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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件:
-20
- 保质期:
2年
- 英文名:
Plasmid#35102
- 库存:
100
- 供应商:
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格:
干粉/液体
名称:pPH37酵母基因质粒
别称: Plasmid#35102
启动子:TEF
复制子: pUC
终止子: TEF terminator
质粒分类: 基因文库质粒;其它基因质粒;其它种源质粒
质粒大小:3612bp
原核抗性: Amp
克隆菌株: DH5a
培养条件: 37度
质粒属性
载体宿主:酵母菌
载体用途:基因敲除
基因种属:酵母
基因类型:ORF
原核抗性:Amp
真核抗性:
荧光蛋白:
质粒简介
pPH37质粒提供了fcy1MX4基因的表达框模块,其参考文献:Cytosine deaminase MX cassettes as positive/negative selectable markers in Saccharomyces cerevisiae.
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 3612 bp ds-DNA circular SYN 15-AUG-2017
DEFINITION synthetic circular DNA
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..3612
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
promoter 115..458
/label=TEF promoter
/note="Ashbya gossypii TEF promoter"
CDS 459..935
/codon_start=1
/label=fcy1MX4
/note="Gene/Insert name:fcy1MX4
Alt name:cytosine deaminase
Species:S. cerevisiae (budding yeast)"
/translation="MVTGGMASKWDQKGMDIAYEEAALGYKEGGVPIGGCLINNKDGSV
LGRGHNMRFQKGSATLHGEISTLENCGRLEGKVYKDTTLYTTLSPCDMCTGAIIMYGIP
RCVVGENVNFKSKGEKYLQTRGHEVVVVDDERCKKIMKQFIDERPQDWFEDIGE"
terminator 941..1138
/label=TEF terminator
/note="Ashbya gossypii TEF terminator"
promoter complement(1250..1268)
/label=T7 promoter
/note="promoter for bacteriophage T7 RNA polymerase"
rep_origin complement(1526..2114)
/direction=LEFT
/label=ori
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
CDS complement(2285..3145)
/codon_start=1
/gene="bla"
/product="beta-lactamase"
/label=AmpR
/note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
related antibiotics"
/translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI
ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
LIKHW"
promoter complement(3146..3250)
/gene="bla"
/label=AmpR promoter
ORIGIN
1 gaacgcggcc gccagctgaa gcttcgtacg ctgcaggtcg acggatcccc gggttaatta
61 aggcgcgcca gatctgttta gcttgcctcg tccccgccgg gtcacccggc cagcgacatg
121 gaggcccaga ataccctcct tgacagtctt gacgtgcgca gctcaggggc atgatgtgac
181 tgtcgcccgt acatttagcc catacatccc catgtataat catttgcatc catacatttt
241 gatggccgca cggcgcgaag caaaaattac ggctcctcgc tgcagacctg cgagcaggga
301 aacgctcccc tcacagacgc gttgaattgt ccccacgccg cgcccctgta gagaaatata
361 aaaggttagg atttgccact gaggttcttc tttcatatac ttccttttaa aatcttgcta
421 ggatacagtt ctcacatcac atccgaacat aaacaaccat ggtgacaggg ggaatggcaa
481 gcaagtggga tcagaagggt atggacattg cctatgagga ggcggcctta ggttacaaag
541 agggtggtgt tcctattggc ggatgtctta tcaataacaa agacggaagt gttctcggtc
601 gtggtcacaa catgagattt caaaagggat ccgccacact acatggtgag atctccactt
661 tggaaaactg tgggagatta gagggcaaag tgtacaaaga taccactttg tatacgacgc
721 tgtctccatg cgacatgtgt acaggtgcca tcatcatgta tggtattcca cgctgtgttg
781 tcggtgagaa cgttaatttc aaaagtaagg gcgagaaata tttacaaact agaggtcacg
841 aggttgttgt tgttgacgat gagaggtgta aaaagatcat gaaacaattt atcgatgaaa
901 gacctcagga ttggtttgaa gatattggtg agtagtcagt actgacaata aaaagattct
961 tgttttcaag aacttgtcat ttgtatagtt tttttatatt gtagttgttc tattttaatc
1021 aaatgttagc gtgatttata ttttttttcg cctcgacatc atctgcccag atgcgaagtt
1081 aagtgcgcag aaagtaatat catgcgtcaa tcgtatgtga atgctggtcg ctatactgct
1141 gtcgattcga tactaacgcc gccatccagt gtcgagttta aacgagctcg aattcatcga
1201 tgatatcaga tccactagtg gcctatgcgg ccgcggatct gccggtctcc ctatagtgag
1261 tcgtattaat ttcgataagc caggttaacc tgcattaatg aatcggccaa cgcgcgggga
1321 gaggcggttt gcgtattggg cgctcttccg cttcctcgct cactgactcg ctgcgctcgg
1381 tcgttcggct gcggcgagcg gtatcagctc actcaaaggc ggtaatacgg ttatccacag
1441 aatcagggga taacgcagga aagaacatgt gagcaaaagg ccagcaaaag gccaggaacc
1501 gtaaaaaggc cgcgttgctg gcgtttttcc ataggctccg cccccctgac gagcatcaca
1561 aaaatcgacg ctcaagtcag aggtggcgaa acccgacagg actataaaga taccaggcgt
1621 ttccccctgg aagctccctc gtgcgctctc ctgttccgac cctgccgctt accggatacc
1681 tgtccgcctt tctcccttcg ggaagcgtgg cgctttctca atgctcacgc tgtaggtatc
1741 tcagttcggt gtaggtcgtt cgctccaagc tgggctgtgt gcacgaaccc cccgttcagc
1801 ccgaccgctg cgccttatcc ggtaactatc gtcttgagtc caacccggta agacacgact
1861 tatcgccact ggcagcagcc actggtaaca ggattagcag agcgaggtat gtaggcggtg
1921 ctacagagtt cttgaagtgg tggcctaact acggctacac tagaaggaca gtatttggta
1981 tctgcgctct gctgaagcca gttaccttcg gaaaaagagt tggtagctct tgatccggca
2041 aacaaaccac cgctggtagc ggtggttttt ttgtttgcaa gcagcagatt acgcgcagaa
2101 aaaaaggatc tcaagaagat cctttgatct tttctacggg gtctgacgct cagtggaacg
2161 aaaactcacg ttaagggatt ttggtcatga gattatcaaa aaggatcttc acctagatcc
2221 ttttaaatta aaaatgaagt tttaaatcaa tctaaagtat atatgagtaa acttggtctg
2281 acagttacca atgcttaatc agtgaggcac ctatctcagc gatctgtcta tttcgttcat
2341 ccatagttgc ctgactcccc gtcgtgtaga taactacgat acgggagggc ttaccatctg
2401 gccccagtgc tgcaatgata ccgcgagacc cacgctcacc ggctccagat ttatcagcaa
2461 taaaccagcc agccggaagg gccgagcgca gaagtggtcc tgcaacttta tccgcctcca
2521 tccagtctat taattgttgc cgggaagcta gagtaagtag ttcgccagtt aatagtttgc
2581 gcaacgttgt tgccattgct acaggcatcg tggtgtcacg ctcgtcgttt ggtatggctt
2641 cattcagctc cggttcccaa cgatcaaggc gagttacatg atcccccatg ttgtgcaaaa
2701 aagcggttag ctccttcggt cctccgatcg ttgtcagaag taagttggcc gcagtgttat
2761 cactcatggt tatggcagca ctgcataatt ctcttactgt catgccatcc gtaagatgct
2821 tttctgtgac tggtgagtac tcaaccaagt cattctgaga atagtgtatg cggcgaccga
2881 gttgctcttg cccggcgtca atacgggata ataccgcgcc acatagcaga actttaaaag
2941 tgctcatcat tggaaaacgt tcttcggggc gaaaactctc aaggatctta ccgctgttga
3001 gatccagttc gatgtaaccc actcgtgcac ccaactgatc ttcagcatct tttactttca
3061 ccagcgtttc tgggtgagca aaaacaggaa ggcaaaatgc cgcaaaaaag ggaataaggg
3121 cgacacggaa atgttgaata ctcatactct tcctttttca atattattga agcatttatc
3181 agggttattg tctcatgagc ggatacatat ttgaatgtat ttagaaaaat aaacaaatag
3241 gggttccgcg cacatttccc cgaaaagtgc cacctgacgt ctaagaaacc attattatca
3301 tgacattaac ctataaaaat aggcgtatca cgaggccctt tcgtctcgcg cgtttcggtg
3361 atgacggtga aaacctctga cacatgcagc tcccggagac ggtcacagct tgtctgtaag
3421 cggatgccgg gagcagacaa gcccgtcagg gcgcgtcagc gggtgttggc gggtgtcggg
3481 gctggcttaa ctatgcggca tcagagcaga ttgtactgag agtgcaccat atggacatat
3541 tgtcgttaga acgcggctac aattaataca taaccttatg tatcatacac atacgattta
3601 ggtgacacta ta
//
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后,请先根据产品管壁标签来判断产品形式,并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉(常温运输,存于-20度,90天保质期,请务必转化挑单克隆培养,不要直接使用和测序)
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min,再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒;
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min,加入2μl质粒,再冰浴30min后,42℃热激60s,不要搅动,再冰浴2min;(从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作)
③加入900μl无抗的LB液体培养基,180rpm震荡37℃培养45min;
④6000rpm离心5min,仅留100μl上清液重悬细菌沉淀,并涂布至目标质粒抗性的LB平板上;(可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布,可以比传统涂布方法获得更多转化子)
⑤将平板正向培养1h,再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h;
(菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态,要先转克隆感受态,重提质粒后再导入表达感受态)
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中,加入对应抗生素,220rpm震荡培养14h,根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种(冰袋运输,存于-80℃,保质期90天,请务必划线挑单克隆培养)
四区划线后挑单菌落培养,酵母菌需要先液体复苏再四区划线,再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种(冰袋运输,存于4℃,保质期7天)
穿刺接种,液体培养后四区划线,再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板(冰袋运输,存于4℃,保质期7天)
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒(冰袋运输,存于-20℃,保质期90天)
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒(常温运输,存于-20度,90天保质期,请务必转化挑单克隆培养,不要直接使用和测序)
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中,加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min,吸取5ul质粒转化,离心全涂。
二、转化图片
| P3679/pCMV-SPORT6-TRAPPC2L人源基因质粒 |
| P3680/pCMV-SPORT6-CBFB人源基因质粒 |
| P3681/pCMV-SPORT6-MLX(1同义突变)人源基因质粒 |
| P3682/pCMV-SPORT6-GOSR2人源基因质粒 |
| P3683/pCMV-SPORT6-LRRFIP1人源基因质粒 |
| P3684/pCMV-SPORT6-NT5C人源基因质粒 |
| P3685/pCMV-SPORT6-CENPN人源基因质粒 |
| P3686/pCMV-SPORT6-ACOT13人源基因质粒 |
| P3687/pCMV-SPORT6-TMEM80人源基因质粒 |
| P3688/pCMV-SPORT6-MTO1(1同义突变)人源基因质粒 |
| P3689/pCMV-SPORT6-TMEM231人源基因质粒 |
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文献和实验。对低拷贝数质粒,提取时可加大菌体用量并加倍使用溶液P1、P2 和 P3,可以有助于增加质粒提取量和提高质粒质量。 13. 溶液使用不当: 溶液 P2、P3 在温度较低时可能出现浑浊,应置于 37℃ 保温片刻直至溶解为清亮的溶液,才能使用。 14. 吸附柱过载: 不同产品中吸附柱吸附能力不同,如果需要提取的质粒量很大,请分多次提取。若用富集培养基,例如 TB 或 2×YT,菌液体积必须减少;若质粒是非常高的拷贝数或宿主菌具有很高的生长率,则需减少 LB 培养液体积。 15. 质粒未全部溶解
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