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-20
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2年
- 英文名：
pT2/Venus
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
基本信息
名称：pT2-Venus哺乳转座质粒
别称: pT2/Venus
质粒属性
质粒简介
pT2-Venus质粒由上海烜雅生物科技有限公司提供
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 6123 bp ds-DNA circular SYN 29-AUG-2016
DEFINITION synthetic circular DNA
ACCESSION .
VERSION .
KEYWORDS pT2VENUS
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 6123)
AUTHORS .
TITLE Direct Submission
JOURNAL Exported Monday, August 29, 2016 from SnapGene Viewer 3.1.4
http://www.miaolingbio.com
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..6123
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
promoter complement(61..79)
/note="T3 promoter"
/note="promoter for bacteriophage T3 RNA polymerase"
primer_bind complement(100..116)
/note="M13 rev"
/note="common sequencing primer, one of multiple similar
variants"
protein_bind 124..140
/bound_moiety="lac repressor encoded by lacI"
/note="lac operator"
/note="The lac repressor binds to the lac operator to
inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be
relieved by adding lactose or
isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG)."
promoter complement(148..178)
/note="lac promoter"
/note="promoter for the E. coli lac operon"
protein_bind 193..214
/bound_moiety="E. coli catabolite activator protein"
/note="CAP binding site"
/note="CAP binding activates transcription in the presence
of cAMP."
rep_origin complement(502..1090)
/direction=LEFT
/note="ori"
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
CDS complement(1261..2121)
/codon_start=1
/gene="bla"
/product="beta-lactamase"
/note="AmpR"
/note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
related antibiotics"
/translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI
ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
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LIKHW"
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/gene="bla"
/note="AmpR promoter"
rep_origin 2253..2708
/direction=RIGHT
/note="f1 ori"
/note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow
indicates direction of (+) strand synthesis"
primer_bind 2849..2865
/note="M13 fwd"
/note="common sequencing primer, one of multiple similar
variants"
promoter 2875..2893
/note="T7 promoter"
/note="promoter for bacteriophage T7 RNA polymerase"
polyA_signal 3295..3416
/note="SV40 poly(A) signal"
/note="SV40 polyadenylation signal"
intron 4169..5177
/note="chimeric intron"
/note="chimera between introns from chicken beta-actin and
rabbit beta-globin"
promoter complement(5178..5453)
/note="chicken beta-actin promoter"
enhancer 5456..5759
/note="CMV enhancer"
/note="human cytomegalovirus immediate early enhancer"
ORIGIN
1 gggatcctct agctagagtc gacctcgatc gagggggggc ccggtaccca gcttttgttc
61 cctttagtga gggttaattt cgagcttggc gtaatcatgg tcatagctgt ttcctgtgtg
121 aaattgttat ccgctcacaa ttccacacaa catacgagcc ggaagcataa agtgtaaagc
181 ctggggtgcc taatgagtga gctaactcac attaattgcg ttgcgctcac tgcccgcttt
241 ccagtcggga aacctgtcgt gccagctgca ttaatgaatc ggccaacgcg cggggagagg
301 cggtttgcgt attgggcgct cttccgcttc ctcgctcact gactcgctgc gctcggtcgt
361 tcggctgcgg cgagcggtat cagctcactc aaaggcggta atacggttat ccacagaatc
421 aggggataac gcaggaaaga acatgtgagc aaaaggccag caaaaggcca ggaaccgtaa
481 aaaggccgcg ttgctggcgt ttttccatag gctccgcccc cctgacgagc atcacaaaaa
541 tcgacgctca agtcagaggt ggcgaaaccc gacaggacta taaagatacc aggcgtttcc
601 ccctggaagc tccctcgtgc gctctcctgt tccgaccctg ccgcttaccg gatacctgtc
661 cgcctttctc ccttcgggaa gcgtggcgct ttctcatagc tcacgctgta ggtatctcag
721 ttcggtgtag gtcgttcgct ccaagctggg ctgtgtgcac gaaccccccg ttcagcccga
781 ccgctgcgcc ttatccggta actatcgtct tgagtccaac ccggtaagac acgacttatc
841 gccactggca gcagccactg gtaacaggat tagcagagcg aggtatgtag gcggtgctac
901 agagttcttg aagtggtggc ctaactacgg ctacactaga aggacagtat ttggtatctg
961 cgctctgctg aagccagtta ccttcggaaa aagagttggt agctcttgat ccggcaaaca
1021 aaccaccgct ggtagcggtg gtttttttgt ttgcaagcag cagattacgc gcagaaaaaa
1081 aggatctcaa gaagatcctt tgatcttttc tacggggtct gacgctcagt ggaacgaaaa
1141 ctcacgttaa gggattttgg tcatgagatt atcaaaaagg atcttcacct agatcctttt
1201 aaattaaaaa tgaagtttta aatcaatcta aagtatatat gagtaaactt ggtctgacag
1261 ttaccaatgc ttaatcagtg aggcacctat ctcagcgatc tgtctatttc gttcatccat
1321 agttgcctga ctccccgtcg tgtagataac tacgatacgg gagggcttac catctggccc
1381 cagtgctgca atgataccgc gagacccacg ctcaccggct ccagatttat cagcaataaa
1441 ccagccagcc ggaagggccg agcgcagaag tggtcctgca actttatccg cctccatcca
1501 gtctattaat tgttgccggg aagctagagt aagtagttcg ccagttaata gtttgcgcaa
1561 cgttgttgcc attgctacag gcatcgtggt gtcacgctcg tcgtttggta tggcttcatt
1621 cagctccggt tcccaacgat caaggcgagt tacatgatcc cccatgttgt gcaaaaaagc
1681 ggttagctcc ttcggtcctc cgatcgttgt cagaagtaag ttggccgcag tgttatcact
1741 catggttatg gcagcactgc ataattctct tactgtcatg ccatccgtaa gatgcttttc
1801 tgtgactggt gagtactcaa ccaagtcatt ctgagaatag tgtatgcggc gaccgagttg
1861 ctcttgcccg gcgtcaatac gggataatac cgcgccacat agcagaactt taaaagtgct
1921 catcattgga aaacgttctt cggggcgaaa actctcaagg atcttaccgc tgttgagatc
1981 cagttcgatg taacccactc gtgcacccaa ctgatcttca gcatctttta ctttcaccag
2041 cgtttctggg tgagcaaaaa caggaaggca aaatgccgca aaaaagggaa taagggcgac
2101 acggaaatgt tgaatactca tactcttcct ttttcaatat tattgaagca tttatcaggg
2161 ttattgtctc atgagcggat acatatttga atgtatttag aaaaataaac aaataggggt
2221 tccgcgcaca tttccccgaa aagtgccacc tgacgcgccc tgtagcggcg cattaagcgc
2281 ggcgggtgtg gtggttacgc gcagcgtgac cgctacactt gccagcgccc tagcgcccgc
2341 tcctttcgct ttcttccctt cctttctcgc cacgttcgcc ggctttcccc gtcaagctct
2401 aaatcggggg ctccctttag ggttccgatt tagtgcttta cggcacctcg accccaaaaa
2461 acttgattag ggtgatggtt cacgtagtgg gccatcgccc tgatagacgg tttttcgccc
2521 tttgacgttg gagtccacgt tctttaatag tggactcttg ttccaaactg gaacaacact
2581 caaccctatc tcggtctatt cttttgattt ataagggatt ttgccgattt cggcctattg
2641 gttaaaaaat gagctgattt aacaaaaatt taacgcgaat tttaacaaaa tattaacgct
2701 tacaatttcc attcgccatt caggctgcgc aactgttggg aagggcgatc ggtgcgggcc
2761 tcttcgctat tacgccagct ggcgaaaggg ggatgtgctg caaggcgatt aagttgggta
2821 acgccagggt tttcccagtc acgacgttgt aaaacgacgg ccagtgagcg cgcgtaatac
2881 gactcactat agggcgaatt ggagctcgga tccctataca gttgaagtcg gaagtttaca
2941 tacacttaag ttggagtcat taaaactcgt ttttcaacta ctccacaaat ttcttgttaa
3001 caaacaatag ttttggcaag tcagttagga catctacttt gtgcatgaca caagtcattt
3061 ttccaacaat tgtttacaga cagattattt cacttataat tcactgtatc acaattccag
3121 tgggtcagaa gtttacatac actaagttga ctgtgccttt aaacagcttg gaaaattcca
3181 gaaaatgatg tcatggcttt agaagctcta gtcgtgctag ctggacgcac tcgaggattt
3241 aacaaaaatt taacgcgaat tttaacaaaa tattaacgct tacaatttac gcgttaagat
3301 acattgatga gtttggacaa accacaacta gaatgcagtg aaaaaaatgc tttatttgtg
3361 aaatttgtga tgctattgct ttatttgtaa ccattataag ctgcaataaa caagttaaca
3421 acggccgctc acttgtacag ctcgtccatg cccagggtga tgccggcggc ggtcacgaac
3481 tccagcagca ccatgtggtc cctcttctcg ttagggtcct tgctcagggc gctctggtag
3541 ctcaggtagt ggttgtcggg cagcagcacg gggccgtcgc cgatgggggt gttctgctgg
3601 tagtggtcgg ccagctgcac gccgccgtcc tcgatgttgt gcctgatctt gaagttggcc
3661 ttgatgccgt tcttctgctt gtcggcggtg atgtacacgt tgtggctgtt gtagttgtac
3721 tccagcttgt ggcccaggat gttgccgtcc tccttgaagt cgatgccctt cagctcgatt
3781 ctgttcacca gggtgtcgcc ctcgaacttc acctcggctc tggtcttgta gttgccgtcg
3841 tccttgaaga agatggttct ctcctgcacg tagccctcag gcatggcgga cttgaagaag
3901 tcgtgctgct tcatgtggtc ggggtatctg gcgaagcact gcaggccgta gcccagggtg
3961 gtcaccaggg taggccaggg cacaggcagc ttgccggtgg tgcagatcag cttcagggtc
4021 agcttgccgt aggtggcgtc gccctcgccc tcgccgctca cggagaactt gtggccgttc
4081 acgtcgccgt ccagctccac caggatgggc accacgccgg tgaacagctc ctcgcccttg
4141 gacaccatgg tctagattaa ttaaggatct gtaggaaaaa gaagaaggca tgaacatggt
4201 tagcagaggc tctagagccg ccggtcacac gccagaagcc gaaccccgcc ctgccccgtc
4261 ccccccgaag gcagccgtcc ccctgcggca gccccgaggc tggagatgga gaaggggacg
4321 gcggcgcggc gacgcacgaa ggccctcccc gcccatttcc ttcctgccgg cgccgcaccg
4381 cttcgcccgc gcccgctaga gggggtgcgg cggcgcctcc cagatttcgg ctccgccaga
4441 tttgggacaa aggaagtccc tgcgccctct cgcacgatta ccataaaagg caatggctgc
4501 ggctcgccgc gcctcgacag ccgccggcgc tccggggccg ccgcgcccct cccccgagcc
4561 ctccccggcc cgaggcggcc ccgccccgcc cggcaccccc acctgccgcc accccccgcc
4621 cggcacggcg agccccgcgc cacgccccgc acggagcccc gcacccgaag ccgggccgtg
4681 ctcagcaact cggggagggg ggtgcagggg ggggttacag cccgaccgcc gcgcccacac
4741 cccctgctca cccccccacg cacacacccc gcacgcagcc tttgttcccc tcgcagcccc
4801 cccgcaccgc ggggcaccgc ccccggccgc gctcccctcg cgcacacgcg gagcgcacaa
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5281 ctccgcctcg ccccgccccg cccctcgccc cgccccgccc cgcctggcgc gcgccccccc
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6061 tgaaaaagtg agtttaaatg tatttggcta aggtgtatgt aaacttccga cttcaactgt
6121 ata
//
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
名称：pT2-Venus哺乳转座质粒
别称: pT2/Venus
| 启动子: | CAG |
|---|---|
| 复制子: | pUC |
| 终止子: | SV40 poly(A) signal |
| 质粒分类: | 哺乳细胞，蛋白过表达载体 |
| 质粒大小: | 6123bp |
| 原核抗性: | Amp |
| 克隆菌株: | DH5a |
| 培养条件: | 37度 |
| 表达宿主: | 哺乳细胞 |
| 诱导方式: | 无须诱导，瞬时表达 |
| 5'测序引物: | 根据序列设计引物 |
| 3'测序引物: | 根据序列设计引物 |
质粒属性
| 载体宿主： | 哺乳细胞 |
|---|---|
| 载体用途： | 蛋白表达,转座 |
| 基因种属： | |
| 基因类型： | ORF |
| 原核抗性： | Amp |
| 真核抗性： | |
| 荧光蛋白： |
质粒简介
pT2-Venus质粒由上海烜雅生物科技有限公司提供
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 6123 bp ds-DNA circular SYN 29-AUG-2016
DEFINITION synthetic circular DNA
ACCESSION .
VERSION .
KEYWORDS pT2VENUS
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 6123)
AUTHORS .
TITLE Direct Submission
JOURNAL Exported Monday, August 29, 2016 from SnapGene Viewer 3.1.4
http://www.miaolingbio.com
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..6123
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
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/note="promoter for bacteriophage T3 RNA polymerase"
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/note="M13 rev"
/note="common sequencing primer, one of multiple similar
variants"
protein_bind 124..140
/bound_moiety="lac repressor encoded by lacI"
/note="lac operator"
/note="The lac repressor binds to the lac operator to
inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be
relieved by adding lactose or
isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG)."
promoter complement(148..178)
/note="lac promoter"
/note="promoter for the E. coli lac operon"
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/bound_moiety="E. coli catabolite activator protein"
/note="CAP binding site"
/note="CAP binding activates transcription in the presence
of cAMP."
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replication"
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PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
LIKHW"
promoter complement(2122..2226)
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/note="AmpR promoter"
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/direction=RIGHT
/note="f1 ori"
/note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow
indicates direction of (+) strand synthesis"
primer_bind 2849..2865
/note="M13 fwd"
/note="common sequencing primer, one of multiple similar
variants"
promoter 2875..2893
/note="T7 promoter"
/note="promoter for bacteriophage T7 RNA polymerase"
polyA_signal 3295..3416
/note="SV40 poly(A) signal"
/note="SV40 polyadenylation signal"
intron 4169..5177
/note="chimeric intron"
/note="chimera between introns from chicken beta-actin and
rabbit beta-globin"
promoter complement(5178..5453)
/note="chicken beta-actin promoter"
enhancer 5456..5759
/note="CMV enhancer"
/note="human cytomegalovirus immediate early enhancer"
ORIGIN
1 gggatcctct agctagagtc gacctcgatc gagggggggc ccggtaccca gcttttgttc
61 cctttagtga gggttaattt cgagcttggc gtaatcatgg tcatagctgt ttcctgtgtg
121 aaattgttat ccgctcacaa ttccacacaa catacgagcc ggaagcataa agtgtaaagc
181 ctggggtgcc taatgagtga gctaactcac attaattgcg ttgcgctcac tgcccgcttt
241 ccagtcggga aacctgtcgt gccagctgca ttaatgaatc ggccaacgcg cggggagagg
301 cggtttgcgt attgggcgct cttccgcttc ctcgctcact gactcgctgc gctcggtcgt
361 tcggctgcgg cgagcggtat cagctcactc aaaggcggta atacggttat ccacagaatc
421 aggggataac gcaggaaaga acatgtgagc aaaaggccag caaaaggcca ggaaccgtaa
481 aaaggccgcg ttgctggcgt ttttccatag gctccgcccc cctgacgagc atcacaaaaa
541 tcgacgctca agtcagaggt ggcgaaaccc gacaggacta taaagatacc aggcgtttcc
601 ccctggaagc tccctcgtgc gctctcctgt tccgaccctg ccgcttaccg gatacctgtc
661 cgcctttctc ccttcgggaa gcgtggcgct ttctcatagc tcacgctgta ggtatctcag
721 ttcggtgtag gtcgttcgct ccaagctggg ctgtgtgcac gaaccccccg ttcagcccga
781 ccgctgcgcc ttatccggta actatcgtct tgagtccaac ccggtaagac acgacttatc
841 gccactggca gcagccactg gtaacaggat tagcagagcg aggtatgtag gcggtgctac
901 agagttcttg aagtggtggc ctaactacgg ctacactaga aggacagtat ttggtatctg
961 cgctctgctg aagccagtta ccttcggaaa aagagttggt agctcttgat ccggcaaaca
1021 aaccaccgct ggtagcggtg gtttttttgt ttgcaagcag cagattacgc gcagaaaaaa
1081 aggatctcaa gaagatcctt tgatcttttc tacggggtct gacgctcagt ggaacgaaaa
1141 ctcacgttaa gggattttgg tcatgagatt atcaaaaagg atcttcacct agatcctttt
1201 aaattaaaaa tgaagtttta aatcaatcta aagtatatat gagtaaactt ggtctgacag
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1621 cagctccggt tcccaacgat caaggcgagt tacatgatcc cccatgttgt gcaaaaaagc
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1741 catggttatg gcagcactgc ataattctct tactgtcatg ccatccgtaa gatgcttttc
1801 tgtgactggt gagtactcaa ccaagtcatt ctgagaatag tgtatgcggc gaccgagttg
1861 ctcttgcccg gcgtcaatac gggataatac cgcgccacat agcagaactt taaaagtgct
1921 catcattgga aaacgttctt cggggcgaaa actctcaagg atcttaccgc tgttgagatc
1981 cagttcgatg taacccactc gtgcacccaa ctgatcttca gcatctttta ctttcaccag
2041 cgtttctggg tgagcaaaaa caggaaggca aaatgccgca aaaaagggaa taagggcgac
2101 acggaaatgt tgaatactca tactcttcct ttttcaatat tattgaagca tttatcaggg
2161 ttattgtctc atgagcggat acatatttga atgtatttag aaaaataaac aaataggggt
2221 tccgcgcaca tttccccgaa aagtgccacc tgacgcgccc tgtagcggcg cattaagcgc
2281 ggcgggtgtg gtggttacgc gcagcgtgac cgctacactt gccagcgccc tagcgcccgc
2341 tcctttcgct ttcttccctt cctttctcgc cacgttcgcc ggctttcccc gtcaagctct
2401 aaatcggggg ctccctttag ggttccgatt tagtgcttta cggcacctcg accccaaaaa
2461 acttgattag ggtgatggtt cacgtagtgg gccatcgccc tgatagacgg tttttcgccc
2521 tttgacgttg gagtccacgt tctttaatag tggactcttg ttccaaactg gaacaacact
2581 caaccctatc tcggtctatt cttttgattt ataagggatt ttgccgattt cggcctattg
2641 gttaaaaaat gagctgattt aacaaaaatt taacgcgaat tttaacaaaa tattaacgct
2701 tacaatttcc attcgccatt caggctgcgc aactgttggg aagggcgatc ggtgcgggcc
2761 tcttcgctat tacgccagct ggcgaaaggg ggatgtgctg caaggcgatt aagttgggta
2821 acgccagggt tttcccagtc acgacgttgt aaaacgacgg ccagtgagcg cgcgtaatac
2881 gactcactat agggcgaatt ggagctcgga tccctataca gttgaagtcg gaagtttaca
2941 tacacttaag ttggagtcat taaaactcgt ttttcaacta ctccacaaat ttcttgttaa
3001 caaacaatag ttttggcaag tcagttagga catctacttt gtgcatgaca caagtcattt
3061 ttccaacaat tgtttacaga cagattattt cacttataat tcactgtatc acaattccag
3121 tgggtcagaa gtttacatac actaagttga ctgtgccttt aaacagcttg gaaaattcca
3181 gaaaatgatg tcatggcttt agaagctcta gtcgtgctag ctggacgcac tcgaggattt
3241 aacaaaaatt taacgcgaat tttaacaaaa tattaacgct tacaatttac gcgttaagat
3301 acattgatga gtttggacaa accacaacta gaatgcagtg aaaaaaatgc tttatttgtg
3361 aaatttgtga tgctattgct ttatttgtaa ccattataag ctgcaataaa caagttaaca
3421 acggccgctc acttgtacag ctcgtccatg cccagggtga tgccggcggc ggtcacgaac
3481 tccagcagca ccatgtggtc cctcttctcg ttagggtcct tgctcagggc gctctggtag
3541 ctcaggtagt ggttgtcggg cagcagcacg gggccgtcgc cgatgggggt gttctgctgg
3601 tagtggtcgg ccagctgcac gccgccgtcc tcgatgttgt gcctgatctt gaagttggcc
3661 ttgatgccgt tcttctgctt gtcggcggtg atgtacacgt tgtggctgtt gtagttgtac
3721 tccagcttgt ggcccaggat gttgccgtcc tccttgaagt cgatgccctt cagctcgatt
3781 ctgttcacca gggtgtcgcc ctcgaacttc acctcggctc tggtcttgta gttgccgtcg
3841 tccttgaaga agatggttct ctcctgcacg tagccctcag gcatggcgga cttgaagaag
3901 tcgtgctgct tcatgtggtc ggggtatctg gcgaagcact gcaggccgta gcccagggtg
3961 gtcaccaggg taggccaggg cacaggcagc ttgccggtgg tgcagatcag cttcagggtc
4021 agcttgccgt aggtggcgtc gccctcgccc tcgccgctca cggagaactt gtggccgttc
4081 acgtcgccgt ccagctccac caggatgggc accacgccgg tgaacagctc ctcgcccttg
4141 gacaccatgg tctagattaa ttaaggatct gtaggaaaaa gaagaaggca tgaacatggt
4201 tagcagaggc tctagagccg ccggtcacac gccagaagcc gaaccccgcc ctgccccgtc
4261 ccccccgaag gcagccgtcc ccctgcggca gccccgaggc tggagatgga gaaggggacg
4321 gcggcgcggc gacgcacgaa ggccctcccc gcccatttcc ttcctgccgg cgccgcaccg
4381 cttcgcccgc gcccgctaga gggggtgcgg cggcgcctcc cagatttcgg ctccgccaga
4441 tttgggacaa aggaagtccc tgcgccctct cgcacgatta ccataaaagg caatggctgc
4501 ggctcgccgc gcctcgacag ccgccggcgc tccggggccg ccgcgcccct cccccgagcc
4561 ctccccggcc cgaggcggcc ccgccccgcc cggcaccccc acctgccgcc accccccgcc
4621 cggcacggcg agccccgcgc cacgccccgc acggagcccc gcacccgaag ccgggccgtg
4681 ctcagcaact cggggagggg ggtgcagggg ggggttacag cccgaccgcc gcgcccacac
4741 cccctgctca cccccccacg cacacacccc gcacgcagcc tttgttcccc tcgcagcccc
4801 cccgcaccgc ggggcaccgc ccccggccgc gctcccctcg cgcacacgcg gagcgcacaa
4861 agccccgcgc cgcgcccgca gcgctcacag ccgccgggca gcgcgggccg cacgcggcgc
4921 tccccacgca cacacacacg cacgcacccc ccgagccgct cccccccgca caaagggccc
4981 tcccggagcc ctttaaggct ttcacgcagc cacagaaaag aaacgagccg tcattaaacc
5041 aagcgctaat tacagcccgg aggagaaggg ccgtcccgcc cgctcacctg tgggagtaac
5101 gcggtcagtc agagccgggg cgggcggcgc gaggcggcgc ggagcggggc acggggcgaa
5161 ggcaacgcag cgactcccgc ccgccgcgcg cttcgctttt tatagggccg ccgccgccgc
5221 cgcctcgcca taaaaggaaa ctttcggagc gcgccgctct gattggctgc cgccgcacct
5281 ctccgcctcg ccccgccccg cccctcgccc cgccccgccc cgcctggcgc gcgccccccc
5341 cccccccgcc cccatcgctg cacaaaataa ttaaaaaata aataaataca aaattggggg
5401 tggggagggg ggggagatgg ggagagtgaa gcagaacgtg gggctcacct cgacccatgg
5461 taatagcgat gactaatacg tagatgtact gccaagtagg aaagtcccat aaggtcatgt
5521 actgggcata atgccaggcg ggccatttac cgtcattgac gtcaataggg ggcgtacttg
5581 gcatatgata cacttgatgt actgccaagt gggcagttta ccgtaaatag tccacccatt
5641 gacgtcaatg gaaagtccct attggcgtta ctatgggaac atacgtcatt attgacgtca
5701 atgggcgggg gtcgttgggc ggtcagccag gcgggccatt taccgtaagt tatgtaacgc
5761 ggaactccat atatgggcta tgaactaatg accccgtaat tgattactat taataactag
5821 agcttgtgga aggctactcg aaatgtttga cccaagttaa acaatttaaa ggcaatgcta
5881 ccaaatacta attgagtgta tgtaaacttc tgacccactg ggaatgtgat gaaagaaata
5941 aaagctgaaa tgaatcattc tctctactat tattctgata tttcacattc ttaaaataaa
6001 gtggtgatcc taactgacct aagacaggga atttttacta ggattaaatg tcaggaattg
6061 tgaaaaagtg agtttaaatg tatttggcta aggtgtatgt aaacttccga cttcaactgt
6121 ata
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质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P4433/pCMV-SPORT6-FABP5人源基因质粒 |
| P4434/pCMV-SPORT6-MYL6B人源基因质粒 |
| P4435/pCMV-SPORT6-CFL1人源基因质粒 |
| P4436/pCMV-SPORT6-ARHF人源基因质粒 |
| P4437/pCMV-SPORT6-TBC1D22A人源基因质粒 |
| P4438/pCMV-SPORT6-TNFAIP8L1人源基因质粒 |
| P4439/pCMV-SPORT6-TYMP（2同义突变）人源基因质粒 |
| P4440/pCMV-SPORT6-PRKAB1人源基因质粒 |
| P4441/pCMV-SPORT6-IL6人源基因质粒 |
| P4442/pCMV-SPORT6-NUP107（123-2778bp）人源基因质粒 |
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文献和实验相关实验
体克隆DNA大片段±*++-构建基因组文库-++-构建cDNA文库+---常规的亚克隆化+---构建新型的DNA结构+---序列分析+--+单链探针+**--+外源基因在大肠杆菌中的表达+--- *外源DNA如超过10kb，则重组质粒的转化率和DNA得率都非常低 **已有个别质料可用于此目的 四、其他载体 现在提到的分子载体有的不是用于克隆 某基因，而是作为外源基因进入受体细胞的运载工具。 （一）转座子载体 这里主要提一下有关果蝇转座因子（P因子）作为基因载体。因为这是很有希望的真核
。 Silent mutations (沉默突变)：不改变基因产物的突变。 Silent sites (沉默位点)：指突变不影响基因产物的位点。 Simple-sequence DNA (简单序列DNA)：等同于卫星DNA。 SINES：短散布序列，是一类反转座子，以短的散布重复在哺乳动物基因组中出现，来自 RNA 聚合酶III介导的转录。 Single-copy plasmid (单拷贝质粒)：在细菌中以每个宿主染色体一个质粒的比率
。 Simple-sequence DNA (简单序列DNA)：等同于卫星DNA。 SINES：短散布序列，是一类反转座子，以短的散布重复在哺乳动物基因组中出现，来自 RNA 聚合酶III介导的转录。 Single-copy plasmid (单拷贝质粒)：在细菌中以每个宿主染色体一个质粒的比率存在。 Single-strand assimilation (单链同化)：指RecA 蛋白质引起DNA单链替换双螺旋中其同源 链的能力，即能使单链同化进双链。 Single
pT2-Venus哺乳转座质粒
￥100 - 1000
