- ￥700
- 烜雅生物
- XY-ZL0152
- 国产
- 2026年01月20日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
160
- 英文名：
pAdtrack-CMV
- 保质期：
２年
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 保存条件：
2-8℃
- 规格：
质粒干粉
英文名称：pAdtrack-CMV
形式：质粒干粉
参考用途：pAdTrack-CMV载体用来转基因腺病毒细胞表达，载体拥有CMV启动子和EGFP绿色荧光蛋白跟踪基因表达结果。
培养基：酵母膏：5.0，蛋白胨：10.0，NaCl：10.0，pH：7.0(25℃)
生长条件：LB +卡那霉素，37℃（克隆菌株Stbl3，9237bp）
存储条件：2-8℃
安全等级：1
操作步骤：
1.溶解： 收到质粒干粉后，请加入 20μl 无菌水至管底，溶解质粒，室温静置 1min；
2.混合（吸附质粒）： 200μl 感受态细胞 + 质粒 DNA 5~10µl 混匀，冰上放置 30min；
3.热激导入： 42℃静置 90s；
4.收缩膜孔： 冰浴 2min；
5.修复培养： 毎管加 800µl LB 液体培养基，37 ℃培养 1h 150 r/min；
6.筛选培养： 将适当体积（100 µl）的复苏细胞，涂布在相应抗性的 LB 平板上，正置平皿 30min（琼脂面务必干燥后）， 倒置培养 12-16h，出现菌落。
7.提取： 挑取单克隆菌落至相应抗性 LB 液体培养基中，震荡培养 12-16h，根据试验需要提取质粒。
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文献和实验液，加入6ml DMEM完全培养基，37℃孵育过夜，再换液。 7、培养过程中观察细胞生长情况。约2周后可观察到细胞病变（CPE）出现（如用pAdTrack-CMV质粒，由于含GFP,可观察到绿色荧光）。四、重组病毒鉴定 1、转导10-14d后，收集细胞沉淀，加入2ml灭菌的PBS混悬，冻融细胞，离心后收集上清保存于-80℃。 2、取30-50% 步骤1中上清，感染50-70%饱和度的25cm2方瓶中293细胞。2-3d后出现明显细胞病变。 3、感染后3-5d，当1/3-1/2细胞漂浮时
-DNA液，加入6ml DMEM完全培养基，37℃孵育过夜，再换液。 7 培养过程中观察细胞生长情况。约2周后可观察到细胞病变（CPE）出现（如用pAdTrack-CMV质粒，由于含GFP，可观察到绿色荧光）。 四 重组病毒鉴定 1 转导10-14d后，收集细胞沉淀，加入2ml灭菌的PBS混悬，冻融细胞，离心后收集上清保存于-80℃。 2 取30-50% 步骤1中上清，感染50-70%饱和度的25cm2 方瓶中293细胞。2-3d后出现明显细胞
过，但用293来包装扩增腺病毒，一般细胞传代后13~16小时就开始加病毒液，GFP稳定表达一般要等48小时，我一般是等72小时收集病毒，感染目的细胞也是细胞传代后16~20小时开始加病毒液，48小时后观察。虽说GFP稳定表达要在48小时候，但36小时还没看到荧光的话可能是转染不成功。丁香园网友gexiaohu认为：3μllipo可能太少了吧。我给楼主一个标准，每平方厘米的面积用1μl lipo 与1μl质粒。放置24小时。做实验不要省钱。多做几次不成功还不如一次成功哦。另：p-track-cmv这个质粒的荧
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