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- 2026年05月27日
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- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20
- 保质期：
2年
- 英文名：
pLCDH-Cir;环状RNA
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
名称：pLV-CiR慢病毒环状RNA质粒
别称: pLCDH-Cir;环状RNA
| 质粒分类: | 哺乳细胞载体；RNA环状表达质粒 |
|---|---|
| 原核抗性: | Amp |
| 筛选标记: | Puro |
| 克隆菌株: | Stbl3 |
| 培养条件: | 37度 |
质粒属性
| 载体宿主： | 哺乳细胞,慢病毒 |
|---|---|
| 载体用途： | 转录调控 |
| 基因种属： | |
| 基因类型： | |
| 原核抗性： | Amp |
| 筛选标记： | Puro |
| 荧光蛋白： |
质粒简介
pLV-CiR质粒由上海烜雅生物科技有限公司提供
质粒图谱
质粒序列：详询
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P0699/pENTR5-UbCp哺乳表达质粒 |
| P1133/pDEST27-CMV-GST哺乳表达质粒 |
| P2190/pCMV-SPORT6哺乳表达质粒 |
| P3016/pcDNA3.1-ccdB-3xFLAG-V5哺乳表达质粒 |
| P2055/pAP3neo哺乳表达质粒 |
| P2275/pSG5哺乳表达质粒 |
| P0164/pVAX1哺乳表达质粒 |
| P0375/pVAX1-FLAG-N哺乳表达质粒 |
| P0342/pTT5哺乳表达质粒 |
| P0180/pCI-neo哺乳表达质粒 |
| P0183/pCEP4哺乳表达质粒 |
| P0184/pCEP4-CAT哺乳表达质粒 |
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文献和实验一 miRNA成熟及作用方式（Mikhailidis DP, Athyros VG. Nat Rev Cardiol. 2014 Feb;11(2):72-4.） miRNA过表达：将miRNA前体序列构建入病毒载体中，该载体既可用于瞬时转染细胞，也可以包装成病毒用于稳定株筛选和动物水平过表达miRNA。 miRNA敲低：设计针对miRNA的TuD RNA封闭片段或海绵片段，再将该片段构建入病毒载体中。该载体除了可以直接瞬时转染细胞用于miRNA的敲低，也可以包装成慢病毒，用于动物水平敲低miRNA
、pLO-ciR 和 PLCDH-ciR 三种 circRNAs 表达载体，适用于普通真核表达，慢病毒包装，绿色荧光和嘌呤霉素筛选等多种用途。该载体含有吉赛生物专利技术的 circRNAs 环化表达框架，载体转染细胞后可通过 RNA 剪切形成 circRNAs 分子。研究者仅需以 PCR 扩增目标 circRNAs 的线性序列，克隆进表达载体中即可，大大简化实验步骤，节约时间。 应用 circRNAs 表达载体构建 100 多个目标 circRNAs 的过表达载体，并在 HEK293、SH
circRNA 过表达 敲除 怎么设计？成环机制决定你的靶点在哪
的功能研究主要走两条线：一是当 miRNA 海绵（ceRNA），靠它稳定的环状结构高效吸附 miRNA、解除对靶基因的压制；二是结合转录因子调控转录。无论哪条线，过表达看表型、干扰验证必要性、敲除从成环源头否定，三者配合起来逻辑才闭环。体内实验要是挂荧光，慢病毒或 AAV 带 ZsGreen1 的 circRNA 载体可以直接用。 实验前 1 分钟检查 目标是过表达、敲低还是敲除，科学问题是否匹配 是否准备必要的阴性/阳性/救援或突变对照 验证是否覆盖DNA/RNA/蛋白/功能中的关键层级 载体
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