctacagag ttcttgaagt ggtggcctaa ctacggctac actagaagga
      841 cagtatttgg tatctgcgct ctgctgaagc cagttacctt cggaaaaaga gttggtagct
      901 cttgatccgg caaacaaacc accgctggta gcggtggttt ttttgtttgc aagcagcaga
      961 ttacgcgcag aaaaaaagga tctcaagaag atcctttgat cttttctacg gggtctgacg
     1021 ctcagtggaa cgaaaactca cgttaaggga ttttggtcat gagattatca aaaaggatct
     1081 tcacctagat ccttttaaat taaaaatgaa gttttaaatc aatctaaagt atatatgagt
     1141 aaacttggtc tgacagttac caatgcttaa tcagtgaggc acctatctca gcgatctgtc
     1201 tatttcgttc atccatagtt gcctgactcc ccgtcgtgta gataactacg atacgggagg
     1261 gcttaccatc tggccccagt gctgcaatga taccgcgaga cccacgctca ccggctccag
     1321 atttatcagc aataaaccag ccagccggaa gggccgagcg cagaagtggt cctgcaactt
     1381 tatccgcctc catccagtct attaattgtt gccgggaagc tagagtaagt agttcgccag
     1441 ttaatagttt gcgcaacgtt gttgccattg ctacaggcat cgtggtgtca cgctcgtcgt
     1501 ttggtatggc ttcattcagc tccggttccc aacgatcaag gcgagttaca tgatccccca
     1561 tgttgtgcaa aaaagcggtt agctccttcg gtcctccgat cgttgtcaga agtaagttgg
     1621 ccgcagtgtt atcactcatg gttatggcag cactgcataa ttctcttact gtcatgccat
     1681 ccgtaagatg cttttctgtg actggtgagt actcaaccaa gtcattctga gaatagtgta
     1741 tgcggcgacc gagttgctct tgcccggcgt caatacggga taataccgcg ccacatagca
     1801 gaactttaaa agtgctcatc attggaaaac gttcttcggg gcgaaaactc tcaaggatct
     1861 taccgctgtt gagatccagt tcgatgtaac ccactcgtgc acccaactga tcttcagcat
     1921 cttttacttt caccagcgtt tctgggtgag caaaaacagg aaggcaaaat gccgcaaaaa
     1981 agggaataag ggcgacacgg aaatgttgaa tactcatact cttccttttt caatattatt
     2041 gaagcattta tcagggttat tgtctcatga gcggatacat atttgaatgt atttagaaaa
     2101 ataaacaaat aggggttccg cgcacatttc cccgaaaagt gccacctgac gtctaagaaa
     2161 ccattattat catgacatta acctataaaa ataggcgtat cacgaggccc tttcgtctcg
     2221 cgcgtttcgg tgatgacggt gaaaacctct gacacatgca gctcccggag acggtcacag
     2281 cttgtctgta agcggatgcc gggagcagac aagcccgtca gggcgcgtca gcgggtgttg
     2341 gcgggtgtcg gggctggctt aactatgcgg catcagagca gattgtactg agagtgcacc
     2401 ataacgcatt taagcataaa cacgcactat gccgttcttc tcatgtatat atatatacag
     2461 gcaacacgca gatataggtg cgacgtgaac agtgagctgt atgtgcgcag ctcgcgttgc
     2521 attttcggaa gcgctcgttt tcggaaacgc tttgaagttc ctattccgaa gttcctattc
     2581 tctagctaga aagtatagga acttcagagc gcttttgaaa accaaaagcg ctctgaagac
     2641 gcactttcaa aaaaccaaaa acgcaccgga ctgtaacgag ctactaaaat attgcgaata
     2701 ccgcttccac aaacattgct caaaagtatc tctttgctat atatctctgt gctatatccc
     2761 tatataacct acccatccac ctttcgctcc ttgaacttgc atctaaactc gacctctaca
     2821 ttttttatgt ttatctctag tattactctt tagacaaaaa aattgtagta agaactattc
     2881 atagagtgaa tcgaaaacaa tacgaaaatg taaacatttc ctatacgtag tatatagaga
     2941 caaaatagaa gaaaccgttc ataattttct gaccaatgaa gaatcatcaa cgctatcact
     3001 ttctgttcac aaagtatgcg caatccacat cggtatagaa tataatcggg gatgccttta
     3061 tcttgaaaaa atgcacccgc agcttcgcta gtaatcagta aacgcgggaa gtggagtcag
     3121 gcttttttta tggaagagaa aatagacacc aaagtagcct tcttctaacc ttaacggacc
     3181 tacagtgcaa aaagttatca agagactgca ttatagagcg cacaaaggag aaaaaaagta
     3241 atctaagatg ctttgttaga aaaatagcgc tctcgggatg catttttgta gaacaaaaaa
     3301 gaagtataga ttctttgttg gtaaaatagc gctctcgcgt tgcatttctg ttctgtaaaa
     3361 atgcagctca gattctttgt ttgaaaaatt agcgctctcg cgttgcattt ttgttttaca
     3421 aaaatgaagc acagattctt cgttggtaaa atagcgcttt cgcgttgcat ttctgttctg
     3481 taaaaatgca gctcagattc tttgtttgaa aaattagcgc tctcgcgttg catttttgtt
     3541 ctacaaaatg aagcacagat gcttcgttaa caaagatatg ctattgaagt gcaagatgga
     3601 aacgcagaaa atgaaccggg gatgcgacgt gcaagattac ctatgcaata gatgcaatag
     3661 tttctccagg aaccgaaata catacattgt cttccgtaaa gcgctagact atatattatt
     3721 atacaggttc aaatatacta tctgtttcag ggaaaactcc caggttcgga tgttcaaaat
     3781 tcaatgatgg gtaacaagag cttttcaatt catcattttt tttttattct tttttttgat
     3841 ttcggtttct ttgaaatttt tttgattcgg taatctccga acagaaggaa gaacgaagga
     3901 aggagcacag acttagattg gtatatatac gcatatgtag tgttgaagaa acatgaaatt
     3961 gcccagtatt cttaacccaa ctgcacagaa caaaaaccga aacgaagata aatcatgtcg
     4021 aaagctacat ataaggaacg tgctgctact catcctagtc ctgttgctgc caagctattt
     4081 aatatcatgc acgaaaagca aacaaacttg tgtgcttcat tggatgttcg taccaccaag
     4141 gaattactgg agttagttga agcattaggt cccaaaattt gtttactaaa aacacatgtg
     4201 gatatcttga ctgatttttc catggagggc acagttaagc cgctaaaggc attatccgcc
     4261 aagtacaatt ttttactctt cgaagacaga aaatttgctg acattggtaa tacagtcaaa
     4321 ttgcagtact ctgcgggtgt atacagaata gcagaatggg cagacattac gaatgcacac
     4381 ggtgtggtgg gcccaggtat tgttagcggt ttgaagcagg cggcagaaga agtaacaaag
     4441 gaacctagag gccttttgat gttagcagaa ttgtcatgca agggctccct atctactgga
     4501 gaatatacta agggtactgt tgacattgcg aagagcgaca aagattttgt tatcggcttt
     4561 attgctcaaa gagacatggg tggaagagat gaaggttacg attggttgat tatgacaccc
     4621 ggtgtgggtt tagatgacaa gggagacgca ttgggtcaac agtatagaac cgtggatgat
     4681 gtggtctcta caggatctga cattattatt gttggaagag gactatttgc aaagggaagg
     4741 gatgctaagg tagagggtga acgttacaga aaagcaggct gggaagcata tttgagaaga
     4801 tgcggccagc aaaactaaaa aactgtatta taagtaaatg catgtatact aaactcacaa
     4861 attagagctt caatttaatt atatcagtta ttaccctatg cggtgtgaaa taccgcacag
     4921 atgcgtaagg agaaaatacc gcatcaggcg ccattcgcca ttcaggctgc gcaactgttg
     4981 ggaagggcga tcggtgcggg cctcttcgct attacgccag ctggcgaagg ggggatgtgc
     5041 tgcaaggcga ttaagttggg taacgccagg gttttcccag tcacgacgtt gtaaaacgac
     5101 ggccagtgcc aagcttgcat gcctgcaggt cgactctaga ggatccccgg gtaccgagct
     5161 cgaattcgta atcatggtca t
//
 

质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
         收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
         1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
              ①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
              ②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
              ③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
              ④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
              ⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
              ⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
        2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
              四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
        3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
              穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
        4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
              直接挑取单菌落至液体培养基中。
        5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
              单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
        6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
              收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。

二、转化图片

P0991/pENTR223-STXBP1人源基因质粒

P0993/pENTR223-HDAC7人源基因质粒

P1013/pENTR223-LRPPRC人源基因质粒

P0853/pENTR223-TIGIT人源基因质粒

P0891/pENTR223-CXCR4人源基因质粒

P0764/pENTR223-IDH1人源基因质粒

P0526/pENTR223-AGK人源基因质粒

P0612/pENTR223-VEGFA人源基因质粒

P0623/pENTR223-SIRT4人源基因质粒

P0624/pENTR223-BMP4人源基因质粒