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- Xybio
- 上海
- P4526
- 2025年07月14日
企业认证
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- 详细信息
- 询价记录
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20
- 保质期：
2年
- 英文名：
Plasmid#73582
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
名称：pLenti-CMV-MCS-GFP-SV-puro慢病毒表达质粒
别称: Plasmid#73582
| 启动子: | CMV |
|---|---|
| 复制子: | pUC |
| 原核抗性: | Amp |
| 筛选标记: | Puro |
| 克隆菌株: | Stbl3 |
| 培养条件: | 37度 |
质粒属性
| 载体宿主： | 哺乳细胞,慢病毒 |
|---|---|
| 载体用途： | 蛋白表达 |
| 基因种属： | 空载体 |
| 基因类型： | ORF |
| 原核抗性： | Amp |
| 筛选标记： | Puro |
| 荧光蛋白： | 绿色 |
质粒简介
pLenti-CMV-MCS-GFP-SV-puro慢病毒表达质粒
质粒图谱
质粒序列：详询
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P2308/pSV40-Fh1-m(649-1524bp)小鼠基因质粒 |
| P2309/pSV40-Tuba1b-m小鼠基因质粒 |
| P2310/pSV40-Fibp-m小鼠基因质粒 |
| P2311/pSV40-Atp5a1-m小鼠基因质粒 |
| P2312/pSV40-H13-m-G514A小鼠基因质粒 |
| P2313/pSV40-Ubb-m小鼠基因质粒 |
| P2314/pSV40-B4galt6-m小鼠基因质粒 |
| P2315/pSV40-Hsph1-m小鼠基因质粒 |
| P2316/pSV40-Ift52-m小鼠基因质粒 |
| P2317/pSV40-Atp5b-m（有突变）小鼠基因质粒 |
| P2318/pSV40-Rps2-m小鼠基因质粒 |
| P2319/pSV40-Tapbp-m-C235G小鼠基因质粒 |
| P2320/pSV40-Tkt-m小鼠基因质粒 |
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文献和实验plenti-CMV-EGFP-LC3 质粒 plenti-CMV-mRFP-EGFP-LC3 质粒 2. LC3 细胞自噬病毒 plenti-CMV-EGFP-LC3慢病毒 plenti-CMV-mRFP-EGFP-LC3 慢病毒 plenti-CMV-EGFP-LC3 腺病毒 plenti-CMV-mRFP-EGFP-LC3 腺病毒 文献支持（部分） 1. Autophagy 10:10, 1-13; October 2014 Endoplasmic
Recombinant DNA Engineering, Or Cloning Genes In Plasmids
have a promoter upstream of the MCS such that the insert gets transcribed. If the promoter is mammalian (e.g., the CMV promoter), the transcription will take place only in mammalian systems (like mammalian cell culture), but not in the bacteria. Plasmids
作为细胞生物学专业的博士生，在基因功能研究上已经有五年的经验了，今天我给大家讲讲其中经常用到并且非常重要的一种技术--慢病毒包装的过表达体系。下面我就从引物设计，慢病毒表达质粒构建等方面详细讲述。下面以 plex-MCS 载体为例。1. 选择酶切位点，为了避免移码突变，上游的酶切位点选择起始密码子 ATG 前面的 spel，下游选择 xho1。2. 构建方法的选择。连接法对于连接法，首先设计引物将目的基因 PCR 出来，即酶切位点加基因引物，此时应注意，为了防止酶切将基因破坏，通常习惯在两端
