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2年
- 英文名：
pAdVAntage
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
基本信息
名称：pAdVAntage哺乳辅助质粒
别称: pAdVAntage
质粒属性
质粒简介
使用 pAdVAntage™ 载体共转染哺乳动物细胞，可通过促进翻译起始来增强多种类型细胞中蛋白的瞬时表达。
用表达载体转染哺乳动物细胞经常导致目的蛋白的表达不理想。在转染过程中生成的双链 RNA（dsRNA）被认为可将 dsRNA- 激活的抑制剂（DAI）激活, 该抑制剂是参与宿主细胞抗病毒防御系统的多种酶中的一种。DAI 磷酸化翻译启始因子 eIF-2，终止翻译和蛋白的生成。但是，与 pAdVAntage™ 载体共转染过程中，DAI 的翻译抑制作用能被 RNA 聚合酶 III 产生的腺病毒相关 I 型 RNA（VAI RNA）抵消。VAI RNA 与 DAI 结合，阻止其激活，从而完成翻译和蛋白表达。
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 4392 bp ds-DNA circular SYN 15-JUL-2016
DEFINITION synthetic circular DNA
ACCESSION .
VERSION .
KEYWORDS pAdVAntage
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 4392)
AUTHORS .
TITLE Direct Submission
JOURNAL Exported Tuesday, August 30, 2016 from SnapGene Viewer 3.1.4
http://www.miaolingbio.com
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..4392
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
primer_bind complement(1743..1759)
/note="M13 rev"
/note="common sequencing primer, one of multiple similar
variants"
protein_bind 1767..1783
/bound_moiety="lac repressor encoded by lacI"
/note="lac operator"
/note="The lac repressor binds to the lac operator to
inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be
relieved by adding lactose or
isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG)."
promoter complement(1791..1821)
/note="lac promoter"
/note="promoter for the E. coli lac operon"
protein_bind 1836..1857
/bound_moiety="E. coli catabolite activator protein"
/note="CAP binding site"
/note="CAP binding activates transcription in the presence
of cAMP."
rep_origin complement(2145..2733)
/direction=LEFT
/note="ori"
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
CDS complement(2904..3764)
/codon_start=1
/gene="bla"
/product="beta-lactamase"
/note="AmpR"
/note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
related antibiotics"
/translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI
ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
LIKHW"
promoter complement(3765..3869)
/gene="bla"
/note="AmpR promoter"
primer_bind 4343..4359
/note="M13 fwd"
/note="common sequencing primer, one of multiple similar
variants"
ORIGIN
1 gtcgacagaa gcaccatgtc cttgggtccg gcctgctgaa tgcgcaggcg gtcggccatg
61 ccccaggctt cgttttgaca tcggcgcagg tctttgtagt agtcttgcat gagcctttct
121 accggcactt cttcttctcc ttcctcttgt cctgcatctc ttgcatctat cgctacggcg
181 gcggcggagt ttggccgtag gtggcgccct cttcctccca tgcgtgtgac cccgaagccc
241 ctcatcggct gaagcagggc caggtcggcg acaacgcgct cggctaatat ggcctgctgc
301 acctgcgtga gggtagactg gaagtcatcc atgtccacaa agcggtggta tgcgcccgtg
361 ttgatggtgt aagtgcagtt ggccataacg gaccagttaa cggtctggtg acccggctgc
421 gagagctcgg tgtacctgag acgcgagtaa gcccttgagt caaagacgta gtcgttgcaa
481 gtccgcacca ggtactgata tcccaccaaa aagtgcggcg gcggctggcg gtagaggggc
541 cagcgtaggg tggccggggc tccgggggcg aggtcttcca acataaggcg atgatatccg
601 tagatgtacc tggacatcca ggtgatgccg gcggcggtgg tggaggcgcg cggaaagtcg
661 cggacgcggt tccagatgtt gcgcagcggc aaaaagtgct ccatggtcgg gacgctctgg
721 ccggtgaggc gtgcgcagtc gttgacgctc tagaccgtgc aaaaggagag cctgtaagcg
781 ggcactcttc cgtggtctgg tggataaatt cgcaagggta tcatggcgga cgaccggggt
841 tcgaaccccg gatccggccg tccgccgtga tccatgcggt taccgcccgc gtgtcgaacc
901 caggtgtgcg acgtcagaca acgggggagc gctccttttg gcttccttcc aggcgcggcg
961 gctgctgcgc tagctttttt ggccactggc cgcgcgcggc gtaagcggtt aggctggaaa
1021 gcgaaagcat taagtggctc gctccctgta gccggagggt tattttccaa gggttgagtc
1081 gcaggacccc cggttcgagt ctcgggccgg ccggactgcg gcgaacgggg gtttgcctcc
1141 ccgtcatgca agaccccgct tgcaaattcc tccggaaaca gggacgagcc ccttttttgc
1201 ttttcccaga tgcatccggt gctgcggcag atgcgccccc ctcctcagca gcggcaagag
1261 caagagcagc ggcagacatg cagggcaccc tccccttctc ctaccgcgtc aggaggggca
1321 acatccgcgg ctgacgcggc ggcagatggt gattacgaac ccccgcggcg ccgggcccgg
1381 cactacctgg acttggagga gggcgagggc ctggcgcggc taggagcgcc ctctcctgag
1441 cgacacccaa gggtgcagct gaagcgtgac acgcgcgagg cgtacgtgcc gcggcagaac
1501 ctgtttcgcg accgcgaggg agaggagccc gaggagatgc gggatcgaaa gttccacgca
1561 gggcgcgagt tgcggcatgg cctgaaccgc gagcggttgc tgcgcgagga ggactttgag
1621 cccgacgcgc ggaccgggat tagtcccgcg cgcgcacacg tggcggccgc cgacctggta
1681 accgcgtacg agcagacggt gaaccaggag attaactttc aaaaaagctt ggcgtaatca
1741 tggtcatagc tgtttcctgt gtgaaattgt tatccgctca caattccaca caacatacga
1801 gccggaagca taaagtgtaa agcctggggt gcctaatgag tgagctaact cacattaatt
1861 gcgttgcgct cactgcccgc tttccagtcg ggaaacctgt cgtgccagct gcattaatga
1921 atcggccaac gcgcggggag aggcggtttg cgtattgggc gctcttccgc ttcctcgctc
1981 actgactcgc tgcgctcggt cgttcggctg cggcgagcgg tatcagctca ctcaaaggcg
2041 gtaatacggt tatccacaga atcaggggat aacgcaggaa agaacatgtg agcaaaaggc
2101 cagcaaaagg ccaggaaccg taaaaaggcc gcgttgctgg cgtttttcca taggctccgc
2161 ccccctgacg agcatcacaa aaatcgacgc tcaagtcaga ggtggcgaaa cccgacagga
2221 ctataaagat accaggcgtt tccccctgga agctccctcg tgcgctctcc tgttccgacc
2281 ctgccgctta ccggatacct gtccgccttt ctcccttcgg gaagcgtggc gctttctcat
2341 agctcacgct gtaggtatct cagttcggtg taggtcgttc gctccaagct gggctgtgtg
2401 cacgaacccc ccgttcagcc cgaccgctgc gccttatccg gtaactatcg tcttgagtcc
2461 aacccggtaa gacacgactt atcgccactg gcagcagcca ctggtaacag gattagcaga
2521 gcgaggtatg taggcggtgc tacagagttc ttgaagtggt ggcctaacta cggctacact
2581 agaagaacag tatttggtat ctgcgctctg ctgaagccag ttaccttcgg aaaaagagtt
2641 ggtagctctt gatccggcaa acaaaccacc gctggtagcg gtggtttttt tgtttgcaag
2701 cagcagatta cgcgcagaaa aaaaggatct caagaagatc ctttgatctt ttctacgggg
2761 tctgacgctc agtggaacga aaactcacgt taagggattt tggtcatgag attatcaaaa
2821 aggatcttca cctagatcct tttaaattaa aaatgaagtt ttaaatcaat ctaaagtata
2881 tatgagtaaa cttggtctga cagttaccaa tgcttaatca gtgaggcacc tatctcagcg
2941 atctgtctat ttcgttcatc catagttgcc tgactccccg tcgtgtagat aactacgata
3001 cgggagggct taccatctgg ccccagtgct gcaatgatac cgcgagaccc acgctcaccg
3061 gctccagatt tatcagcaat aaaccagcca gccggaaggg ccgagcgcag aagtggtcct
3121 gcaactttat ccgcctccat ccagtctatt aattgttgcc gggaagctag agtaagtagt
3181 tcgccagtta atagtttgcg caacgttgtt gccattgcta caggcatcgt ggtgtcacgc
3241 tcgtcgtttg gtatggcttc attcagctcc ggttcccaac gatcaaggcg agttacatga
3301 tcccccatgt tgtgcaaaaa agcggttagc tccttcggtc ctccgatcgt tgtcagaagt
3361 aagttggccg cagtgttatc actcatggtt atggcagcac tgcataattc tcttactgtc
3421 atgccatccg taagatgctt ttctgtgact ggtgagtact caaccaagtc attctgagaa
3481 tagtgtatgc ggcgaccgag ttgctcttgc ccggcgtcaa tacgggataa taccgcgcca
3541 catagcagaa ctttaaaagt gctcatcatt ggaaaacgtt cttcggggcg aaaactctca
3601 aggatcttac cgctgttgag atccagttcg atgtaaccca ctcgtgcacc caactgatct
3661 tcagcatctt ttactttcac cagcgtttct gggtgagcaa aaacaggaag gcaaaatgcc
3721 gcaaaaaagg gaataagggc gacacggaaa tgttgaatac tcatactctt cctttttcaa
3781 tattattgaa gcatttatca gggttattgt ctcatgagcg gatacatatt tgaatgtatt
3841 tagaaaaata aacaaatagg ggttccgcgc acatttcccc gaaaagtgcc acctgacgtc
3901 taagaaacca ttattatcat gacattaacc tataaaaata ggcgtatcac gaggcccttt
3961 cgtctcgcgc gtttcggtga tgacggtgaa aacctctgac acatgcagct cccggagacg
4021 gtcacagctt gtctgtaagc ggatgccggg agcagacaag cccgtcaggg cgcgtcagcg
4081 ggtgttggcg ggtgtcgggg ctggcttaac tatgcggcat cagagcagat tgtactgaga
4141 gtgcaccata tgcggtgtga aataccgcac agatgcgtaa ggagaaaata ccgcatcagg
4201 cgccattcgc cattcaggct gcgcaactgt tgggaagggc gatcggtgcg ggcctcttcg
4261 ctattacgcc agctggcgaa agggggatgt gctgcaaggc gattaagttg ggtaacgcca
4321 gggttttccc agtcacgacg ttgtaaaacg acggccagtg aattcgagct cggtacccgg
4381 ggatcctcta ga
//
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
名称：pAdVAntage哺乳辅助质粒
别称: pAdVAntage
| 复制子: | pUC |
|---|---|
| 质粒大小: | 4392bp |
| 克隆菌株: | DH5a |
| 培养条件: | 37度 |
| 表达宿主: | 哺乳细胞 |
| 诱导方式: | 无须诱导，瞬时表达 |
| 5'测序引物: | M13R:CAGGAAACAGCTATGACC |
| 3'测序引物: | 根据序列设计引物 |
质粒属性
| 载体宿主： | 哺乳细胞 |
|---|---|
| 载体用途： | 辅助包装 |
| 基因种属： | |
| 基因类型： | |
| 原核抗性： | Amp |
| 真核抗性： | |
| 荧光蛋白： |
质粒简介
使用 pAdVAntage™ 载体共转染哺乳动物细胞，可通过促进翻译起始来增强多种类型细胞中蛋白的瞬时表达。
用表达载体转染哺乳动物细胞经常导致目的蛋白的表达不理想。在转染过程中生成的双链 RNA（dsRNA）被认为可将 dsRNA- 激活的抑制剂（DAI）激活, 该抑制剂是参与宿主细胞抗病毒防御系统的多种酶中的一种。DAI 磷酸化翻译启始因子 eIF-2，终止翻译和蛋白的生成。但是，与 pAdVAntage™ 载体共转染过程中，DAI 的翻译抑制作用能被 RNA 聚合酶 III 产生的腺病毒相关 I 型 RNA（VAI RNA）抵消。VAI RNA 与 DAI 结合，阻止其激活，从而完成翻译和蛋白表达。
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 4392 bp ds-DNA circular SYN 15-JUL-2016
DEFINITION synthetic circular DNA
ACCESSION .
VERSION .
KEYWORDS pAdVAntage
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 4392)
AUTHORS .
TITLE Direct Submission
JOURNAL Exported Tuesday, August 30, 2016 from SnapGene Viewer 3.1.4
http://www.miaolingbio.com
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..4392
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
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/note="M13 rev"
/note="common sequencing primer, one of multiple similar
variants"
protein_bind 1767..1783
/bound_moiety="lac repressor encoded by lacI"
/note="lac operator"
/note="The lac repressor binds to the lac operator to
inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be
relieved by adding lactose or
isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG)."
promoter complement(1791..1821)
/note="lac promoter"
/note="promoter for the E. coli lac operon"
protein_bind 1836..1857
/bound_moiety="E. coli catabolite activator protein"
/note="CAP binding site"
/note="CAP binding activates transcription in the presence
of cAMP."
rep_origin complement(2145..2733)
/direction=LEFT
/note="ori"
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
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/product="beta-lactamase"
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/note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
related antibiotics"
/translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI
ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
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EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
LIKHW"
promoter complement(3765..3869)
/gene="bla"
/note="AmpR promoter"
primer_bind 4343..4359
/note="M13 fwd"
/note="common sequencing primer, one of multiple similar
variants"
ORIGIN
1 gtcgacagaa gcaccatgtc cttgggtccg gcctgctgaa tgcgcaggcg gtcggccatg
61 ccccaggctt cgttttgaca tcggcgcagg tctttgtagt agtcttgcat gagcctttct
121 accggcactt cttcttctcc ttcctcttgt cctgcatctc ttgcatctat cgctacggcg
181 gcggcggagt ttggccgtag gtggcgccct cttcctccca tgcgtgtgac cccgaagccc
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301 acctgcgtga gggtagactg gaagtcatcc atgtccacaa agcggtggta tgcgcccgtg
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481 gtccgcacca ggtactgata tcccaccaaa aagtgcggcg gcggctggcg gtagaggggc
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601 tagatgtacc tggacatcca ggtgatgccg gcggcggtgg tggaggcgcg cggaaagtcg
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721 ccggtgaggc gtgcgcagtc gttgacgctc tagaccgtgc aaaaggagag cctgtaagcg
781 ggcactcttc cgtggtctgg tggataaatt cgcaagggta tcatggcgga cgaccggggt
841 tcgaaccccg gatccggccg tccgccgtga tccatgcggt taccgcccgc gtgtcgaacc
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1081 gcaggacccc cggttcgagt ctcgggccgg ccggactgcg gcgaacgggg gtttgcctcc
1141 ccgtcatgca agaccccgct tgcaaattcc tccggaaaca gggacgagcc ccttttttgc
1201 ttttcccaga tgcatccggt gctgcggcag atgcgccccc ctcctcagca gcggcaagag
1261 caagagcagc ggcagacatg cagggcaccc tccccttctc ctaccgcgtc aggaggggca
1321 acatccgcgg ctgacgcggc ggcagatggt gattacgaac ccccgcggcg ccgggcccgg
1381 cactacctgg acttggagga gggcgagggc ctggcgcggc taggagcgcc ctctcctgag
1441 cgacacccaa gggtgcagct gaagcgtgac acgcgcgagg cgtacgtgcc gcggcagaac
1501 ctgtttcgcg accgcgaggg agaggagccc gaggagatgc gggatcgaaa gttccacgca
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1621 cccgacgcgc ggaccgggat tagtcccgcg cgcgcacacg tggcggccgc cgacctggta
1681 accgcgtacg agcagacggt gaaccaggag attaactttc aaaaaagctt ggcgtaatca
1741 tggtcatagc tgtttcctgt gtgaaattgt tatccgctca caattccaca caacatacga
1801 gccggaagca taaagtgtaa agcctggggt gcctaatgag tgagctaact cacattaatt
1861 gcgttgcgct cactgcccgc tttccagtcg ggaaacctgt cgtgccagct gcattaatga
1921 atcggccaac gcgcggggag aggcggtttg cgtattgggc gctcttccgc ttcctcgctc
1981 actgactcgc tgcgctcggt cgttcggctg cggcgagcgg tatcagctca ctcaaaggcg
2041 gtaatacggt tatccacaga atcaggggat aacgcaggaa agaacatgtg agcaaaaggc
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2221 ctataaagat accaggcgtt tccccctgga agctccctcg tgcgctctcc tgttccgacc
2281 ctgccgctta ccggatacct gtccgccttt ctcccttcgg gaagcgtggc gctttctcat
2341 agctcacgct gtaggtatct cagttcggtg taggtcgttc gctccaagct gggctgtgtg
2401 cacgaacccc ccgttcagcc cgaccgctgc gccttatccg gtaactatcg tcttgagtcc
2461 aacccggtaa gacacgactt atcgccactg gcagcagcca ctggtaacag gattagcaga
2521 gcgaggtatg taggcggtgc tacagagttc ttgaagtggt ggcctaacta cggctacact
2581 agaagaacag tatttggtat ctgcgctctg ctgaagccag ttaccttcgg aaaaagagtt
2641 ggtagctctt gatccggcaa acaaaccacc gctggtagcg gtggtttttt tgtttgcaag
2701 cagcagatta cgcgcagaaa aaaaggatct caagaagatc ctttgatctt ttctacgggg
2761 tctgacgctc agtggaacga aaactcacgt taagggattt tggtcatgag attatcaaaa
2821 aggatcttca cctagatcct tttaaattaa aaatgaagtt ttaaatcaat ctaaagtata
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3001 cgggagggct taccatctgg ccccagtgct gcaatgatac cgcgagaccc acgctcaccg
3061 gctccagatt tatcagcaat aaaccagcca gccggaaggg ccgagcgcag aagtggtcct
3121 gcaactttat ccgcctccat ccagtctatt aattgttgcc gggaagctag agtaagtagt
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3241 tcgtcgtttg gtatggcttc attcagctcc ggttcccaac gatcaaggcg agttacatga
3301 tcccccatgt tgtgcaaaaa agcggttagc tccttcggtc ctccgatcgt tgtcagaagt
3361 aagttggccg cagtgttatc actcatggtt atggcagcac tgcataattc tcttactgtc
3421 atgccatccg taagatgctt ttctgtgact ggtgagtact caaccaagtc attctgagaa
3481 tagtgtatgc ggcgaccgag ttgctcttgc ccggcgtcaa tacgggataa taccgcgcca
3541 catagcagaa ctttaaaagt gctcatcatt ggaaaacgtt cttcggggcg aaaactctca
3601 aggatcttac cgctgttgag atccagttcg atgtaaccca ctcgtgcacc caactgatct
3661 tcagcatctt ttactttcac cagcgtttct gggtgagcaa aaacaggaag gcaaaatgcc
3721 gcaaaaaagg gaataagggc gacacggaaa tgttgaatac tcatactctt cctttttcaa
3781 tattattgaa gcatttatca gggttattgt ctcatgagcg gatacatatt tgaatgtatt
3841 tagaaaaata aacaaatagg ggttccgcgc acatttcccc gaaaagtgcc acctgacgtc
3901 taagaaacca ttattatcat gacattaacc tataaaaata ggcgtatcac gaggcccttt
3961 cgtctcgcgc gtttcggtga tgacggtgaa aacctctgac acatgcagct cccggagacg
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4201 cgccattcgc cattcaggct gcgcaactgt tgggaagggc gatcggtgcg ggcctcttcg
4261 ctattacgcc agctggcgaa agggggatgt gctgcaaggc gattaagttg ggtaacgcca
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质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P1943/pENTR223-FAD104人源基因质粒 |
| P1944/pENTR223-XAGE1A人源基因质粒 |
| P1945/pENTR223-PMS1-T477N人源基因质粒 |
| P1946/pENTR223-REG1A人源基因质粒 |
| P1947/pENTR223-IL20RB(427-936)人源基因质粒 |
| P1948/pENTR223-TMEM208人源基因质粒 |
| P1949/pENTR223-DPYD人源基因质粒 |
| P1950/pENTR223-ABHD4人源基因质粒 |
| P1951/pENTR223-SDHC-T491A-G499A人源基因质粒 |
| P1952/pENTR223-TRNAU1AP(331-864)人源基因质粒 |
| P1953/pENTR223-HMGN3-G221C人源基因质粒 |
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文献和实验相关实验
相关专题体外基因表达体外基因表达系统包括原核细胞系统和真核细胞系统。原核细胞系统主要是大肠杆菌细胞，它操作简便、周期短收益大及表达产物稳定，但是表达基因的相对分子质量有限，不宜过大，且不能对表达产物进行一些翻译后加工 、修饰。真核细胞系统包括 CHO等哺乳动物细胞、酵母细胞和昆虫细胞等。昆虫细胞表达系统(即杆状病毒表达系统)具有独特的生物学特性，日益受到人们的重视。1、杆状病毒的生物学特性 杆状病毒只来源于无脊椎动物，虽然已发现600多种杆状病毒，但进行分子生物学研究的不到20种。杆状
pAdVAntage哺乳辅助质粒
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