pLV-CiR慢病毒环状RNA质粒

非编码RNA研究及实验

一 miRNA成熟及作用方式（Mikhailidis DP, Athyros VG. Nat Rev Cardiol. 2014 Feb;11(2):72-4.） miRNA过表达：将miRNA前体序列构建入病毒载体中，该载体既可用于瞬时转染细胞，也可以包装成病毒用于稳定株筛选和动物水平过表达miRNA。 miRNA敲低：设计针对miRNA的TuD RNA封闭片段或海绵片段，再将该片段构建入病毒载体中。该载体除了可以直接瞬时转染细胞用于miRNA的敲低，也可以包装成慢病毒，用于动物水平敲低miRNA

环状RNA（circRNA）功能研究又一利器——过表达载体

、pLO-ciR 和 PLCDH-ciR 三种 circRNAs 表达载体，适用于普通真核表达，慢病毒包装，绿色荧光和嘌呤霉素筛选等多种用途。该载体含有吉赛生物专利技术的 circRNAs 环化表达框架，载体转染细胞后可通过 RNA 剪切形成 circRNAs 分子。研究者仅需以 PCR 扩增目标 circRNAs 的线性序列，克隆进表达载体中即可，大大简化实验步骤，节约时间。 应用 circRNAs 表达载体构建 100 多个目标 circRNAs 的过表达载体，并在 HEK293、SH

circRNA 过表达 敲除 怎么设计？成环机制决定你的靶点在哪

的功能研究主要走两条线：一是当 miRNA 海绵（ceRNA），靠它稳定的环状结构高效吸附 miRNA、解除对靶基因的压制；二是结合转录因子调控转录。无论哪条线，过表达看表型、干扰验证必要性、敲除从成环源头否定，三者配合起来逻辑才闭环。体内实验要是挂荧光，慢病毒或 AAV 带 ZsGreen1 的 circRNA 载体可以直接用。 实验前 1 分钟检查 目标是过表达、敲低还是敲除，科学问题是否匹配 是否准备必要的阴性/阳性/救援或突变对照 验证是否覆盖DNA/RNA/蛋白/功能中的关键层级 载体